【doc】川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血后额叶、丘脑、小脑病理形态改变的影响

【doc】川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血后额叶、丘脑、小脑病理形态改变的影响 川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血后额叶、丘脑、 小脑病理形态改变的影响 NervousDiseasesandMentalHealth,2004,Vo1.4,No.4 川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血后额叶,丘脑,小脑病理 形态改变的影响 楚冰邵国富周旭平 【摘要】目的观察大鼠一侧大脑中动脉闭塞(MCA0)后两侧额叶,丘脑,小脑细胞形 态学变化及 川芎嗪的干预作用.采用线栓法建立大鼠一侧大脑中动脉闭塞模型,按实验需 要将实验动物分 成正常,单纯缺血及川芎嗪干预组;用HE染色和TUNEL法观察两侧额叶,丘脑,小 脑MCA0后6h, 24h,1w细胞形态学变化.结果同侧额叶,丘脑MCA0后6h开始出现TUNEL阳性 细胞,24h后明 显增加,至1周阳性细胞减少(P<0.01),而对侧丘脑,额叶及两侧小脑未见明显细 胞形态学改变;干 预组同侧额叶,丘脑凋亡阳性细胞数明显减少(P<0.05).结论川芎嗪能增加 MCA0后远隔部位的 脑灌注,减轻远隔部位的脑功能障碍. 【关键词】MCA0凋亡神经机能联系不能川芎嗪 InterventionEtofLigustrazineonPathologyofFrontalLobes,Thalamuses,Cerebellumsaft erFocalIs- chemiainRats"Bing,ShaoGuofu.0"Xuping.(NeurologyDepartmentofthe2ndHospital AffiliatedtOSuzhouCollege,Suzhou215000) [Abstract]ObjectiveToobservethecellmorphologyofbilateralfrontallobes,thalamuses,ce re— bellumsafterunilatera1MCAOandinterventioneffectof1igustrazine.MethodsToestablish amode1ofuni— lateralMCAOinrataccordingtOZeaLonga'Smethodanddivideanimalsintonormalgroup,ischemicgroup andtreatmentgroup;Toobservecel1morphologyat6h,24h,1wvariablyafterMCAObyTUNELmethod andHEmethod.ResultsWefindTUNELpositivecellsinfronta11obethalamusofthesamehemisphere about6hafterMCAO,andincreasemoresignificantlyat24h,thendecreaseatlw(P<0.01).The TUNELpositivecellsdecreaseinthegroupthosereceivedLZcomparedwiththosewithoutLZ(P< 0.05).ConclusionsLigustrazinecanincreasetheperfusionoffrontal1obes,thalamuses,cerebellums. [Keywords]MCAOAptosisDiaschisisLigustrazine 中圈分类号:R743文献标识码:A文章编号:1009—6574(2004)04—0250—02 脑局灶损害后可引起远隔区域的脑组织形态改 变l_1],但其发生还不明确.本研究拟建立一侧 大脑中动脉闭塞(MCA0)模型,观察MCAO后远隔 部位(额叶,丘脑,下丘脑,小脑)病理形态改变,探讨 其发生机制及川芎嗪的干预作用. 1材料与方法 1.1动物来源与分组苏州大学医学院实验动物 中心提供的健康Sprague--Dawley大鼠,体重250, 300g,20只,按实验需要随机分组:正常对照组:5 只,以观察两侧额叶,丘脑,小脑组织细胞形态; MCAO后病理形态观察组:15只,观察MCAO后缺 血1h再灌注6h,缺血1h再灌注24h,缺血1h再 灌注1w时额叶,丘脑,小脑病理形态改变. 1.2主要实验试剂凋亡细胞原位试剂盒 (P0D法),由宝灵曼公司提供.具体操作按细胞凋 亡检测试剂盒提供的步骤进行. 1.3药物来源与用法盐酸川芎嗪注射液(Injectio LigustrazineHydrochloridi,简称LZ或川芎嗪),由 常州制药厂生产,每支2ml,含盐酸川芎嗪40mg. 在大鼠一侧MCAO前半小时,按50mg/kg (2.5ml/kg)腹腔注射. 作者单位:215000苏州大学附属第二医院神经内科 ? 论着? 1.4方法 1.4.1动物模型制作参照ZeaLongaE.法,分离 并暴露右侧颈总动脉(commoncarotidartery, CCA),颈外动脉(externalcarotidartery,ECA),颈 内动脉(internalcarotidartery,ICA),结扎ECA及 其分支,于ECA近分叉处作一小切口,插入栓线,插 入深度(18.54-_0.5)mm,使栓线进入ICA,阻断 MCA的所有血液来源,待缺血1h后,轻轻提拉线 头,实现再灌注.模型成功的标志是术后动物出现 同侧Horner征及动物麻醉清醒后出现以左前肢为 主的偏瘫. 1.4.2组织病理形态学观察将大鼠分别于缺血 后6h,24h,1w断头取脑,放入10福尔马林中固 定.参照大鼠立体定位图谱[3],分别于前囟前3mm, 前囟后2mm,小脑幕下冠状面切取2mm厚组织,即 额叶,丘脑,小脑组织,常规HE染色,光镜下观察脑 组织形态. 1.4.3TUNEL阳性细胞评定及计数TUNEL阳 性信号位于细胞核内,为棕黄色.TUNEL阳性细胞 计数:在同一切片中,高倍镜下任取10个场景,然后 取平均值. 1.5统计学处理各部位不同时限凋亡细胞采用 方差,P<0.05有统计学意义. 神经痍病与精神卫生2004年第4卷第4期 2结果 2.1HE染色正常组织细胞形态规整,细胞核完 整;一侧MCAO后6h,光镜下即见梗塞灶同侧额叶 神经元肿胀.核固缩.呈缺血性改变;同侧丘脑亦见 类似改变,部分遇域甚至神经元退变消失;对侧额 叶,丘脑及幕下小脑半球神经元外观正常,未见明显 变化.至MCAO后24h上述变化最明显,同侧额 叶,丘脑可见大量缺血性改变的神经元1w时可见 局部有炎症细胞渗出,脏质细胞增生明显.偶见缺血 性改变的神经元.干预组MCAO后同侧额计,丘脑 仅见少许细胞肿胀,胞核深染,固缩的神经元,大部 分神经元外观正常. 2.2TUNEL标记结果光镜下见正常组织切片 HE复染后细胞保持原有的生长形态,细胞核染成均 一 的蓝色.MCAO后6h.病灶同侧额叶,丘脑均可 见TUNEL阳性的凋亡细胞,掏亡细胞数分别为 34.3O?4.04和42.4O?3.0S;MCAO后24h凋亡 细胞最多,同侧额叶及丘脑凋亡细胞数分别达到 198.00士2.SS及239.80士4.16;1w时凋亡细胞偶 见(P<0.01),而对侧额叶,对侧丘脑,两侧小脑在 MCAO后上述时段内未见TuNEL阳性纽魁!I【芎 嚷干预组.同侧额叶,丘脑仍可见少许染成棕褐色的 TUNEL阳性细胞.特别是MCAO后24hTUNEL 阳性细胞较多;计数同侧额叶,丘脑凋亡细胞数与 未用药组比较,示干预组凋亡细胞明显减少(P< 0.01)见表1.图1,2. 裹l干硬蛆与束干硬量不同舔位鹕亡饿鹈煞比鞍 - = : : } 睡1干硬组MCAO杖血1h再灌注24h丘脑 TUNEL染色c×400】 . ._ 瞳2MCAO最血lh再蕾洼24h丘脑TuNEL色 3讨论 川芎嚷用于治疗缺血性中风已见大量的研究报 道,但川芎嗪用于鼠一侧MCAO后远隔效应的干预 作用的研究国内外未见报道.中药川芎为伞行科植 物川芎的干燥根茎,JI1芎嗪是从川芎中提取的有敦 生物硷四甲基比嗪(Tetramethypyrazine),川芎嗪 对急慢性缺血性脑血管病有肯定的治疗效果一.川 芎嚷的药理研究表明:川芎嚷能通过血脑屏障,主要 分布在大脑半球,脑干等处,对血管平滑肌有解痉作 用,能扩张小血管.减小脑血管阻力,增加脑血流量, 改善微循环一q;能降低血小板表面活性及聚集性,对 已形成的戚小板聚集有解聚作用],能抑制ADP对 血小板的聚集怍用;对m管内皮细胞有保护作用,对 缺血,缺氧引起的脑水肿有较好的防治作用一;作为 一 种钙拮抗剂.,可改善脑缺血后再灌注后的能量 代谢,电生理及线粒体功能口].可抗自由基的氧化作 甩,对随缺血及再灌注后神经缅瞧功能有保护作厢 本实验显示干预组同侧额叶,丘脑凋亡细胞较 未用药组明显减少(P<0.01).说明JIJ芎嗪能增加 MCAO后远隔部位的脑灌注,保护远隔部位的神经 元+能抗远隔部位的细胞凋亡,使得远隔部位脑组织 减少由于神经纤维传导通路中断造成的失联络损 伤.Rumget等对初发中风患者采用PE1检查以评 估中风后rCBF变化与手指运动速度评分的关系,发 现PET图像上损伤相关网络与康复相关网络在解 剖结构上有重叠区,认为一侧脑梗死后运动功能的 恢复可由中风后远隔部位的脑组织功能所促进,其 他的动物实验也发现一些药物如氨基酰胺可改善预 后,而氟哌碇醇,嗣朴吗啡砌不莉于偏瘫的好转.即 神经机能联系不能在功能康复中有关键作用.因而 川芎嚷可通过减轻远隔部位的脑功能障碍,在改善 中风后的临床预后中起一定的作用. 参考文献 [1]l~nnisM,Feeney.JeanBan.Dia~chisis[J].Stroke,1986 1f817—838 [2]zeaLongaEWeinsteinPR.Carlson~.etat.Reversiblemiddle cerebrala~eryocclusionwithouteranieclomyLnrats[J], Stroke,1989,20:84—91 3j马永江.川芎嗪的化学成分投药理作用研究现状IJ].中西医结 合杂志.1984.4:974. ]邵国富.包仕尧.苏簿洪.替.脑鲢血和再灌注时脑蛆织的改变强 药铅的影响[j]中华神经精裨科杂志.1992.29;3345--3847. ]檑莅阶.急性脑血桂形成患者滴注川芍嚷前后血{茛流变性和血 小板对ADp敏感性的变化[J].武汉医学杂志,1985,9(3);168. [6l王玉良.川芎唪对心血管组磬{的药理和生理作用[J]中西医结 合杂志.1985.5:291. [7]GrottaJC:Efficiaeyandroech~nlsmoJ"actionofacalciumchart— he!blocker自ftgtohalcerebralischem[ainfats[】j.Stroke. 19B819~47. :张亚卓当归川芎礤对瞎砖血再蓓注损伤的影响[J:.神经生化 进展.i98B,2:l75. [9]SeitzRJAzariNP,KaorrVe1alTheroleo1"diaschistsin trokeremvery[J].Stroke.199g30;1844—1850. (收藕日期,2004—05—27)