用双标稳定同位素技术分析乳糖酶缺乏者小肠粘膜乳糖酶活性

用双标稳定同位素技术分析乳糖酶缺乏者小肠粘膜乳糖酶活性 用双标稳定同位素技术分析乳糖酶缺乏者 小肠粘膜乳糖酶活性 第34卷第3期 3122005年5月 卫生研究 JOURNALOFHYGIENERESEARCH Vo1.34No.3 May2005 文章编号:1000.8020(2005)03—0312—04 用双标稳定同位素技术分析乳糖酶缺乏者 小肠粘膜乳糖酶活性 钟燕黄承钰阴文娅VonkILl 四川大学华西公共卫生学院,成都610041 ? 论着? ..''"".'"".."".".."一" i达售营养中心: DANONEINSII'ru'I~CHINA! 青年科学工作者论坛! iYoungScIroaama! .I1.??.????…????l???l' 摘要:目的应用双标稳定同住素"c.乳糖,H.葡萄糖负荷试验对乳糖酶缺乏者小肠粘 膜乳糖酶活性进 行定量分析.方法选用43名乳糖酶缺乏者(呼气AH浓度>20~tmol/mo1)作为实 验对象,根据乳糖不耐受 症状记录分为乳糖吸收不良组(LM)和乳糖不耐受组(LI).以25g"C.乳糖和0.5gH 一葡萄糖作为受试底物, 分析受试者摄入底物之后各时点血浆中总葡萄糖,"c一葡萄糖和H.葡萄糖浓度, 并计算各时点"c一葡萄糖 /2H.葡萄糖吸收百分率的比值,以45rain,60min,75min三个时点所得比值的均值作 为乳糖消化指数(LDI)来反 应小肠乳糖酶活性.结果乳糖吸收不良组和乳糖不耐受组两组各时点血浆总葡萄 糖,"c.葡萄糖无显着 性差异.乳糖吸收不良组的乳糖消化指数显着高于乳糖不耐受组(0.47?0.150.34 ?0.14);乳糖消化指数 与6h累积H呼出量无显着性相关关系(r=0.12,P=0.46);经H呼气试验结果判定为 乳糖酶缺乏的个体, 经"c一乳糖,H.葡萄糖负荷试验分析显示小肠粘膜仍存在一定乳糖酶活性.结论采 用双标稳定同住素c一 乳糖,H.葡萄糖负荷试验可以准确,灵敏地定量分析小肠粘膜乳糖酶活性,同时可 以计算体内乳糖消化量. 关键词:乳糖酶缺乏稳定同位素"c.乳糖/H.葡萄糖负荷试验 中图分类号:Q533.3Q591.4文献标识码:A Analysisoflactaseactivitiesofsmallintestinemucousmembranebydouble labeledstableisotopetechniqueinsubjectswithlactasedeficiency ZhongYan,HuangCheng—yu,YinWen—ya,VonkRJ DepartmentHua)【iSchoolofPublicHealth,SichuanUniversity,Chengdu610041.China Abstract:ObjectiveLoWlactaseactivityinsmallintestinemucosaiSthemainreasonfortheoccurrenceoflactose malabsorption(LM)andlactoseintolerance(LI).ItwouldbethebasisfortheresearchonLMandLItOfindanaccurate methodtoanalyzetheactivityoflactase.MehtodsInthisstudy,43volunteerswereselectedan ddividedintoLMandLI groupaccordingtotheresultsofH2breathtestandsymptomsrecord.Twenty—fiveamsof? C—lactoseand0.5gH—glucose in250mlsolutionwereconsumedbyallthevolunteers.Theconcentrationoftotalplasmagluc ose."C—glucoseandH— glucoseweremeasured,theratioof["C-glucose]/[H— glucose]andlactosedigestionindex(LDI)werecalculatedwhich couldreflectthelactaseactivitiesinthemucousmembraneofsmallintestine.ResultsItwasfo undthattherewasno significantdifferenceintheconcentrationoftotalglucoseand"C— glucose,whiletheLDIinLMgroup(0.47?0.15)was significantlyhigherthanLIgroup(0.34? 0.14).TherewasnosignificantrelationshipbetweenLDIand6hcumulative breathH2amount(r=0.12,P=0.46).The"C—lactose/H— glucosechallengedtestshowedtherewasstillresidual lactaseactivityinsinailintestine.ConclusionItwasconcludedthat"C1actose/H— glucosetestcanaccuratelyand sensitivelydeterminethelactaseactivityonsmallintestinalmucousmembraneanddigestibl elactoseamount. Keywords:lactosedeficiency,stableisotopes,C—lactose/H—glucosechallengedtest 原发性乳糖酶缺乏(primarylactasedeficiency,LD)在世界 范围内普遍存在,几乎影响到全世界一半以上的人口,与人类 健康密切相关.根据乳糖酶缺乏者摄人乳糖之后有无临床症 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30271126) 作者简介:钟燕,女,博士,现为第二军医大学长海医院临床营养 博士后 1通讯作者 2Groningen大学,荷兰 状可分为乳糖不耐受(1actoseintolerance,LI)和乳糖吸收不良 (1actosemalabsorption,LM)两种情况.. 长期以来,H,呼气试验是进行乳糖酶缺乏研究的主要手 段,但是该方法有较高的假阳性和假阴性结果,不能准确对乳 糖酶活性进行定量分析.小肠粘膜活检法是传统的"金标准" 方法,但由于对受试者具有创伤性使取材极为困难,用于实际 研究可行性极差.因此,在乳糖酶缺乏的研究中迫切需要 建立一种准确可靠的分析小肠粘膜乳糖酶活性的方法. 本研究在稳定性同位素"c.乳糖负荷试验的基础上对该 第3期钟燕,等.用双标稳定同位素技术分析乳糖酶缺乏者小肠粘膜乳糖酶活性 313 方法进行改进,同时给予H.葡萄糖,建立了双标稳定同位素 "c一乳糖,H.葡萄糖负荷试验分析人小肠粘膜乳糖酶活性的 方法,并对乳糖吸收不良者和乳糖不耐受者的乳糖酶活性水 平进行比较. 1材料与方法 1.1主要仪器ECA一180 葡萄糖分析仪(Medingen,德国);气相色谱,质谱联用仪 (FinniganMAT,Finniganssqvooo);HP5980气相色谱仪(惠普 美国);气相色谱,燃烧,同位素比质谱联用仪(GC/ 公司, Combustion/IsotopeRatioMassSpectromessy,IRMS,Finnigan MAT,德国);7-放免计数仪(ERIADiagnosticsPasteur,法国); H,呼气仪(Hmonitor,type60HP,德国),试验调零并用96 gmol/mol标准H'校正. 1.2主要材料和试剂 静脉留置针(BectonDickinsonGMBH,德国);真空血样收 集管(每管含5mg氟化钠和4mg草酸钾,BD公司,德国);胰 岛素放免分析试剂盒(LINCO公司,美国);"C一乳糖(由荷兰乳 制品研究所提供,荷兰);6,6一H一葡萄糖(纯度为98%,Isotec 公司,美国). 1.3对象 通过H,呼气试验筛选43名乳糖酶缺乏受试对象(口服 25g乳糖之后呼气H浓度值与空腹基础H浓度值之差? >20~tmol/mol,男性21名,女性22名,年龄22,56岁).所有 实验对象于实验前3天开始禁止食用天然富含"c.乳糖的食 物(如蔗糖,玉米,菠萝及其制品).试验前一天晚餐集中进 餐,避免食用牛奶及其制品,豆制品,葱,蒜及其它富含膳食纤 维的食品等;试验前至少禁食12h,实验开始后2h内不能进 食,饮水,2h后可以饮水. 1.4方法 1.4.1"C.乳糖,H一葡萄糖负荷试验实验日清晨,于受试 者肘前静脉处插入留置针,在给予受试者受试底物前15min 抽取一次2ml静脉血,作为空白基础值.准确称取25g"C一乳 糖和0.5gH一葡萄糖溶于250ml温水中,让受试者在2min内 饮完,在摄入乳糖后的2h内每15min通过留置针抽取2ml静 脉血,置于真空血样收集管中,并立即冰浴降温,900r/min离 心lOmin,取血浆置于塑料离心管,一8O?保存至分析.呼气 收集持续6h,在摄入乳糖后的头4h内每15min收集1次气 ,后2h每30min收集1次,采用20ml一次性注射器,受试者 体 缓慢吹气,收集末段1/3呼出气,然后立即用H呼气仪测定 H浓度;各时间点的实测值减去空腹基础值作为各时间点 H实际浓度值. 1.4.2症状记录和评分记录受试者摄入乳糖后12h内出 现的腹部不适症状(腹胀,腹痛,腹泻),同时询问其健康史,饮 奶史和一般情况.乳糖不耐受症状分腹胀,腹痛,腹泻,其评 分系数分别为2,3,4;症状严重程度分类如下:(1)腹胀,腹痛: 0无症状,1轻度不适,2中度不适,3重度不适;(2)腹泻:0大 便正常,成形,1疏松软便,2水样便.症状评分(SSC)为各症 状评分系数与其严重程度乘积之和. 1.4.3对象分组根据记录症状评分结果将实验对象分为 乳糖吸收不良组(SSC=0,未出现不耐受症状,LM组)15人,乳 糖不耐受组(SSC?1,有不耐受症状,u组)28人. 1.4.4分析血浆"c一葡萄糖和H.葡萄糖浓度 1.4.4.1血浆总葡萄糖浓度取loota血浆样品,采用葡萄 糖氧化酶法,用ECA一180血糖分析仪分析. 1.4.4.2血浆"c一葡萄糖浓度参考Vonk等报道的"c一葡萄 糖分析方法].取100/,1血浆样品,加入lml乙醇使血浆蛋白 变性,离心后取上清液,蒸发至干燥.将干燥物置于丁酸硼酸 乙酸盐衍生物混合液中,室温下反应1.5h,再蒸发至干燥后 加入5oovJ氯仿,应用气相色谱,燃烧,同位素比质谱联用仪 (IRMS)分析"c/l2c一葡萄糖比率(8"CPDB). 1.4.4.3血浆H一葡萄糖丰度采用气相色谱,质谱分析法 (GC/MS).将2l丁酸硼酸乙酸盐衍生物注入毛细管气相色 谱仪的AT1701毛细管柱分离,色谱柱通过连接器与离子源质 谱仪的熔融石英管连接,界面温度280~C.采用电子冲击波 电离模式,离子检测分别在离子m/z(质荷比)242(M0)和244 (M2)处,离子捕获时间为lOOMs(兆秒). 1.4.4.4血浆胰岛索取150gl血浆样品采用放免法分析. 选用的抗血清与人胰岛素呈100%交叉反应,与胰岛素原呈 40%交叉反应. 1.4.5指标计算 1.4.5.1血浆"c一葡萄糖浓度计算将分析所得的8"CPDB 数值转化成原子百分比(atompercentage,AP),摄入乳糖后的 AP值通过基线丰度校正.血浆"c,c一葡萄糖比值被转化成 "c原子百分比,血浆[c一葡萄糖]浓度(mmol/L)计算如下: ["c.葡萄糖]浓度:AX(B—c)/(D—C)……(1) 式(1)中:A一血浆总葡萄糖浓度,一摄入底物后某时间点 (t)血浆"C原子百分比(计算见公式2) c一摄入"c.乳糖前基础血浆的"c原子百分比, D一所摄入的"c一乳糖底物中的"c原子百分比. 某时间点(,)的血浆"c原子百分比计算采用公式2: "c原子百分比=(16XA,一10XB)/6……(2) 式(2)中:A一血浆"c一葡萄糖经乙酸盐衍生反应之后的"c 原子百分比,B,=(16XC,一6×D,)/lO……………(3) 式(3)中,G一衍生反应后的参考葡萄糖"c原子百分比, D一参考葡萄糖"c原子百分比, "c.葡萄糖吸收百分率 : ["C一葡萄糖]浓度C一乳糖]摄入量……(4) 1.4.5.2血浆H.葡萄糖浓度计算 GC/MS测得的M2/M0面积比通过校准曲线转化为摩尔 比,乘以血浆总葡萄糖浓度得到血浆[H一葡萄糖]浓度 (mmol/L). H一葡萄糖吸收百分率 =[H.葡萄糖]浓度,H一葡萄糖摄入量……(5) 1.4.5.3乳糖消化指数(1actosedigestionindex,LDI)计算 计算各时点"c一葡萄糖,H.葡萄糖吸收百分率的比值,预 试验结果显示受试者在45,60,75min三个时点血浆葡萄糖吸 收率相对比较稳定,因此我们采用这3个时点比值的均值作 为乳糖消化指数来反映小肠粘膜乳糖酶活性. 1.4.5.4累积呼出量的计算 某时间点的累积呼出量 : [(某时间点实际浓度值,2+ 3l4卫生研究第34卷 上一时间点实际浓度值/2)× 两次测量时间间隔(min)/60]……(6) 1.4.6数据处理及统计分析实验数据采用SPSSfor Windows(10.0)软件进行统计分析. 2结果 2.1LM组和LI组血浆总葡萄糖,"C.葡萄糖浓度比较 图l,图2显示乳糖吸收不良组和乳糖不耐受组受试者 摄入25g"C.乳糖和0.5gH.葡萄糖之后各时点血浆总葡萄 糖和C.葡萄糖浓度变化.摄入受试底物后血浆总葡萄糖浓 度升高不明显,30min时达到峰值,两组浓度无显着性差异;两 组血浆c.葡萄糖浓度低于血浆总葡萄糖浓度,均比基线值 明显升高,75min时浓度达到峰值,乳糖吸收不良组浓度略高 于乳糖不耐受组,但组间差异无显着性. 600 56o 52O 440 40o — -.一LM---41--LI 图1乳糖吸收不良组和乳糖不耐受组摄入 受试底物之后血浆总葡萄糖浓度 Fig.1Thel~talglucoseconcentration inpI?aofLMandLIgroup 一 30o 蔓25O 0 l2.00 l5o 100 .. 000 01530456075901O512O t/min —- ?一LM---41--LI 图2乳糖吸收不良组和乳糖不耐受组摄入受试底物 之后血浆c.葡萄糖浓度 Fig.2"C-glucoseconcentration inplasmaofLMandLIgroup 2.2血浆H.葡萄糖浓度和胰岛素浓度分析 两组对象摄入受试底物后血浆H.葡萄糖浓度均先升高 再降低,与血浆总葡萄糖曲线相似.乳糖不耐受组血浆H.葡 萄糖浓度升高值大于乳糖吸收不良组,但无显着性差异(图 3).乳糖吸收不良组与乳糖不耐受组胰岛素浓度呈先升高再 降低的变化,乳糖不耐受组峰值浓度大于乳糖吸收不良组,但 两组无显着性差异(图4).30min时H.葡萄糖浓度和胰岛素 浓度同时达到峰值. O0o 01530456075901O512O t/min — ._-LM---41--LI 图3乳糖吸收不良组和乳糖不耐受组摄入C.乳糖,2H. 葡萄糖之后血浆H.葡萄糖浓度 Fig.3H-glucoseconcentrationinplasmaofLMandLIgroup 0l530456075901O512O t/min — ._-LM---41--LI 图4乳糖吸收不良组和乳糖不耐受组摄入C.乳糖 ,2H-葡萄糖之后血浆胰岛素浓度 Fig.4Insu~nresponseinpl?aofLMandLIgroup 2.3乳糖消化指数 图5显示摄入25g"C-乳糖和0.5gH.葡萄糖之后两组 皇 三 王H U t/min — _.一LM—?卜一L 图5乳糖吸收不良组和乳糖不耐受组摄入"C.乳糖,2H. 葡萄糖后血浆"C-葡萄糖,2H-葡萄糖吸收百分率比值 Fig.5Theratioof"C-glucose/zH-glucoseinplasm81fief consumptionof25g"C-lactoseandO. 5gH-glucose 各时点的"c.葡萄糖,H.葡萄糖吸收百分率比值,两组的比值 均呈升高趋势,在15min,45min,60min,75rain时点乳糖吸收不 良组显着高于乳糖不耐受组(P<0.05).乳糖吸收不良组的 如? OOO —10l一8;}{ O5O5O5O5O 43322OO OOOOOOOOO OOOOOOOOO 一鼍0一Q0【1i0一皇等 一Iogg一0u;一0 第3期钟燕,等.用双标稳定同位素技术分析乳糖酶缺乏者小肠粘膜乳糖酶活性 315 乳糖消化指数和乳糖消化量显着高于乳糖不耐受组(P< 0.05)(表1).乳糖消化指数与6h累积H呼出量(r=0.12, P=0.46)之间没有显着性相关关系. 裹1乳糖吸收不良组和乳糖不耐受组的 乳糖消化指数和乳糖消化量 Table1Comparisonofthelactosedigestionindex(LDI) amountoflactosedigestioningroupLMandgroupLI 注:(1)P<0.05 2.4"C.乳糖广H.葡萄糖负荷试验和"C.乳糖负荷试验, 呼气试验结果比较 参照Vonk等的研究结果],以"C.乳糖负荷试验中"c.葡 萄糖浓度<2.0mmol/L(60rain时间点),"c.乳糖,H.葡萄糖负 荷试验中乳糖消化指数<0.46作为判断乳糖酶活性低的标 准,结果显示在乳糖吸收不良和乳糖不耐受组中,均有部分个 体酶活性低,部分个体仍保持一定酶活性;与应用"c.葡萄糖 试验的结果相比,采用乳糖消化指数值分析所得酶活性低者 的人数有明显增加(表2). 裹2不同试验方法确定乳糖不耐受者检出率的比较 Table2ComparisonoftheprevalenceofsubjectswithLM orLIinthedifrerenttrials% 3讨论 乳糖酶缺乏是一个广泛存在的公共卫生问题,由此引发 的饮奶问题和钙缺乏问题与人民健康密切相关.我国是乳糖 酶缺乏和乳糖不耐受的高发地区,进行与之相关的研究对提 高国民健康素质具有更加重要的意义.准确,高效的检测小 肠粘膜乳糖酶活性则是研究乳糖不耐受的基础. 3.1双标稳定同位素G乳糖,H.葡萄糖负荷试验检测小肠 粘膜乳糖酶活性方法学探讨 视为"金标准"方法的小肠粘膜活检法是分析乳糖酶活性 最直接的方法,该方法从小肠组织取材直接测定酶的活性,因 此可以提供乳糖酶是否缺乏的直接证据,而且可以排除因小 肠粘膜病变引起的继发性乳糖酶缺乏的可能性,可作为其他 非直接检测法的参考方法].但是该方法的缺陷,一是活检 对受试者具有创伤性而难于在科研中实施,二是因为小肠各 段的乳糖酶活性存在一定差异,而活检只能取材某一点,因此 不能全面反映整个肠段的酶活性水平. 目前u研究中应用最多的方法是H'呼气试验.未被小 肠消化的乳糖进入结肠后在结肠菌群的作用下可以产生H, c02等肠道气体,迅速被肠壁吸收后进入血液并通过肺呼出, 因此通过测量并计算累积H呼出量可以粗略反映进入结肠 的乳糖量,并在一定程度上体现小肠乳糖酶活性,一般以呼气 H2浓度升高值大于20t~mol/mol作为判断乳糖酶缺乏的标准. 该方法简便易行,在临床和流行病学研究中应用较广.但是 因为呼气浓度受许多因素的影响,该方法有一定的假阳性率 和假阴性率J.主要影响因素包括,?个体之间结肠菌群构 成不同,不同细菌发酵乳糖产生的能力不同;?当结肠腔 pH降低会减少产H量;?当出现急性腹泻时,呼气中H2含 量也减少;?当小肠细菌异常增多时,也会造成假阳性结果的 出现.此外,睡眠,运动,吸烟,服用阿斯品林,抗生素等药物, 以及摄入高膳食纤维均会异常改变H2呼出量.同时,该 方法虽然能够对个体乳糖酶是否缺乏作出判断,但却无法定 量分析小肠乳糖酶活性和乳糖消化能力. 当给予受试者稳定同位素"c.乳糖时,"c.乳糖在小肠粘 膜乳糖酶作用下水解为葡萄糖和半乳糖而吸收入血,通过测 量血中"c.葡萄糖浓度,能区分来自摄入乳糖的外源性和内 源性葡萄糖,从而较准确地反映小肠对乳糖的消化能力]. 然而,单独给予c.乳糖为受试底物来测定乳糖酶活性 不能排除机体其它代谢因素,如胃排空,肠吸收与转运,胰岛 素水平等对血浆"c.葡萄糖浓度的影响,因此本研究对该方 法进行了改进,同时给予受试者0.5gH.葡萄糖作为参照受 试物,采用"C.乳糖,H.葡萄糖双标稳定性同位素技术分析乳 糖消化指数,以避免此缺陷.因为H葡萄糖从胃进入小肠 后,不需消化即直接被肠粘膜吸收,其血浆浓度的变化主要与 胃排空,肠转运,肠吸收能力,胰岛素等因素有关,这些因素也 同样作用于"c.乳糖的代谢.因此,通过计算摄入这两种稳 定性同位素后血浆"C.葡萄糖,H.葡萄糖吸收百分率比值和 乳糖消化指数能准确反映小肠粘膜乳糖酶活性]. 本研究中乳糖吸收不良组对象的乳糖消化指数显着高于 乳糖不耐受组,此结果充分证实了用双标稳定性同位素技术 对小肠粘膜乳糖酶活性分析方法的有效性.因此,可以认为, 与单独使用"c.乳糖相比,"c乳糖,H.葡萄糖负荷试验可以 更有效特异地检测小肠粘膜乳糖酶活性. 本研究中用H呼气试验对乳糖吸收不良和乳糖不耐受 单独给予"c.乳糖试验对乳糖吸收不良和乳糖 检出率最高, 不耐受检出率最低,用双标同位素技术检出率稍高于后者. 表2结果也进一步说明这些乳糖酶缺乏个体的乳糖酶活性低 是相对的,与单独采用"c.葡萄糖浓度进行分析相比,乳糖消 化指数分析所得的酶活性低的个体数量增加,可认为与排除 了上述代谢因素的干扰有关.血浆胰岛素浓度分析结果证实 两组之间没有显着性差异,可以认为胰岛素在两组的作用基. 本是一致的. 研究结果未发现乳糖消化指数与6h累积H,呼出量之间 有显着性相关关系存在.由于H呼出量除与乳糖酶活性有 关外,还受N4,肠以外的其他因素影响,因此单独使用H,呼 气试验分析结果时应予以注意. 3.2两组测定结果的比较 本研究中两组对象在摄入"c.乳糖之后,血浆"c.葡萄糖 浓度低于血浆总葡萄糖浓度,二者之差值即为内源性葡萄糖 浓度.乳糖吸收不良组对象血浆"c.葡萄糖浓度略高于乳糖 不耐受组,而其血浆H.葡萄糖浓度低于乳糖不耐受组,这充 分体现了人体内有效和谐的血糖调节机制.两组对象血浆" c.葡萄糖浓度峰值比H.葡萄糖浓度峰值出现更晚,这证实了 经口摄入的乳糖比葡萄糖消化更慢. 本研究实验对象均为基因决定的乳糖酶缺乏者,他们在 第34卷第3期 3162005年5月 卫生研究 JOURNALOFHYGIENERESEARCH Vo1.34No.3 Mav2005 文章编号:1000—8020(2005)03.0316.03 p.胡萝b素对大鼠DNA氧化及烷化损伤影响的研究 梁惠韩磊马爱国 青岛大学医学院医学营养研究所,青岛266021 ? 论着? 摘要:目的研究胡萝卜素(c)对大鼠DNA氧化及烷化损伤的影响,初步探讨其抗氧化作用机制. 方法将大鼠随机分为5组,分别为C缺乏组(C1组),补充0.071mg/(kg?d)(C2 组),0.355mg/(kg?d)( c3组),4.28rag/(kg?d)(c4组),15,0mg/(kg?d)(c5组).微量荧光法测大鼠血浆中VA含量;单细胞凝胶 电泳(SCGE)观察淋巴细胞DNA氧化损伤状况;高效毛细管电泳法测尿中06一甲基鸟嘌呤(06一MeG)的排出 量.结果经8周干预后,四个c补充组血浆中VA的水平为276,306ttg/L,缺乏组血 浆中VA的含量为 135t~g/L,明显低于补充组(P<0.O1).DNA损伤结果显示:缺乏组大鼠淋巴细胞 DNA自发性损伤明显高于补 充组(P<0.01).H0诱导的淋巴细胞氧化损伤,4.28mg,(kg?d)组淋巴细胞氧化损伤 明显低于其他4个组 (P<0,01).C各补充剂量组的06一MeG的排出量在第6周和第8周时均明显低 于缺乏组(P<0.05). O6.Me出量并未随着补充剂量的增加而减少,4.28mg/(kg?d)组尿中06一MeG排 出量在第8周时最低.结 论C较长时间缺乏可导致DNA自发损伤,H诱导的氧化损伤以及烷化损伤均明显 增加;大剂量C 15.0mg,(kg?d)补充对DNA损伤无明显防护作用,适量摄入C4.28mg,(kg?d)可发挥 较好抗氧化及降低烷 化损伤的效果. 关键词:胡萝卜素单细胞凝胶电泳抗氧化DNA损伤0一甲基鸟嘌呤 中图分类号:Q562Q754文献标识码:A Effectofp-carotenesupplementationonDNAoxidativeandalkylation damageinrats LiangHlli,HanLei,MaAi?guo InstituteofHumanNutritionMedical,CollegeofQingdaoUniversity,Qingdao266021,China Abstract:0bjeetiveToinvestigatetheeffectofcarotene(C)supplementationonDNAoxidativeandalkylation damageinrats.MethodsRatswererandomlydividedintofivegroups.ThefirstgroupwasnoC,andthesecond,the third,theforthandthefifthgroupsweredailysupplementedwith0.071,0.355,4,28and15.0mg/(kg.d).Thecontent ofplasmaVAwasanalyzedbyfluorescentspectrometry.DNAdamageandoxidativedamageinducedbyH202were detectedbysin~e?cellgelelectrophoresis(SCGE)and一Methyl—guanine(O6一 MeG)wasmeasuredbyhighperformance capillaryzoneelectrophoresis.ResultsAfter8weekstrial,theresaltsshowedthatlevelsofpla smaretinolconvertedfrom Cdecreasedby135tLg/Linthep?Cdeficiencygroup,whichweremuchlowerthan276— 306t~g/LinotherfourC 摄入c.乳糖之后血浆c.葡萄糖浓度都出现明显升高,说明 即使是乳糖吸收不良,甚至是乳糖不耐受对象体内仍然残存 有乳糖酶活性,与Vonk等的研究结果一致…,此研究结果为 乳糖不耐受者可摄入适量牛奶提供了重要的理论依据. 4参考文献 1ScrimshawNS.MurrayEB.Prevalenceoflactosemaldigestion.AmJ ClinNutr,1988,48(supp1):1086-1098 2KarryA,JacksonBS,SavaiarIoDA.1actosemaldigestion,calciumintake andosteopomsisinAfrican-,Asian-.andHispanic-Americans.JAm CollNutr,2001,20(supp1):198-207 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30070659) 作者简介:梁惠,副教授,在读博士 1青岛大学医学院附属医院 2通讯作者 3BondJH,LevittMD.Quantitativemeasurementoflactoseabsorption. Gastroenterology,1976,57:1058-1062 4VonkRJ,LinY,KoetseHA,eta1.1actose(ma1)digestionevaluatedby theC.1actosedigestiontest.EurJClinInvest,2000,30:140.146 5VonkRJ,StellaardF,PriebeMG,eta1.The"C/H.ucosetestfor determinationofsmallintestinallactaseactivity.EurJClinInvest.2001, 31:226.233 6NewcomerAD,McGillDB,TomasPJ,eta1.Prospectivecomparisionof indirectmethodsfordetectinglactasedeficiency.NEHSlJMed,1975, 293:232.235 7ChristiSU.Production,Metabolism,andExcretionofhydrogeninthe largeintestine.Gastroenterology,1992,102:1269-1277 8钟燕,黄承钰.用H2/CO2呼吸试验检测乳糖不耐受者呼气成分的 研究.卫生研究,2OO2,31(2):180-183 9NormandS,PachiaudiC,KhalfallahY,eta1.Cappearanceinplasma ~ucosestarchyfoodinnormalhumans.AmJClinNutr,1992,55:43 435 (2OO4-O7.15收稿)