骨髓间充质干细胞促进皮肤创伤愈合的研究

骨髓间充质干细胞促进皮肤创伤愈合的研究 骨髓间充质干细胞促进皮肤创伤愈合的研究 骨髓间充质干细胞促进皮肤创伤愈合的研究 骨髓间充质干细胞促进皮肤创伤愈合的研究 骨髓间充质干细胞促进皮肤创伤愈合的研究-医学 【摘要】 目的:探讨骨髓间充质干细胞在组织工程皮肤修复创面缺损中的作用. 方法:以标记了PKH26的MSCs为种子细胞构建组织工程皮肤，修复皮肤缺损，HE染色和免疫组织化学染色观察愈合效果，荧光检测追踪细胞转归. 结果:移植2 wk后实验组创面基本愈合，愈合时间明显快于对照组，6 wk时仍可检测到红色荧光标记的骨髓间充质干细胞，免疫组织化学染色显示角蛋白和?型胶原达阳性. 结论:含有MSCs的组织工程皮肤移植后促进创面愈合，骨髓间充质干细胞在皮肤创伤愈合中起了重要作用，可作为组织工程领域中理想的种子细胞. 【关键词】 骨髓间充质干细胞;皮肤;创伤愈合;组织工程 0引言 随着组织工程技术的发展，开发构建组织工程皮肤逐渐引起人们的关注，但种子细胞的来源是目前困扰组织工程的问题之一. 骨髓间充质干细胞是近年来研究的一个热点，它来源于中胚层，有较强的自我更新和增殖能力，且取材方便，易于培养，不涉及伦理道德等问题，因而被认为是组织工程理想的种子细胞,1,. 本研究拟用MSCs作为种子细胞经体外培养扩增后构建组织工程皮肤，修复动物皮肤缺损，观察修复效果及细胞在体内的分化，为构建具有生理功能的组织工程皮肤奠定基础. 1材料和方法 1.1材料 无菌条件下从猪髂骨处抽取骨髓，采用Percoll分离法，经密度梯度离心收集界面层的单个核细胞，PBS洗两次，离心收集细胞，重悬于体积分数为100 mL/L胎牛血清的DMEM/F12培养液进行培养，隔日换液，弃去未贴壁的细胞，待贴壁细胞继续培养达80%~90%融合时，用胰蛋白酶消化，传代培养. 使用前用PKH26荧光染色试剂盒进行荧光标记. 标记好的细胞在荧光显微镜下呈单个类圆形的红色光点，显示较强的荧光. 取用荧光标记过3~5代状态良好的骨髓间充质干细胞，以1.8×106/mL的密度与提取自小牛皮的?型胶原混合，37?孵育30 min凝固后，加入培养液培养，2 d将其移至气液面进行器官培养，继续培养2 d获得含有MSCs['htTP://WWw.fwjia.COm' >骨髓间充质干细胞 促进皮肤创伤愈合的研究资:料;来/源,于FWJIA;网 }的组织工程皮肤,2,. 1.2方法 1.2.1动物创伤模型制备及移植实验 实验用猪6只，雌雄不限，质量17~20 kg. 麻醉后背部剃毛，消毒. 在每只猪脊柱两侧皮肤各制备2个直径50 mm的圆形皮肤缺损，深至筋膜层，建立深层皮肤缺损动物模型，自体双侧对照，左右随机分为实验组和对照组. 实验组将构建的组织工程皮肤覆盖创面，敷以无菌油纱和普通纱布，打包缝合. 对照组创面未覆盖组织工程皮肤，其它治疗同实验组. 术后1 wk首次打开创面，常规换药. 1.2.2创面观察及指标 术后动物分笼饲养，每天观察活动、饮食等情况，连续观察创面变化、组织生长和创面愈合等情部至第6 wk. 定期取创面组织进行组织学观察，冰冻切片进行显微镜检查，免疫组织化学染色观察角蛋白和?型胶原形成情况. 2结果 2.1骨髓间充质干细胞原代细胞接种后成圆形，首次换液后显微镜下可见稀疏分布的单个细胞贴壁生长，细胞为纺锤形，类圆形，7 d后生长速度加快，呈典型的成纤维细胞外观，约10 d汇合成片即可传代. 标记好的细胞在荧光显微镜下呈单个类圆形的红色光点，显示较强的荧光.