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【doc】环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用

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【doc】环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用【doc】环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用 环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用 F 复 uda 旦 n 亏 Un 掘 iv ( J2O05‰32(2)Me1dSci一,一?225 环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用 赖顺果杜一鸣章蕴毅 (复旦大学药学院药理教研室上海200032;麒麟鲲鹏药业有限公司上海201203) 【摘要】目的研究环维黄杨星一D(cVBD)对心肌钙离子通道的作用,探讨其抗心律失常的电生理机制.方法 取豚鼠室间隔标本,37?恒温,通混合氧,稳定45min,再以Ka3mol/...
【doc】环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用
【doc】环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用 环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用 F 复 uda 旦 n 亏 Un 掘 iv ( J2O05‰32(2)Me1dSci一,一?225 环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用 赖顺果杜一鸣章蕴毅 (复旦大学药学院药理教研室上海200032;麒麟鲲鹏药业有限公司上海201203) 【摘要】目的研究环维黄杨星一D(cVBD)对心肌钙离子通道的作用,探讨其抗心律失常的电生理机制.方法 取豚鼠室间隔标本,37?恒温,通混合氧,稳定45min,再以Ka3mol/L灌充的微电极记录电刺激产生的动 作电位(AP),标本分为3组:(1)CVt~D组:每5min依次累积加入浓度为3×10,,1×10一,3×10_,1× 】0一,3×10,1×10tool/L的C?D,分别记录AP;(2)CVBD+维拉帕米(Ver)组:加入维拉帕米0.1 mol/L,10min时记录AP,然后每5min依次累积加入浓度为3×10,,1×10,3×10—7,1×10_.,3×10_.,1 ×10tool/L的CVBD,分~)Jie录AP;(3)Vet组:加入维拉帕米0.1t~mol/L, 分别纪录(2)中相应时问点的AP. 统计给药前后AP幅度(APA)和时程(APD)的变化.结果CVB-D对影响不大,但能显着延长APD,延长 幅度随着剂量的加大而增大;但在有维拉帕米存在的情况下,CVB-D却能使APA和APD缩减,尤其是较高浓度 1×10,3×10一,1×10md/L时,缩减幅度较为明显;而单纯加入维拉帕米后,和APD的改变轻微.结 论CVB-D能影响细胞膜上的钙离子通道,促进细胞外钙离子内流,从而延长APD.当膜钙离子通道被阻断 后,Cv】D却缩短APD.因此可以认为CVB-13除影响膜钙离子通道外,还可能影响其他的离子通道,如钾通道 等.根据本实验结果,临床上CVB-D和维拉帕米联合用药时,有引起心律失常的可能,应予以考虑. 【关键词】环维黄杨星D;钙离子通道;钾离子通道;动作电位;抗心律失常 【中国图书馆分类法分类号】R972.2 EffectsofCycl0Vir0buxine-DonCalciumChannelsofMyocardium LAIShun—guo,DUYi—ming,ZHANGYun—yi (DepartmentofPharmacology,SchoolofPharmacy,FudanUniversity,Shanghai200032,China; Kirin—KunpengPharmaceuticalCo.LM,Shanghai201203,China) 【Abstract】 PurposeTostudytheeffectsofcyclovirobuxine—D(CVD)oncalciumchannel sofmy— oeardiumandevaluatetheelectrophysiologicalmechanismofantiarrhythmia.MethodsPreparationsofin— terventricularseptumfromguineapigweregasedwithmixedoxygenandstabilizedfor45minuteswhilethe bathtemperaturewas37? constantly.Actiont~tential(AP)causedbyelectricitywasrecordedviami— cropipettefilledwith3mol/LKC1.Thepreparationsweredividedintothreegroups:(1)CVB-Dgroup: CVB—Dofdifferentconcentrations(3×10一,1×10一,3×10一,1×10 一,3×10一,1×10一)mol/Lwas addedintothebathcumulatelyandAPwasrecordedeveryfiveminutes.(2)CV&D+verapamil(Ver) group:verapamilof0.1mnol/Lwasaddedintothebathfirstly,10minueslater APwasrecorded,thenCVB- Dofdifferentconcentrations(3×10一,1×10一,3×10一,1×10一,3×10 一,1×10一)mol/Lwasadded intothebathcumulatelyandAPwasrecordedeveryfiveminutes.(3)Vergroup:verapamilof0.1prnol/L wasaddedintothebath,AP,atthesametimepointasgroup(2),wasrecorded.Theactionpotentialampli— tude(APA)andactionpotentialduration(APD)ofpre—administrationwitht hoseofpost—administration werecompared.ResultsCVB-DhadfeweffectsonAPA.butitcouldprolongAPDprominentlywith dose—dependentmaimer.CVB—DwasabletocurtallbothAPAandAPDwh ileverapamilexisted.especiallyat highconcentrations(1×10一,3×10 一,1×10)mol/L.However,verapamilhadslighteffectsonAPA andAPD.ConclusionsCVB—Dhaseffectsoncalciumchannelsincellmembrane.ithastenscalciumion „通讯作者:Te::(021)54237554,E—mail:zhcheng@shmuedu.cn 226复旦(医学版)2005年3月,32(2) flowingintothecellandthusprolongsAPD.Whencalciumchannelsareblocked,CVB-Dcouldshorten APD,whichindicatesthatCVB—Dhaseffectsonotherchannels,suchaspota ssiumchannels,etc.According tOtheseresults,itisworthconcerningthatcombinedmedicationofCVB-Dan dverapanlilclinicallymightin— ducearrhythmia. 【Keywords】cyclovirobuxine—D;calciumchannels;potassiumchannels;actionpotential; antiar— rhythmia 环维黄杨星D(cyclovirobuxine—D,CVB—D)是从 黄杨科植物小叶黄杨中提取的甾体生物碱,具有良 好的抗心律失常,抗心肌缺血和强心作用,临床上广 泛用于治疗心律失常,心绞痛和冠心病_1?.电生 理研究表明,CVB-D能延长动作电位时程(APD)和 有效不应期,从而产生抗心律失常作用_3J.但是其 机制到底如何,未见相关的研究报道,大多数学者认 为其抗心律失常作用可能与增加钙离子内流有关, 但也有人推测CVBD可能通过阻断钾离子通道而 产生作用.本实验研究CVB—D对心肌钙离子通道 的作用,探讨其抗心律失常的作用位点. 和方法 药品与试剂CVB-D,南京小营制药厂提供;维 拉帕米注射液,上海禾丰制药有限公司生产,批号 3E12001;Krebs液(mmol/L),NaCl118.07,NaH— CO325.00,glucose10.09,KCl4.69,MgSO47O 1.18,CaC172.52,KH2PO41.18,均为分析纯;浓 HC1,分析纯;实验用水,三蒸水. 仪器Axoclamp2Bcurrentandvoltageclamp, Axoninstruments;VG10dual—beammemoryoscillo— scope,NihonKonden;YEWtype3066penrecorder, YokogowaHokushinElectric;CE一3玻璃微电极拉制 仪,中国科学院上海生理研究所;JJC-4B电刺激器, 上海国泰电讯器材厂;CH1015超级恒温槽,上海衡 平仪器仪表厂. 动物豚鼠,体重250,350g,雌雄不拘,由复 旦大学实验动物中心提供. 方法豚鼠击昏开胸,取出心脏,置于37?预 热的Krebs液中,迅速分离室间隔,固定于标本槽 中,37?恒温,通混合氧(95%O2+5%CO2),稳定 45min.取KCl3mol/L灌充的玻璃微电极穿刺细 胞,stepeornlTland刺激标本使之产生AP,并用记录 仪进行记录.标本分为3组:(1)CVB-D组:每5 min依次累积加入浓度为3×10一,1×10,3× 10—,1×10—0,3×100,1×10一mol/L的CVBD, 分别记录AP;(2)CVB-D+Ver组:加入Ver0.1 /~mol/L,10min时记录AP,然后每5min依次累积 加入浓度为3×10一,1×10一,3×10一,1×10一,3 ×10一..1×10—5mol/L的CVB-D,分另I记录AP; (3)Ver组:加入Ver0.1/zmol/L,分别记录(2)中 相应时间点的AP. 统计学处理统计APA和APD,结果以?S 表示,自身比较检验给药前后APA和APD有无显 着性差异.增幅计算公式:增幅(%) =×100%一给药前APA(APD) 结果 CVB.D对心肌APA和APD的作用CVB-D 对APA影响不大,但能延长APD,延长幅度随着剂 量的加大而增大,结果见表1. 表1CVB-D对心肌动作电位幅度和时程的作用 Tab1EffectsofCVB?DonAPAandAPDofmyocardium(“=5) P<0.05control:()P<0.O1WScontrol 维拉帕米阻断钙离子通道后,CVB.D对心肌 APA和APD的作用在有Ver存在的情况下, CVB-D能使APA和APD都缩减,尤其是较高浓度 (1×10,3×10一,1×10mol/L)时,缩减程度较 为明显,结果见表2;单纯加入Ver,APA和APr)95 的变化并不明显,AP【)5o降幅较大,但比CVB-D-I- Ver组小,结果见表3. 赖顺果,等.环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用227 表2CVB.D和维拉帕米对心肌动作电位幅度和时程的作用 Tab2EffectsofCVB-DandverapamilonAPAandAPDofmyocardium(,=6) P<005control:()P<0.O1tcontrol 表3Ver对心肌动作电位幅度和时程的作用 Tab3EffectsofverapamilonAPAandAPDofmyocardium(,=6) APDs0/APD95比值CVB—D组的AP【)50/ APD95比值近似为一常数,其均值为0.636,加入 Ver后比值下降,10min时大约为0.6,Ver组从15 min开始基本稳定,而CVB-D+Ver组则持续下降, 结果见表4. 表4各组标本的APDs0/API~5比值 Tab4APOs0/API~5ratioofeachpreparationgroup 讨论 以往的电生理研究表明,CVB-D能延长APD 和有效不应期_3j,按照Williams分类法,可将CV D归为?类抗心律失常药.但是其具体机制并不清 楚,一般认为与钙离子有关.梁涛等人用激光共聚 焦显微技术证实CVB-D能升高细胞内游离钙离子 的浓度lj. Ver是典型的钙离子通道阻断剂,能阻断细胞 膜上的钙通道,抑制钙离子内流,降低心脏舒张期自 动去极化速率,使窦房结的发放冲动减慢,自律性降 低,传导减慢,从而产生负性肌力作用.因此被广泛 用来阻断细胞外钙离子内流L6-8J,而汪永孝等人也 证实CVB-D能对抗Ver的负性肌力作用L9J. 本实验的结果为:CVB-D对APA影响不大,但 能显着延长APD,延长幅度随着剂量的加大而增 大;但在Ver存在的情况下,CVB—D却能使APA和 )D缩减,尤其是较高浓度(1×10一,3×10,,1× 10tool/L)时,缩减幅度较为明显;而单纯加入 Ver后,APA和APD95的变化并不明显,APD50降幅 略大,但在Ver30,35和40rain时降幅远比CVB—D +Ver组小. 对比CVD组和CVD+Ver组结果可以发 现,Ver的加入使得CVB-D的作用发生逆反,由原 来的延长APD变为缩减APD,说明CVI~D能影响 膜上的钙离子通道,促进细胞外钙离子内流,从而延 长APD.由CVD+Ver组和Ver组结果可以看 出,CVB-D似乎不仅仅作用于钙离子通道,因为阻 断钙离子通道后,CVB-D+Ver组较高浓度时APA 和APD降幅远比Ver组相应时间点的降幅高,推测 CVD可能作用于钾离子通道. APD5nD95能反映平台期占整个APD的比 例,比值下降说明平台期缩短,从而间接地反映了 Ic~-2,K的变化.CVB-D组APD5oD95比值近 似为一常数,其均值为0.636,加入Ver后比值下 降,10rain时大约为0.6,Ver组从15rain开始基本 稳定,而CVB-D+Ver组则持续下降.这也提示 CVD可能作用于钾离子通道.当然这有待进一 步实验证明. Ver临床上主要用于治疗心律失常,心绞痛和 原发性高血压.对阵发性室上性心动过速最有效, 对房室交界区心动过速疗效亦佳,也可用于心房颤 动,心房扑动及房性早搏,对各型及不稳定型心绞痛 以及冠状动脉痉挛所致的心绞痛,如变异性心绞痛 均有良好疗效.C,,]3-D临床上广泛用于治疗心律 失常,心绞痛和冠心病,心功能不全和脑供血不 足【l,.临床上可能两药合用,然而根据本实验结 果,CVB-D和两药同时存在时,却能使APD明显缩 复旦(医学版)2005年3月,32(2) 减,有引起心律失常的倾向,临床用药应予以考虑. 参考文献 1刘如英.黄杨宁片的临床应用.新药与临床,1997,14(2):l12 2梁涛,方泰惠,姚秀娟,等.环维黄杨星D的药理研究进展.解放 军药学,2001,17(1):35 3汪永孝,郑云敏,谭月华,等.环维黄杨星D抗心房纤颤的作用及 其电生理机制.药学,1996,31(7):481 4梁涛,方泰惠,姚秀娟,等.环维黄杨星D升高心肌细胞内游离钙 浓度实验研究.江苏药学与临床研究,2001,9(1):10 6 7 8 9 梁涛,方泰惠,姚秀娟,等.环维黄杨星D对培养的心肌细胞内游 离钙浓度的影响.时珍国医国药,2001.12(5):388 白琴,汤树本川芎嗪加强豚鼠乳头状肌慢内向电流的作用生理 ,1994,46(5):500 陈志武,马传庚,方明.等金丝桃甙对钙离子内流的影响.药学学 报,1994,29(1):15 唐仲进,王秀英,陈红.等.粉防己碱对大鼠离体主动脉条Ca内 流的影响药学实践杂志,1995,13(2):72 汪永孝,谭月华,盛宝恒.环维黄杨星D与哇巴因等药合用对离 体心肌收缩力的影响.中国药学杂志,1994,29(1):20 (收稿日期:2004—06—15;编辑:沈玲) 一 【上接第191页) 无明显影响.丙泊酚对新生大鼠钙离子跨膜内流的 4ChuL,TakahashiR,NorotaI,etalSignaltransductionandCa 抑制大于对成年大鼠,临床上应引起足够的重 视.sigaalmginconUactleregulat.ioninducedYcrosstalkhetwemen? dothelin?1andnorepinephrineindog,rentricularmyocardium.Circ 尺es.2003.92(9):1024 参考文献 1Rigby.JonesAE,NolanJA,PristonMJ,eta1.Pharmacokineticsof pmpofolinfusionsincriticallyillneonates,infants,andchildreninan intensiveca3xeunit.Anesthesiology,2002,97(6):1393 2LeeYS.Effectsofprol~foltarget—controlledinfusiononhaemody— namicandrespiratorychangeswithregardtosafetyJ[ntMedRes, 2oo4.32(1):19 3SatoJ,SeatoS,JonokosheH,eta1.Correlationandlinearregression betweenbloodpressuredecreasesafteratestdoseinjectionofpropo? folandthatfollowinganaesthesiainductionAnaesthIntensizeCa7”e, 2oo3,31(5):523 5王洪新心肌细胞的分离与培养现代医学实验方法(主编:汪 谦).北京:人民卫生出版社,1997,183 6KanayaN,MurrayPA,DamronDS.Propofolincreasesmyofilanmnt Ca.sensitix+ityandintracdlularpH,,iaactivationofNa一Hex. changeinratvemricularmyoc~esAnesthesiolog3,2001,94(6): 1096 7SekiS,Naga.shirnaM,Yan~adaY,etalFetalandpostnatald”„elop mentofCa2transientsandCa2sparksinrstcardiomyocytesCar— diovascRes,2003,58(3):535 8VoiTtanenM.Contributionofs&rcoleHlITlalcalciumcurrenttotOtal cellularcalciuminposmatall3rde,relopingrathear*Cardi~scRes. 1996,32(2):400 (收稿日期:200405—20;编辑:张秀峰) ,,,,,,,,,,,,0,,0,,0,0,0,,0,0,0,0,,,0sitiveCa2channelsandanaes一 8FangX,SartiP,ZhangJ,eta1.Halothaneandimfluranealtercall— thesia.BritishJournalofAnaesthesia,1996,76:344umdynamicsinratcerebrocorticalsynaptosomesAnesthesiolog3-, 4Hirota.KLambertDG:I.Vanestheticagentsinhibitdihydropyrine1998,87:701 bindingtoL—typevoltage—sensitiveCa2channelsinratcerebrocor一 9MederW,Finkk,ZenmerJ,etalCalciumchannelsinvolvedin tic.a/melTlbrf1.rles.BritishJournalofAnaesthesia,1996,77:248K一 andveratridine—inducedincreaseofc~osoliccalciumconeentra一 5StudyRE:Isofluraneinhibitsmultiplevokage.gatedcalciumcur.tioninhum ancerebralcorticalsynaptosomesPharwTacolandExp rentsinhiplxvampalpyramidalneuronsAnesthesiology,1994,81:Therap,1 990,290:1126 10410HirotaK,KudoM,KudoT,eta1.Inhibitoryeffectsofintravenous endingfrombrain:anesthet 6GrayEG,WhittakerVP:Theisolationofnerve— icagentsonK一inducednorepinephrineanddopaminere? anelectronmicroscopicstudyofcellfragementsderivedbyhomoge—leasefr omratstriatalslices:possibleinvoR?ernentofP/Q—type,?.h— sensitiveCa2channels. nizationandcentrifugation.JAnat.1962.96:79age— BritishJournalofAnaesthesia,2000, 7GrynkiewiczG,PoenieM.TsienRY:AnewgenerationofCain一85(6):874 (收稿日期:2004…0520滔辑:刘忠英)
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