维药雪莲前列栓的质量标准研究

维药雪莲前列栓的质量标准研究 ====================================================================== 作者:希尔艾力?吐尔逊，斯拉甫?艾白，曼尔丹?尼牙孜，吐尔洪，薛梅 【摘要】 目的建立雪莲前列栓的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)鉴别处方中的雪莲，用高效液相色谱(HPLC)法测定雪莲前列栓中绿原酸的含量。使用 5 μm) ;检测波长:327 nm;流动相:乙腈-Waters RpC18 (150 mm×4.6 mm， 0.4%磷酸溶液(10?90);流速:1.0 ml?min-1;柱温:35?。结果在TLC图谱中可检出雪莲的特征斑点，HPLC法在绿原酸26.68 ,293.48 μg(r=0.999 8，n=6)范围内，有良好的线性关系，平均加样回收率为97.86%(n=9)，RSD为1.89%。结论所采用的方法准确、可靠,可行性及重复性良好，能有效控制该制剂的质量。 【关键词】 雪莲前列栓; 绿原酸; 高效液相色谱; 薄层色谱 维药雪莲前列栓是雪莲、红花、没药等多味维吾尔药材组成，具有消炎、消肿、通淋，用于慢性前列腺炎及前列腺增生等疾病。为了更好地控制其质量,保证临床疗效,本实验采用薄层色谱(TLC)法对其进行了定性鉴别研究,建立了制剂雪莲的薄层定性鉴别方法,并采用高效液相色谱(HPLC)法测定了制剂中绿原酸的含量,为本品质量标准的制订提供了依据。 1 仪器与试药 Waters 600型高效液相色谱仪(美国Waters公司)，包括Waters 2487紫外检测器;METTLER AE200型电子天平，Sartorius BP211D型电子天平，KT-1000W超声波清洗器。乙腈为色谱级，其它试剂均为分析纯;硅胶G(青岛海洋化工有限公司生产);绿原酸对照品(批号0753-200111)，芦丁对照品(批号0753-200111)，雪莲对照药材(121205-0101)(中国药品生物制品检定所提供);雪莲前列栓中试样品由新疆奇康哈博维药有限公司生产，批号为040402，040405，040410。 2 方法与结果 2.1 雪莲的薄层色谱鉴别取供试品3粒，断碎，称取约2.2 g，置索氏提取器中，加氯仿适量，回流脱脂5 h以上，弃去氯仿溶液，滤渣连同滤纸挥尽氯仿;加入甲醇适量，回流提取至近无色，水浴蒸至近干，加70%甲醇2 ml溶解，作为供试品溶液。另取雪莲对照药材1 g，加甲醇20 ml，超声提取30 min，水浴浓缩至1 ml，作为对照药材溶液;取芦丁、绿原酸对照品，甲醇溶解，分别制成每毫升含4 mg的溶液，作为对照品溶液。取不含雪莲的阴性样品3g,按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法[《中国药典》2005年版，?部(附录VI B)]试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材、对照品溶液5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙 酯-丁酮-甲酸-水(10?6?1?2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%亚硝酸钠的1%的甲醇溶液，加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。阴性无干扰。结果见图1。 1.阴性对照 2,4.供试品(批号:040402，040405，040410) 5. 雪莲对照药材 6.芦丁对照品 7. 绿原酸对照品 图1 雪莲前列栓的TLC鉴别 2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件色谱柱为Waters RpC18 (150 mm×4.6 mm，5μm) ，加保护柱;检测波长:327 nm;流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(10?90);流速:1.0 ml?min-1;柱温:35?。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于1 000。流速为1.0 ml?min-1时，在此条件下，绿原酸保留时间、分离度、理论板数等色谱参数均符合要求。 2.2.2 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品7.6 mg，置10 ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液(0.76 mg?ml-1);精密量取对照品储备液1 ml置50 ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含绿原酸15.2μg)。 2.2.3 供试品溶液的制备取供试品10粒，碎断，取约2.2 g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿适量, 回流脱脂5 h以上，弃去氯仿溶液，滤渣连同滤纸挥尽氯仿;加入甲醇适量，回流提取至近无色，水浴蒸至近干，加70%甲醇定容至50ml量瓶中，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。 2.2.4 阴性对照溶液的制备按处方制备不含雪莲药材的供试品，依供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液。 2.2.5 线性关系考察精密量取对照品储备液1 ml置50 ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含绿原酸15.2 μg)。制得标准品溶液，取2，6，10，14，18，22 μl进样。以绿原酸进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为:Y=2 646.3X-1 722.9，r=0.999 8，结果表明在26.68,293.48 μg范围内，绿原酸进样量与峰面积之间有良好的线性关系。 2.2.6 精密度实验精密吸取“2.2.2”项下的对照品溶液各连续进样5次，每次10 μl，测得绿原酸峰面积的RSD为0.87%，表明仪器精密度良好。同一批供试品(040402)制成供试品溶液，连续进样6次，10 μl/次, 测得绿原酸峰面积的RSD=0.67%，表明样品精密度良好。 A-对照品 B-样品 C-阴性样品 a-绿原酸 图2 高效液相色谱图 2.2.7 稳定性实验取同一供试品(批号:040402)按“2.2.3”项下方法制备供试液，分别于0，2，4，6，8，12 h进样10 μl，测定绿原酸的峰面积，结果绿原酸峰面积的RSD为0.86%，结果供试品溶液12 h内稳定。 2.2.8 重复性实验同一批样品(040402)分别制成5个供试品溶液，连续进样6次，10μl/次 ，进样测得绿原酸峰面积并计算含量，RSD为0.40%(n=6)。表明本方法重复性良好。 2.2.9 回收率实验精密称取供试品(040402)约1.1 g，共9份，精密称定，分别置索氏提取器中，分别加入绿原酸对照品溶液(1.002 mg?ml-1)267.5，335.7，401.3 μl，加氯仿180 ml，回流5 h以上，弃去氯仿溶液;滤渣连同滤纸挥尽氯仿，加入甲醇适量，回流提取至近无色，水浴蒸至近干，加甲醇定容至50 ml量瓶中，摇匀，进样10 μl，测定，平均回收率为 97.86%(n=9),RSD为1.89% 。结果见表1。 2.2.10 样品含量测定取小试7批和中试3批样品(2.2 g/粒)，每批重复测定两次，按“2.2.3”项下方法制备供试液，分别进样10 μl，测定，以峰面积计算绿原酸含量。结果见表2。表1 绿原酸加样回收率实验结果表2 10批样品含量测定结果 3 讨论 本实验采用薄层层析法分别对其主要成分雪莲进行了鉴定,并采用高效液相色谱法制定了绿原酸的含量测定方法,达到了有效控制该制剂品种质量的目的。实验中方法具有灵敏准确、重现性好的特点,适宜于该制剂质量控制。 根据上述实验结果，考虑到药材的来源，以及制剂生产、储藏等方面的因素，暂定本品每粒含雪莲以绿原酸(C16H18O9)计，不得少于500μg。 由于购自中国药品生物制品检定所的绿原酸对照品(含量测定用)纯度达不到规定的要求，故采用归一化法对绿原酸对照品含量进行测定。精密吸取绿原酸对照品溶液 10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图30 min，采用归一化法计算绿原酸对照品(供含量测定用)含量，结果绿原酸对照品含量分别为87.78%，87.73%，平均含量为87. 8%。 本文对雪莲前列栓按《中国药典》2005年版?部附录I W项下规定的方法，对厂家提供的3批(040402，040405，040410)供试品进行了检查，结果符合检查要求。 为了优化供试品中绿原酸提取方法，选择了?甲醇超声，冷藏处理法;?石油醚超声处理，甲醇回流法;?置索氏提取器氯仿回流脱脂法等。结果?法表明脱脂效果差，不能用于高效液相仪的测定，以免污染检测池及液相柱。?法表明绿原酸回收率达不到要求。?法表明脱脂完全，提取完全，绿原酸回收率达到要求。故采用以?法为供试品提取方法[1,6]。 【参考文献】 [1] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准(中药材)，第1册[S].中华人民共和国卫生部，1992:10. [2] 关家彦，王玮文.天山雪莲浸提液制备工艺的考察[J].沈阳医科大学学报，1995，64(12):209. [3] 李君山，蔡少青.雪莲花类药材的化学和药理研究进展[J].中国药学杂志，1998 ，33(8):449. 郝永龙. 高效液相色谱法测定冰茶栓中的桂皮醛[J]. 时珍国医国药， [4] 2004，15(11) :739. [5] 顾利红，朱品亚.日光和温度对绿原酸供试品稳定性的影响[J].中成药，1999，21(11):568. [6] 李士博，刘惠娟，王兰霞. HPLC法测定痔疮栓中胡椒碱的含量[J].西北药学杂志，2003，18(5):198.