银仙通肺宝颗粒的药学及药效学研究（可编辑）

银仙通肺宝颗粒的药学及药效学研究（可编辑） 湖北中医学院 硕士学位 银仙通肺宝颗粒的药学及药效学研究 姓名:姚雪莲 申请学位级别:硕士 专业:中药学 指导教师:苏明武 20040101??:, 剐 吾 慢幢支气管炎是由于多种原因引起的支气管枯膜及其周围组织的慢性炎症、 纤维样化和萎缩变化,临床上以咳嗽、咳痰或伴有喘息及反复发作的慢性过程为 特征。本病在我国是常见多发病之一,据不完金统计,患病率为%~%,另外约 有%~%的慢性支气管炎患者由于防治延误,发展成为阻塞性肺气肿,甚至导 致肺源性心脏病,从而丧失劳动力或生活能力,严重者可危及生命。 本课题旨在研究开发一种治疗慢性支气管炎的安全、方便、有效的药物。 银仙通肺宝颗粒是一种中药复方制剂,组方独特。具有扶正祛邪、清肺化痰、止 咳平喘的功效。用于痰湿阻肺、气喘咳嗽、久咳不愈以及慢性支气管炎及其阻塞 性肺气肿见上述症候者。由于中药传统汤剂具有服用不便、携带不便、质量难以 控制等诸多缺点,因此我们在中药传统汤剂基础上,通过处方论证、剂型选择和 预实验结果,将其制成现代新剂型一颗粒剂,并对其制备工艺、质量、稳定 性进行了深入的研究,制订了银仙通肺宝颗粒成品及其原药材的科学的质量控制 方法;对其急性毒理学、药效学进行了初步的考察。 实验结果表明:银仙通肺宝颗粒是一种低毒,安全、有效的制剂,且具有性 质稳定、服用携带方便、.易被患者接受等优点,是目前治疗慢性支气管炎的理想 的中成药。中文摘要 银仙通肺宝颗粒是由紫金牛、银杏叶、淫羊霍、黄芪、制首乌、重楼、陈皮、 川芎、当归、五味子所组成。经多年的临床实践证明,对慢性支气管炎的治疗有 效率达 %。该方是集中医理论、现代研究和临床经验为一体的良好组合。 本课题研究是在临床疗效可靠的前提下,从药学及药效学角度对银仙通肺宝 颗粒进行了系统的研究,为把本制剂开发成新药奠定了基础。本课题首先采用正 交法优选切合实际的最佳制剂工艺。质量标准方面对本品中所含陈皮、黄芪, 五味子、淫羊藿、银杏叶进行了薄层色谱定性鉴别的研究;一对本品中紫佥牛的主 要有效成分岩白菜素进行了含量测定研究,初步确定了其含量限度,并对其含量 测定方法进行了方法学研究,制订了控制该制剂质量的质控指标;采用加速试验 法?,%对三批样品进行了初步稳定性考察研究;药效学方面主要考察 了本品对二氧化硫熏法建立慢性支气管炎动物模型的抗炎作用,以及该制剂的止 咳、平喘、化痰作用。实验研究结果如下: 经筛选的最佳制剂工艺为:处方中陈皮、川芎、当归、五味子的挥发油提取 时问为小时,提取后的药渣再加水煎煮次,第一次加倍量的水,煎 小时, 第二次加倍量的水煎.小时,合并煎液,合并液浓缩成相对密度约为. ,加入乙醇沉淀,醇沉浓度为%;处方中银杏叶、紫金牛、淫羊藿、黄 芪、制首鸟、重楼采用%乙醇渗漉,渗漉液流速为/。 质量标准研究结果表明:所得成品中所含陈皮、黄芪、五味子、淫羊藿、银 杏叶色谱斑点清晰,特征性强,重现性好,阴性无干扰;本品含紫金牛以岩白菜 素计每袋不低于。方法学研究结果表明:该方法的稳定性、精密度、回收率 均符合定量分析要求,可作为本品的质控指标; 初步稳定性结果表明:本品性状、鉴别、检查、含量测定等项在三个月内未 发生变化,说明本品在二年内质量稳定; 急性毒理学实验结果:通肺宝颗粒剂一次灌胃给药小鼠最大耐受量大于 /。表明本品是一种低毒、安全的中成药制剂。 药效学试验结果表明:.本品可显著延长豚鼠枸橼酸喷雾引致咳嗽潜伏期, 具有镇咳作肝;.银仙通肺宝颗粒可使小鼠气管粘膜排泌的酚红 量增加,有化痰 作用;.银仙通肺宝颗粒可显著延长组织胺、乙酰胆碱喷雾引致的豚鼠哮喘潜伏 期,具有平喘的作用;.银仙通肺宝颗粒可减轻小鼠慢性支气管炎模型气管、支 气管的慢性炎症病变;.银仙通肺宝颗粒可减轻豚鼠肺气肿模型的支气管及肺组 织的病变;.银仙通肺宝颗粒试验对肺克杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌 有较强的抑制作用;.银仙通肺宝颗粒可抑制二甲苯致小鼠耳廓急性炎性肿胀, 具有抗炎作用;.银仙通肺宝颗粒对棉球植入致小鼠肉芽组织增生有显著地抑制 作用,具有抗炎作用。 关键词 正交设计 工艺研究 银仙通肺宝颗粒 药效学 急性毒理学 质量标准 、 、 、 、 、 、 , 、 。 、 %... ,’ ’ . . , 、 、 、 .、 .. . , ?,%. , . .、. ,、 、、 . .、、‖. . .、、、. . ..:第一部分 处方方解及其原料药材的研究概况 .处方及方解 处方组成 制首乌 紫金牛 银杏叶 淫羊藿 黄芪五味予 芎 当归 重楼 陈皮 方解 慢性支气管炎是临床常见多发病,以长期咳嗽、咯痰或伴喘息为 主要特征, 属于中医咳嗽、喘证,痰饮等范畴。本病的发生与发展,每与外邪 的反复侵袭、肺 脾肾三脏的功能失调密切相关。由于其发展缓慢,病程迁延,多数 患者有肺脾肾阳 气不足征象,兼有痰湿未尽,故治疗重在扶正固本,并以祛邪为 法。 方中银杏叶敛肺止咳平喘,淫羊霍又名仙灵脾温而不燥,既能“治咳嗽”, 又能“补肾而壮元阳”《分类草药性》,共为君药。紫金牛性平,止咳祛痰作用 显著,大凡咳喘痰多,无论属寒属热,莫不相宜;五味子味酸收敛,甘温而润,能上敛 肺气,下滋肾阴而“宁嗽定喘”《本草备要》,与银杏叶为伍,可增强其敛肺止咳 之功;黄芪甘温,长于补脾肺之气,又能益卫固表,使气旺表实,外邪不易内侵;当 归为补血圣药,又“主咳逆上气”《本经》;何首乌补益精血,不寒不燥,为滋补 良药,与淫羊霍为伍,使脾肺肾三脏得补,阳气精血得充,是为臣药。陈皮理气燥湿 化痰,即可使气顺则痰消,又可防诸补药之雍滞;重楼苦微寒,长于清解热毒,即可 治痰湿日久所生之蕴热,又可防淫羊霍温而过燥;川芎行气活血,使血行通畅,有助 于痰饮的排出,共为佐药。金方配伍,扶正祛邪并举,攻补兼施,使体虚得补,痰湿得 祛,目前咳自平。 .原料药材的研究概况 ..紫金牛 来源 本品为紫金牛科植物紫金牛..的干燥全株 化学成分 主要化学成份为岩白菜素和抗结核有效成分紫金牛酚 、及,紫金牛素以及恩贝素、紫金牛醌、槲 皮素、槲皮苷、杨梅树皮苷、冬青萜醇等““”““““”““”。 . 图岩白菜素的结构式 .? 药理作用。““”“”“” 镇咳作用以猫喉上神经刺激法及小鼠氨水喷雾法证明,煎剂及岩白菜素灌 胃或腹腔注射,均有明显的镇咳作用,后者的作用强度相当于可待因/?/, 但不抑制呼吸,亦无镇痛作用及成瘾性。此药对咳嗽中枢有选择性抑制作用。 祛痰作用小鼠酚红气管排泌法及兔气管纤毛运动法证明,煎剂及其提取物 黄酮苷有增加气管分泌和促进气管纤毛排痰作用,其作用量与同剂量桔梗相当。 黄酮苷注射给药,能对抗组胺引起的豚鼠支气管痉挛,有平喘作用,但灌胃则无 效。 对大鼠实验性慢性支气管炎的作用每日吸入二氧化硫产生慢性支气管炎的 大鼠,内服岩白菜素有一定的预防及治疗作用,表现为杯状细胞减少,炎细胞浸 润,肺气肿及肺萎靡程度减轻。 抗菌、抗病毒作用煎剂对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感病毒有一定 的抑制作用。 ..银杏叶 来源 .的干燥叶 本品为银杏科植物银杏 化学成分: 主要化学成分为黄酮类和萜内酯化合物,白果苦内酯、、、、 ,银杏内酯等。此外,还含有机酸、多糖、酚类、氨基酸、聚戊 烯醇、甾类、微量元素等。据不完全统计,从银杏叶分离出的化合物有多种【】银杳内酉酞 银杏双黄酮 , ? 锒杏内酯 日 银香肉酯 饕审臻馨双黄酮胤:? 图银杏叶中主要成分结构式 .? 药理作用“”?””。” 对心脑血管循环有改善的作用:主要有效成份是黄酮类化合物,可用于冠心 病、心绞痛、高血压脑出血、痉挛、可降血脂,改善记忆功能、增加脑血流量, 降低脑血管阻力和心肌耗氧量,调整神经系统紊乱,有扩张血管,促进血液循环, 增进人体生机的作用,补肾健脑、滋肤保客,抗衰老保健延年等。”““”’。 解痉和抗过敏作用:主要有效成分是内酯类,可用于气喘、肺过敏的治疗。 抗菌作用:主要有效成分是长链酚类酯类,对金黄色葡萄球菌、痢疾菌及绿 脓杆菌有抑制作用,对真菌亦有一定抑制作用。 抗病毒、抗癌作用:日本学者用银杏绿叶提取物对于病毒进行实验。发 现脂溶性部分中的十七碳水杨酸、白果素均有很强的抑制活性。又黄酮类和前两 者对致癌启动因子抑制作用超过具有强的抑制的维生素酸。另外实 验证明长链酚类具有较强的细胞毒活性。 对免疫功能的影响:银杏叶提取物可明显增强小鼠淋巴细胞线粒体脱氢酶和 中性粒细胞的释放,具有提高小鼠机体免疫细胞功能的作用.银杏甲素能明显减 轻小鼠免疫器官的重量,抑制小鼠碳粒廓速率,抑制致敏小鼠溶血素的形成, 抑制所致足垫迟发型超敏反 应.银杏叶提取物可使小鼠抗抗体生成细胞数及其抗体产生增加,并 能增强巨噬细胞的吞噬功能,显示具有增加特异性抗体产生及增强非特异吞噬功 能的作用. ..淫羊藿 来源 本品为小檗科植物淫羊藿 .、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿 . ..或朝鲜淫羊藿?印 .、巫山淫羊藿印 的干燥地上部分““。化学成分??啪? 主要含四种类化学成分,即黄酮苷类、木脂素类、生物碱类和其它类;淫羊 藿茎叶含淫羊藿苷,叶还含挥发油、植物甾醇、糅质、油脂。脂肪油中 的脂肪酸有棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸。 药理作用”?川知? 镇咳、祛痰与平喘作用:小鼠酚红排泌法证明,淫羊藿的鲜品提取物及干品 的醋酸乙酯的提取物均有一定的祛痰作用,甲醇提取物则无祛痰作用。小鼠二氧 化硫引咳法证明,其甲醇和乙酸乙酯提取物均有镇咳作用。.前者还可完全抑制用 电刺激猫喉上神经引起的咳嗽,表明其作用是中枢性的。甲醇提取物对豚鼠的组 胺哮喘也具有保护作用。 抗心律失常作用:朝鲜淫羊藿总黄酮甙显著抗氯化钡诱发的大鼠心律失常作 用;显著提高大鼠对乌头碱的耐受量;显著抗肾上腺素诱发的豚鼠心率失常作用。 内流,降低自律性作用。 作用机制是阻断受体,减少、 对内分泌系统的免疫作用:淫羊藿总黄酮对弗氏完全性荆所引起的原发性足 肿胀和继发性足肿胀均有显著抑制作用,还可显著降低炎症渗出物中前列腺素 的含量,显著降低炎足中丙二酮的含量,且显著增加红细胞过氧化氢酶的活力。 其抗炎作用可能与抑制炎症渗出液中前列腺素的合成和释放有关。 抑制破骨细胞作用:具有抑制破骨细胞功能,使钙化骨形成增加。对试管内 鸡胚股骨有促进生长作用。对维酸诱导的大鼠骨质疏质症有防治作用。对去睾 丸大鼠骨生成有促进作用。 ..黄芪 来源: .. 本品为豆科植物蒙古黄芪 .的干燥 或膜荚黄芪 . 根”“。 化学成分: 主要化学成分为三萜皂苷类衍生物黄芪皂苷、黄酮类化合物、 多糖、含氮化合物主要为氨基酸类,多种维生素、其它有机物及多种微量元素 以硒为最高等?““。 药理作用”““ .对免疫系统的作用 黄芪能增强老龄鼠及氢化可的松致免疫功能低下模型鼠的免疫功能,提高细胞 免疫、体液免疫,能调节老龄鼠的免疫功能,是一种良好的免疫调节剂。 黄芪多糖对烧伤小鼠细胞免疫功能有明显的影响。”。“”“”“。 .对心血管系统的作用 黄芪皂甙与黄芪多糖对急性心肌梗塞犬心有改善心肌收缩性能,缩小心肌梗塞 面积、减轻心肌损伤的作用。黄芪给兔、犬、猫静脉注射,均有降压作用,并有扩张血管和扩张冠脉作用。 .对血液及造血系统的作用 黄芪对环磷酰胺所致骨髓造血功能有明显保护作用,能阻止骨髓有核细胞数的 明显减少,对白细胞、血小板数、网织红细胞数和巨核细胞数下降有明显回升作用。 .对机体代谢的影响 黄芪可使细胞的生理代谢增强。 .抗衰老作用 黄芪具有延长细胞的体外生长寿命,抑制病毒繁殖,降低病毒对细胞的致 病作用。黄芪多糖提高小鼠脾脏和脏脏含量,黄芪皂甙促进合成, 加速肝脏分化增殖。黄芪可提高杨体抗氧化酶和抗氧化剂含量的活力,降低 血清脂褐质的含量。黄芪能补气生血进而有安神作用。对免疫功能有明 显的促进作用。提高实验大鼠的应激能力等。 故显示其抗衰老作用。 ..制首鸟 来源 本品为何首乌的炮制加工品” 化学成分 主要含三类成分:均二苯烯类化合物、羟基葸醌类化合物、聚合原花青素及 磷脂类。其中二苯烯类化合物为水溶性活性成分;葸醌类为大黄素、大 黄酚、大黄素甲醚等;磷脂类为一谷甾醇等“”““”。 药理作用 延缓衰老作用,实验证明:首乌及其制剂能廷长二倍体细胞的生长周期,使 细胞发育旺盛,寿命延长。首乌煎剂能显著降低老年大鼠血浆和肝脏过氧化脂质, 改善骨髓的造血功能,影响血液流变学指标,对超氧化阴离子自由基也有较好的 清除作用,显示首鸟有抗氧化、抗衰老功能“““““。 降血脂和抗动脉粥样硬化作用首乌煎剂能显著降低血浆胆固醇、甘油三酯 和一脂蛋白的含量,说明何首乌能降低血脂,延缓动脉粥样硬化的形成和发展 ‘引【】】 保护肝脏的作用首乌中的四羟基乙烯一?一葡萄糖甙是保肝的有效成 分,它能防止脂肪肝、肝功能损害和肝脏过氧化脂质含量升高,降低血清谷丙转 氨酶。此外,何首乌增加肝糖原的作用也有利于对肝脏的保护””””””” 抗菌作用:据报道,首鸟不同炮制品水煎液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球 菌、福氏痢疾杆菌、宋内氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、白喉杆菌、 乙型溶血链球菌、奈氏卡他菌酒蒸首乌除外均有不同程度抑制作用,其中制首 鸟水煎液对白色葡萄球菌的抑制能力均优于生品和其他炮制品””。..当归 来源“” .的干燥根。 本品为伞形科植物当归 化学成分 其化学成分可分为挥发油和水溶性物质两部分,挥发油中含正丁烯基呋内酯 和蒿本内酯等余种化合物。水溶性成分中 含阿魏酸、当归多糖、叶酸、亚叶酸等等,此外还含蔗糖、果糖及具有抗体活性 的酸性多糖和多种氨基酸等””“”。 药理作用 对呼吸系统的作用:当归对补体旁路的溶血活性有抑制作用,可减轻某些有补 体参与的炎症反应,起到抗炎的作用。藁本内酯不仅对豚鼠离体支气管有松弛作用 而且对致痉剂乙酰胆碱、组胺以及氯化钡所致的支气管平滑肌痉挛收缩有明显的 解痉作用。当归具有较强的抗自由基作用,可使肺泡炎及肺间质 纤维化明显减轻。 大鼠静注当归后再吸低浓度氧时,肺动脉压升高的幅度明显减少,证实当归确有扩 张大鼠肺动脉,降低缺氧性肺动脉高压作用“?“。 抗菌、抗病毒作用:当归中的阿魏酸对细菌一乙酰转移酶有较强抑制作用, 同时还可使干扰素一含量降低,抑制黄嘌呤氧化酶活性,使得阿魏酸抗菌、抗 病毒作用表现为广谱。”“ 调节免疫:阿魏酸钠可增强巨噬细胞吞噬红细胞的能力““。“’。 抗炎、镇痛作用:当归对多种致炎剂引起的急性毛细血管通透性增高、组织 水肿、慢性炎性损伤均有抑制作用,且能抑制炎症后期肉芽组织增生,但不影响 肾上腺及胸腺的重量。同时,经研究证明,当归对型、型变态反应性炎症也 有抑制作用。当归水提物对实验动物腹腔注射醋酸引起的扭体反应表现出镇痛作 用‘“。 ..川芎 来源 本品为伞形科植物川芎 .的干燥根茎””。 化学成分 含生物碱、酸性物质、中性物质和有机酸等。主要为川芎嗪四甲基吡嗪 、阿魏酸 、川芎内酯、川芎酚、篙苯内 目、维生素、维生素、叶酸、甾醇等““。 药理作用?“” .对心血管系统的作用 对心脏的作用 川芎嗪静脉注射家兔可使缺血心肌免受再灌注射的损伤,其作用可能活血化 瘀、增加冠脉流量、降低心肌耗氧,改善心肌代谢作用有关。 降血压作用 研究表明,川芎浸膏、水浸液、乙醇本浸液对犬、猫、兔等麻醉动物、不论肌 肉注射或静脉注射均有显著而持久的降压作用,水浸液给肾型高血压犬或大鼠灌 胃,亦明显降压。 对冠脉流量的影响 川芎及其提取物均有扩张冠状动脉、增强冠脉流量、降低心肌氧耗等作用。 据报导,芎水提液及其生物碱能扩张冠状血管、增加冠脉血流量, 改善心肌 缺氧状况。 .对血液系统的作用 另据报道,川芎能使血小板中含量升高近倍,从而抑制血,、板聚集,并 抑制血小板释放反应。川芎所含阿魏酸亦有明显的抗血小板聚集作用。 据报道,对家兔形成自身肺循环血栓,芎嗪显著增加血红栓的溶解率,且在 一定程度上减弱白血栓增长趋势,对血栓形成有抑制作用。 .对中枢神经系统的作用 镇静作用 川芎有明显的镇静作用,川芎水提液/灌胃对醋酸所致小鼠扭体反应有明 显抑制作用。 镇痛作用 芎有较好的镇痛作用,中医药古医籍早有记载,”关角痛,用川芎”是临床医 生常用的语言。用』『芎治疗偏头痛的报导较多。 .其它 防治支气管哮喘:研究表明,川芎能明显拮抗由组胺和乙酰胆碱所介导的支气管 平滑肌痉挛,降低哮喘发生率和死亡率,用药组明显低于对照组.。 .。陈皮 来源 本品为芸香稃植物橘 及其栽培变种的干燥成熟果实? 化学成分 陈皮主要含挥发油、黄酮类、生物碱、肌醇、维生素等。研究发现,药材 挥发油主含柠檬烯、一松油烯、一月桂烯、一松油醇等。石力夫等首次从黄桔 皮中发现葛缕酮、长叶烯和雪松烯。黄酮类主要是橙皮苷、新橙皮苷 等。钱士辉等首次从陈皮中分得和,,,,,,’ 【,引 图一橙皮苷的结构式.? 药理作用””””“””” .对消化系统的作用 对胃肠平滑肌作用:陈皮煎剂和甲基橙皮甙能抑制离体小肠运动。静脉注射 对在体胃肠亦表现抑制效果,作用比肾上腺素弱,但较持久。橙皮甙对离体肠肌 的作用是双相的,先有短暂的兴奋作用,然后表现为抑制。 对消化液分泌作用:陈皮挥发油能促进大鼠正常胃液的分泌,有助于消化。 陈皮水煎液体外实验证明,能使人唾液淀粉酶活性增高。 抗胃溃疡作用:对大鼠结扎幽门形成胃溃疡模型,于实验前或实验中皮下注 射甲基橙皮甙能明显抑制渍疡的发生,并能抗病理性胃液分泌增多,如合并应用 维生素及维生素&,可使作用加强。 利胆作用:给麻醉大鼠皮下注射甲基橙皮甙,可增加胆汁及胆汁内固体物的 排泄量。另外从鲜橘皮中提取的桔皮油具有较强的溶解胆固醇结石作用。 .祛痰、平喘作用 陈皮所含挥发油有刺激性祛痰作用,鲜橘皮煎剂用于家兔气管灌流,可使支 气管扩张,灌流速度加快,陈皮的醇提物可对抗组织胺所致豚鼠离体气管痉挛收 缩,川陈皮素在豚鼠离体气管试验和麻醉猫静注时都能扩张支气管。 .对心血管系统的作用 对心脏的作用:鲜橘皮煎剂、醇提取物及橙皮苷均能兴奋离体及 在位蛙心, 剂量过大则成抑制作用。橙皮甙静注,能使在位兔心收缩力增强,心输出量增加, 而对心率影响不大。离体兔心灌注试验表明,陈皮煎剂、提取物以及甲基橙皮甙 尚可扩张冠状血管,使冠脉流量增加。 对血管和血压的作用:鲜橘皮煎剂或醇提物对蟾蜍血管有收缩作用。麻醉犬 或兔静注后,血压迅速升高,而且在血压恢复后出现短暂的降压反应,升高作用 持续时间较肾上腺索长,反复给药无快速耐受性,对呼吸影响不明显。但对狗灌 胃给药则无升压作用。陈皮素给麻醉猫静注,亦有明显升压效果,两肌注或胃肠 道给药,对血压无影响。甲基橙皮甙静注,可使麻醉猫、兔、犬血压缓慢下降, 恢复亦缓慢,无快速耐受性。 其他作用:陈皮还具有抗炎等作用..重楼 来源 本品为百合科植物云南重楼蜘拍. ..的干 .或七叶一枝花切砂 燥根茎“”。 化学成分 主要化学成分为多种甾体皂苷,其皂苷元多为薯蓣皂苷元,次为 偏诺皂苷元;另外还含有生物碱、多糖、脱皮激素、天冬氨酸、天 冬酰氨、丙氨酸等十八种氨基酸及微量元素“”””。 药理作用 止咳平喘作用,有文献报道:重楼煎剂 /灌胃,对二氧化硫引喘的小鼠有 /灌胃,对组 止咳作用,薯蓣皂苷有止咳祛痰作用,煎剂或乙醇提取物均按 织胺喷雾所致气管痉挛的豚鼠有保护作用,乙醇提取物作用尤强,其提取物在/ 到/半数致死量即有明显平喘作用,效果与/半数致死量的氨茶碱相似 ..五味子 来源 本品为木兰科植物北五味子 .和南五味子华 的成熟果实卿’。 中五味子.. 成分 主要化学成分为挥发油、木脂素类五味予醇等。含量和成分因品种不 同而有较大差异。从北五味子和华中五味子中已提得的联苯环辛烯类,有五味子 甲素、乙素、醇乙及酯甲、乙、丙、丁、戊。自红花五味子种子中提出五味子酚, 此外尚有挥发油、有机酸及脂肪油等”“”。 药理作用 对免疫功能的作用:免疫实验表明,五味子成分能使脾脏白髓的生发中心增 大,动脉周围淋巴鞘增厚,免疫细胞数量增加,特别是边缘区的细胞变化更 为显著,边缘区是淋巴细胞从血液进入淋巴组织的重要通道,淋巴细胞经此区再 转移到白髓及红髓。又有实验表明,实验组白髓的边缘区细胞增加,且多集 中在末端小动脉和血窦附近,此现象进一步证实,来自边缘区的细胞,经动脉周 围淋巴鞘进一步分化,最后进入红髓末端小动脉周围。五味子油乳剂对一胸腺 嘧啶核苷掺入淋巴细胞合成有明显促进作用.随着浓度增加,一胸腺嘧啶 核苷的掺入量递增,淋巴母细胞的生成显著提高,表明能增加细胞免疫功能。第二部分银仙通肺宝颗粒制备工艺研究 .剂型选择及颗粒剂制备工艺路线 ..剂型选择 由于传统水煎剂具有服用剂量大、携带不方便、质量不易被控制等缺点,因此, 我们根据处方中各单味药主要有效成分的水溶性强弱不一致,另外从每曰服用剂 量考虑,选择了颗粒剂。这种剂型颗粒剂具有服用方便、起效快、剂量小、 ’ 质量易控制、科技含量高等优点。 ..颗粒剂的制备工艺路线 原料药材 江西产 药检所代购 紫金牛 药检所代购 山东产 银杏叶 湖北省药材公司 东北产 淫羊藿 内蒙古产湖北省药材公司 黄芪湖北省药材公司 江西产 陈 皮湖北省药材公司 五味子 辽宁产 湖北省药材公司 制首乌 云南产 湖北省药材公司 四川产 重楼 湖北省药材公司 四产 川 芎 当 甘肃产 湖北省药材公司 归 以上药材由湖北中医学院陈老师鉴定。 颗粒剂的基本路线 提取 过滤、浓缩 喷雾干燥或减压干燥 药材. ,提取液 一 ?浓缩牡一??一???干浸膏 检验、包装 粉碎 加辅料制粒干燥或加辅料一步制粒 ??最膏粉??一?????????????????成品 处方及药物的性质 黄芪制首乌 处方 紫金牛 银杏叶淫羊藿 川 当归 陈皮 芎 五味子 重楼 方中当归、川芎,陈皮、五味子皆含有挥发油,可采用水蒸气蒸馏法提取,由预 试验可知,当归所含挥发油为重油,其余中药所含挥发油为轻油,当重油与轻油 合并提取时,油水难以分离,影响挥发油的提取率。所以在挥发油提取器中加入少量乙醚,提取完全后再回收乙醚得挥发油,可提高挥发油的收得率。 为提高有效成分的利用率,又除去杂质,减少服用剂量,提取挥发油之后药渣 再采用水煮醇沉工艺。 方中紫金牛、黄芪、淫羊藿、银杏叶、重楼,制首乌均含不溶于 水的有效成分, 所以采用乙醇渗漉工艺。 生产条件 本品为固体制荆,无澄明度要求,药液仅需除去固体微粒或很大 的分子,故宜用 机械过滤。 根据工厂设备条件,药液可用三效浓缩灌浓缩,真空干燥,粉碎得 浸膏粉,湿颗 粒可用沸腾床干燥。 因此,确定银仙通肺宝颗粒的工艺路线见图?. 当归、川芎、陈皮、 重楼、何首乌、黄芪 五味子 【淫羊藿、银杏叶、紫金牛 蒸气蒸馏 ?一水乙醇渗漉 收乙醇 加适量的辅料混合均匀 制粒、干燥 中? 中间体检验 , ?品分装 图银仙通肺宝颗粒工艺流程图 ’ ..挥发油提取工艺条件筛选 由于当归所含挥发油为重油,其余中药所含挥发油为轻油,当重油与轻油合 并提取时,油水难以分离,影响挥发油的提取率。所以在挥发油提取器中加入少 量乙醚,提取完全后再回收乙醚得挥发油,可提高收得率。 ..挥发油的提取工艺考察 取个处方量的当归、五味子、川芎、陈皮四味药材共 ,粉碎过四号筛, 水蒸气蒸馏提取,用挥发油测定器收集轻油法,并在规定的时问量取,实验重 复次,结果见表。 表不同时问所得挥发油的提取量 ..从表可知,前小时出油量最快,己达总量的.%,小时已基本提 尽,所以选取提取时间为小时。 ..重复实验 以小时为实验条件,取个处方量的当归、五味予、川芎、陈皮四味药材 共 ,粉碎过四号筛,重复操作三次,实验结果见表 表所选提取时间的重复实验 . 实验结果表明提取时问小时为最佳实验条件是可行的。 .处方中当归、门芎等味中药水煮醇沉工艺条件筛选 通过预实验知,对干膏收率和有效成分含量影响较大的因素有:加水量、煎 煮时间、煎煮次数、醇沉前药液浓度和醇沉浓度等因素。将加水量、煎煮时问、 煎煮次数三因素分别组合成加水量一煎煮次数,煎煮时间~煎煮次数两个因素,与 醇沉前药液浓度、醇沉浓度构成四个主要影响因素,每因素备设水平,因此, 设计因素水平,见表,选用,正交设计袁。按处方量的配比取当归,五 味子、川芎、陈皮药材,份,分别置圆底烧瓶中,提尽挥发油后的药渣, 按表?中给定的实验条件进行正交试验,重复次,以平均干浸膏收率% 和干浸膏中橙皮苷的含量为考察指标筛选最佳条件,结果见表。 表水煮醇沉工艺四素水平表 . 表水煮醇沉工艺正交试验结果 . . . . . . . . . 。 。 。 .. . . .. . . .. . . .. . . . 。 。 . . . . . . 对表?试验结果中干膏收率和干膏中岩白菜素总量进行统计分析, 结果见 表、表. 表 水煮醇沉工艺正交试验干浸膏收率统计分析结果 . 因 素 目项 。 . . , . . . . . . . . . . . . . . . ... .. . ,。; 表水煮醇沉正交试验干膏中橙皮苷总量统计分析结果 .? 结果分析从表、表结果分析可以看到,四因素中,对干膏收率的影响大小依 次为,且,:,,,:.,,:,,,:”其中仅因 素对于膏收率有显著影响. 。四因素对总干膏中橙皮苷总量的影响大 小依次为,且,:.,,:,,,:,,,巩,其中仅 因素有显著影响,故选定因素的水平为。,对于、因素,在给定的水平条 件下,无显著影响,虽,优于:,,优于:,但无论从干膏收率,还是干膏中橙皮 苷总量的影响均相差不大,故从省时节能、降低成本的角度考虑,拟选、因素 的水平为。。同理,对于因素,拟选因素的水平为。因此,从实际出发, 综合分析,选择的最佳提取工艺为,,,,印:当归、陈皮等味中药提取挥发 油后的药渣加水煎煮次,第次加倍量水煎煮小时,第次加倍量水煎煮 .小时,药液合并,浓缩至相当于每含生药,加乙醇至含醇量 %/, 静置过夜,取上清液滤过,滤液回收乙醇至尽。 工艺验证称取个处方量的上述四味药材,份,分别置圆底烧瓶中 按最佳工艺条件提取,测定干膏收率和总干膏中橙皮苷的含量,结果见表。 表.最佳工艺验证结果 .?从表?结果可知,按最佳工艺验证批,其干膏收率、干浸膏中橙皮苷的 总量基本稳定,说明工艺较稳定。.紫金牛、黄芪等味中药乙醇渗漉的工艺研究 方中紫金牛、黄芪、淫羊藿、银杏叶、重楼、制首乌均含不溶于水的有效成 分,拟采用乙醇渗漉工艺。影响较大的因素可能有乙醇浓度、乙醇用量、渗漉液 的流速等,另外设空白对照,共有因素。各设水平,其因素水平表的设置, 见表。取紫金牛等味饮片适量,粉碎成粗粉,分别按处方量的/称取 份,混匀,按表中要求的因素水平进行试验,分别以相应浓度的乙醇湿润后, 置渗漉筒中加入适量乙醇,编号,浸泡过夜,调整渗漉速度,收集渗漉液,直至 渗漉完毕,将收集的渗漉液分别回收乙醇,残留物分别金量转移至减压干燥 至恒重的蒸发皿中,于水浴中挥去残留乙醇,置真空干燥箱中,于。减压干燥 至恒重,以干膏收率/生药和总干膏中岩白菜素的含量为考查指 标,试验结果见表。 表乙醇渗漉工艺因素水平表 .表乙醇渗漉工艺正交试验结果 .对表试验结果中干膏收率和干膏中岩白菜素总量进行统计分析,结果见 表 、表? 表? 乙醇渗漉正交试验干浸膏收率统计分析结果 . . .。 表乙醇渗漶正交试验干膏中岩白菜素总量统计分析结果 . . .. . ? . . . . . .. . .. . . . . . . .. , . . . . 结果分析从表一 、表?结果分析可以看到,三因素中,对干膏收率的影 响大小依次为,且,。,岛,,,:.,其中仅因素对 于膏收率有显著影响.。三因素对总干膏中岩白菜素总量的影响 大小 依次为,且, ;,:;,:。,其中仅因素有显著影 响.。故选定、两因素的水平为,、。,对于因素,在给定的 水平条件下,无显著影响,虽然,优于。,但无论从干膏收率,还是 对总干膏中 岩白菜素总量的影响,均相差不大,故从省时节能、降低成本的角度考虑,拟选 因素的水平为。因此,从实际出发,综合分析,选择的最佳提取工艺为,.,, 即:银杏叶、紫金牛、淫羊藿、黄芪、制首鸟、重楼六味粉碎成粗粉,过目筛, 以乙醇%/渗漉,收集 /,相 倍量/渗漉液,渗漉速度为 当于药材量的/ /。回收乙醇,得稠膏。工艺验证称取处方量的上述味药材,份,以%乙醇湿润后,置渗漉筒中, %乙醇至 加入适量乙醇,浸泡过夜,调整渗漉速度为/,分次加入 倍量 减压 渗漉液,停止渗漉,将收集的渗漉液分别回收乙醇,残留物全量转移至 干燥至恒重的蒸发皿中,于水浴中挥去乙醇,适当浓缩后,置真空干燥箱中,于 。 ?减压干燥至恒重,测定干膏收率和总干膏中岩白菜素的含量,结果见表 表.最佳工艺验证结果 .? 结论:从表结果可知,按最佳工艺验证批,其干膏收率、干浸膏中岩 白菜素的总量基本稳定,说明工艺较稳定。 .制粒工艺条件的筛选 ..浸膏粉的制备 将各水煮醇沉所得的稠膏和乙醇渗漉所的干膏合并,再用真空干燥法在 干燥得干膏粉,粉碎,过 目筛,即得。 ..润湿剂的选用 由于本方的浸膏粘性很强,因此选用一定浓度的乙醇为润湿剂,以达到降低粘 性和吸湿性的效果。 软材的软硬度与乙醇的浓度有直接关系,一般以手捏能成团,轻压则散为原则, 。 筛选乙醇的浓度。结果见表 表 不同浓度乙醇对制粒的影响 . 结论:选择 %/乙醇作为制粒时的润湿剂。 ..吸收剂淀粉、糊精用量的选择 以 乙醇为湿润剂,从软材的性质、制粒难易程度选择辅料用量,结果见 表? 。表不同比例的辅料与浸膏粉配比对制粒成型结果的影响 .结论:选择干膏粉:辅料可溶性淀粉:糊精:为:时,得到软材 合适,制得颗粒符合要求,所以选择选择干膏粉:辅料可溶性淀粉:糊精: 为:制粒。 .包装环境湿度的选择 本品含有较多的浸膏,露置于湿度较大的空气中易于吸湿,故应进行包装环境 相对湿度的控制研究。 ..试验方法: 取干燥器个,洗净,吹干,分别加入表中的饱和盐溶液,另取称量瓶个, ?的生 洗净,烘干,分别将称量瓶盖打开后置上述干燥器中,盖上干燥器盖,置 化培养箱中放置小时,取出,迅速称定重量,同时向称量瓶中加入本品颗粒适量 精密称定,分别置相应的干燥器内,打开称量瓶盖,置 ?生化培养箱中放置小 时,取出,迅速称定重量,计算吸水率,结果见表?。 ? 表?不同湿度对颗粒的影响. ..实验结果 以吸湿率%为纵坐标,相对湿度%为横坐标绘制吸湿曲线见下图。 从 吸湿曲线两端作切线并延长相交于一点,该点所对应相对湿度 为%,即为生产 时分装车间应控制的湿度点。生产时应将分装车闻的相对湿度控 制在%以下。一 邑 遂 。相对湿度% 图颗粒吸湿曲线’ . .中试放大研究 。 按本品制备工艺中试三批,其试验结果见表? 表一 三批中试产品生产情况 ’. ‘。 应得成品 实得成品成品率% 淀粉糊精 干膏总量干粉收率% 批号投料量.旦?竺一旦???生』一 . .. . . . .结论:通过中试放大结果可看出,该最佳制备工艺合理,可适用于大生产。第三部分银仙通肺宝颗粒成品的质量标准 .银仙通肺宝颗粒的处方、制法及性状 ..处方 银杏叶 紫金牛 黄芪 制首乌 淫羊藿川 当 重楼 陈皮 芎 归 五味子 ..制法 以上味,取陈皮、川芎、当归、五味子提取挥发油,蒸馏后的水液另器收 集;药渣再加水煎煮次,第一次加倍量的水,煎小时,第二次加倍量的水 煎.小时,合并煎液,滤过,滤液与上述水液合并。合并液浓缩成相对密度约为 . ?,待冷至室温,加入%乙醇使药液中醇浓度达到%,静置 小时,抽滤,滤液浓缩至稠膏,备用。另取处方中银杏叶、紫金牛、 淫羊霍、黄芪、 制首乌、重楼六味药材粉碎成粗粉,混匀,照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法《中 国药典》 年版一部附录,周%乙醇作溶剂,浸渍小时后,以每分钟 的速度进行渗漉,渗漉液回收乙醇,得稠膏,备用。将上述两种稠膏合并,混 匀,干燥。加糊精、淀粉:与%乙醇适量制成颗粒,干燥,制成颗粒, 加入上述挥发油,混匀,即得。 ..性状 本品为棕黄色颗粒,味微苦。 .银仙通肺宝颗粒的定性鉴别 ..银仙通肺宝颗粒中陈皮的定性鉴别 选择陈皮中的主要有效成分橙皮苷用于制剂成品的特征鉴别。 橙皮苷对照品溶液的制备 称取橙皮苷对照品,加甲醇制成每含.的溶液,作为橙皮苷对照品溶 液。 颗粒剂供试品溶液的制备 取颗粒剂成品袋,研细,加甲醇,加热回流小时,放冷,过滤,滤 液浓缩至,制成颗粒剂供试品溶液。 陈皮阴性供试品溶液的制备 取处方不合陈皮药材量的/,照“制法”项下的方法制备阴性供试品干 浸膏。取干膏,置 的烧瓶中加甲醇 ,回流提取小时,滤过,滤液 蒸干,残渣加甲醇使溶解,制成阴性供试品溶液。薄层色谱 照薄层色谱法《中国药典》 年版一部附录试验,吸取颗粒剂供 试品溶液“橙度苷对照品溶液“,陈皮阴性供试品溶液;分别点于同一 .%氢氧化钠的硅胶薄层板上,以氯仿一甲醇一乙酸乙酯一水:::为展 开剂,展开,取出,晾干.置紫外灯 下检视.供试品色谱中,在与对照 品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点.阴性供试品色谱中,在相应的位置 上无相应颜色的荧光斑点。薄层色谱图见附图? ..银仙通肺宝颗粒中黄芪的定性鉴别 选择黄芪中的主要有效成分黄芪甲苷用于制剂成品的特征鉴别。 黄芪甲苷对照品溶液的制备 称取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每含的溶液,作为黄芪甲苷对照 品溶液。 颗粒剂供试品溶液的制备 取颗粒剂成品袋,研细,置索氏提取器中,加%氢氧化钾甲醇溶液, 加热回流至无色,甲醇提取液水浴蒸干,残渣加水使溶解,移至分液漏斗中, 用乙醚萃取次,每次,弃去乙醚液。水液加水饱和的氯仿一正丁醇: 提取次,每次,合并氯仿一正丁醇溶液,加.%氢氧化钾溶液,洗涤 次。将氯仿一正丁醇液蒸干,残渣加 甲醇使溶解,制成颗粒剂供试品溶液。 黄芪阴性供试品溶液的制备 取处方不合黄芪药材量的/,照“制法”项下的方法制备阴性供试品 干浸膏。取干浸膏,置索氏提取器中,加%氢氧化钾甲醇溶液,加热回流 至无色,甲醇提取液水浴蒸干,残渣加水使溶解,移至分液漏斗中,用乙醚萃 取次,每次,弃去乙醚坡。水液加水饱和的氯仿一正丁醇:提取次, 每次,收集氯仿一正丁醇溶液,加.%氢氧化钾溶液洗涤次,将氯仿 一正丁醇液蒸于,残渣加甲醇使溶解,制成阴性供试品溶液。 薄层色谱 照薄层色谱法《中国药典》 年版一部附录试验,吸取颗粒剂供 试品溶液此,黄芪甲苷对照品溶液,黄芪阴性供试品溶液.;分别点于同 一硅胶薄层板上,以氯仿一甲醇一水饱和的正丁醇:: 为展开剂, 在饱和的氨 蒸气下展开,取出,晾于,喷以%硫酸无水乙醇溶液,在?烘约分钟,至斑 点清晰,置日光下和紫外灯下检视.供试品色谱中,在对照品色谱相 应的位置上,显相同的颜色的斑点,而阴性供试品溶液色谱中,在相应的位置无相 应颜色的斑点薄层色谱图见附图...银仙通肺宝颗粒中五味子的定性鉴别 选择五味子对照药材用于制剂成品的特征鉴别。 五味子对照药材溶液的制备 称取五味子对照药材,置平底烧瓶中,加乙酸乙酯超声提取 ,再用 分钟,滤过,滤液移至分液漏斗中,加%氢氧化钾溶液洗涤次,每次 水洗涤次,每次,将乙酸乙酯液蒸至少许,定容至,作为五味子药材溶液。 颗粒剂供试品溶液的制备 平底烧瓶中,加乙酸乙酯超声提取 取颗粒剂成品袋,研细,置 分钟,滤过,滤液移至分液漏斗中,加%氢氧化钾溶液洗涤次,每次,再 用水洗涤次,每次,将乙酸乙酯液蒸至少许,定容至,作为颗粒剂 供试品 溶液。 五味子阴性供试品溶液的制备 取处方不含五味子药材量的/,照“制法”项下的方法制备阴性供试 品干浸膏。取千膏,置平底烧瓶中,加乙酸乙酯,超声处理分钟, 滤过,滤液移至分液漏斗中,加%氢氧化钾溶液洗涤次,每次,继续用水洗 涤次,每次 ,将乙酸乙酯液蒸至.作为阴性供试品溶液。 薄层色谱 照薄层色谱法《中国药典》年版一部附录试验,吸取颗粒剂供 儿,分别点于 试品溶液,五味予对照药材溶液、五味予阴性供试品溶液各 同一硅胶薄层板上,以正己烷一氯仿一乙酸乙酯::为展开剂,展开,取出, 晾干,置紫外灯下检视。供试品色谱中,在与药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点。而阴性供试品色谱无相应颜色的荧光斑点. 薄层色谱图见附图? ..银仙通肺宝颗粒中淫羊藿的定性鉴别 选择淫羊霍中的主要有效成分淫羊霍苷用于制剂成品的特征鉴 别。 淫羊藿苷对照品溶液的制备 称取淫羊藿苷对照品,加甲醇制成每含的溶液,作为淫羊藿苷对照品 溶液。 颗粒剂供试品溶液的制备 取颗粒剂成品袋,研细,用水溶解,滤过,滤液置分液漏斗中,用乙酸 ,合并乙酸乙酯提取液,用%碳酸氢钠溶液洗涤次, 乙酯提取次,每次 每次 ,挥干乙酸乙酯提取液,加甲醇使溶解,作为供试品溶液。 淫羊藿阴性供试品溶液的制备 取处方不含淫羊藿药材量的/,照“制法”项下的方法制备阴性供试 品干浸膏.取干膏,用水溶解,滤过,滤液用乙酸乙酯提取次,每次, 合并乙酸乙酯液,用%碳酸氢钠溶液洗涤次,每次,蒸干乙酸乙酯,加甲醇 使溶解,作为阴性供试品溶液。 薄层色谱 照薄层色谱法《中国药典》年版一部附录试验,吸取颗粒剂供 试品溶液 ,淫羊藿阴性供试品溶液止,对照品溶液,分别点于同一硅胶 板上,以氯仿一甲醇一水饱和的正丁醇 ::为展开剂,在饱和氨蒸气中展开, 取出,晾干,喷以%三氯化铝无水乙醇溶液,晾干,置紫外灯下检视.供 试品色谱中,在对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点.而阴性供试 品色谱无相应颜色的荧光斑点.薄层色谱图见附图~ ..银仙通肺宝颗粒中银杏叶的定性鉴别 选择银杏叶中的主要有效成分银杏内酯用于制剂的特征鉴别。 银杏内酯对照品溶液的制备 称取银杏内酯对照品,加丙酮制成每含.的溶液,作为银杏内酯 对照品溶液。 颗粒剂供试品溶液的制备 取颗粒剂戚品袋,研细,加%丙酮溶液,加热回流,放冷,过滤, 滤液置水浴上挥干丙酮,残渣用乙酸乙酯萃取次,每次 ,合并乙酸乙酯液蒸 干,残渣用%乙醇溶液溶解,加于聚酰胺柱上柱长,内径,聚酰胺 放冷,浓缩液用乙酸乙酯 ,用%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩至 提取次,每次 ,合并滤液,蒸干,残渣用丙酮溶解,作为供试品溶液。 银杏叶阴性供试品溶液的制备 取处方不含银杏叶药材量的/,照“制法”项下的方法制备阴性供试 品干浸膏,取干膏.,加%丙酮溶液加热回流小时,放冷,过滤,蒸 去丙酮,残液用乙酸乙酯萃取次,每次,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加 %乙醇溶液使溶解,加于聚酰胺柱柱长 ,内径,聚酰胺 上,用 %乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩至 ,浓缩液用乙酸乙酯提取次,每次 ,合并滤液,蒸干,残渣加丙酮溶解,作为阴性供试品溶液。 薄层色谱 照薄层色谱法《中国药典》年版一部附录试验,吸取颗粒荆供 试品溶液.,阴性供试品溶液血,对照品溶液.,分别点于同一硅胶 ?下展开,晾于, 薄层板上,以甲苯一乙酸乙酯一丙酮一甲醇:::,为展开荆, 一 在 。下加热分钟,置紫外灯 下捡视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性供试品品色谱中,在相应的 位置上无相应的荧光斑点。薄层色谱图见附图? ..小结 经筛选的最佳制剂工艺所得成品中陈皮、黄芪、五味子、淫羊藿、银杏叶色 。 谱斑点清晰,特征性强,重现性好,阴性无干扰。 .检查项目研究 , ..粒度 照?中国药典》年版一部附录颗粒剂项下检查。取本品单剂量包装 袋每袋 ,称定重量,置药筛内过筛,过筛时,将筛保持水平状态,左右往 返轻轻筛动分钟,先过四号筛,再过一号筛。通结果见表?。 表粒度检查结果 .? 由三批样品的检验结果可以看出,不能通过一号筛和能通过四号筛的颗粒和 粉末总和都未超过.%,符合规定。 ..水份 照《中国药典》年版一部附录?水分测定法,第二法【甲苯法】试验 因本品含挥发油,故采用甲苯法。检验结果见表? 表水分测定结果. . 结论,由三批样品的检验结果可以看出,所测水分均未超过.%,符合规定。 ..溶化性 加热 年版一部附录颗粒剂项下检查。取供试品 照“中国药典》 水?。,搅拌分钟,结果见表。表溶化性测定结果 .?结论:由三批样品的检验结果可以看出,在所得溶化时间内,颗粒全部溶化, . 且无焦屑等异物,符合规定。 ..装量差异 照《中国药典》年版一部附录颗粒剂项下检查。取供试品袋,分 别精密称定每袋内容物的重量,每袋重量与标示量相比,限量在%以内,超出 限量的不得多出袋。结果三批样品均符合规定。 ..重金属 称取银仙通肺宝颗粒供试品,置干燥的坩锅中缓缓炽灼至完全碳化,放冷 至室温,加硫酸使湿润,低温加热使硫酸除尽后,加硝酸.,蒸干,小 心加热至氧化氮除尽后,放冷,在。炽灼.小时使完全灰化,放冷,加 盐酸,置水浴上蒸干后加水 ,加酚酞指示剂滴,滴加浓氨试液至溶液 呈淡红色,再加醋酸盐缓冲溶液.与水适量使成。照《中国 药典》午版一部附录?重金属检查法的第二法,经三批样品检查,结果 见表。 表重金属检查结果 .. ,符合规定。 根据三个批号样品检查的结果,重金属限量均未超过 .银仙通肺宝颗粒中岩白菜素的含量测定 岩白菜素为紫金牛的有效成分之一,具有镇咳、祛痰、平喘、抗菌、抗病毒等 药理作用。橙皮苷为陈皮中的主要有效成分之一,具有祛痰、平喘、抗炎、抗过敏 等药理作用。为了有效地控制产品质量,我们建立了高效液相色谱法测定银仙通肺 宝颗粒中岩白菜素、橙皮苷的含量。此法具有分离效果好、操作简便、灵敏度高、 精密度好等特点。因此,对控制银仙通肺宝颗粒产品的质量具有 重要意义。..仪器与 一 ,四元泵系统,器: 高效液相色谱仪:美国安捷伦公司 色谱工作站。甲醇为色谱纯,其余 ,配 试剂为分析纯;重蒸水;岩白菜素对照品中国药典收载的岩白菜 素原料,中国 和 ,含量为.%, 药典法含量.%,归一法检测波长为 . ? 。 %。银仙通肺宝颗粒自制批号: 。.方法与结果 供试品溶液提取条件的筛选 %甲醇溶液、%甲醇溶液三种溶 .样品提取溶媒的筛选我们采用了纯甲醇、 剂分别对样品进行提取,通过比较高效液相测定结果,发现纯甲 醇能完全提尽岩白 菜素,但是极性小的成分同时也被提取出来;%甲醇溶液不能提尽 岩白菜素,影响 测定结果:只有%甲醇溶液既能完全提尽岩白菜素,又能减少极性小的成分被提 取出来。 .样品提取方法的筛选我们比较了加热回流法和超声波震荡法,实验结果表明 采用超声波震荡法提取优于加热回流法提取,同时我们对样品提取时间的含量进 行了考察,根据考察结果确定超声波震荡法提取时问为分钟。 供试品溶液的制备 取颗粒剂约.,研细,精密称定,置具塞三角烧瓶中,加甲醇,轻轻 振摇,称定重量,超声处理分钟,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,充分 振摇,滤过,取续滤液作为供试品溶液。 色谱条件的确定 ?, .色谱柱 ,.; 柱温。 .流速./ 手动进样,进样量“ .流动相 比较了甲醇一水和乙腈一水种系统,发现前一种流动相系统分离效果 并不比后一种差,而且前一种流动相系统的成本低,所以确定甲 醇一水系统为本实 验的流动相系统。在此基础上,考虑主峰分离效果、出峰时间等因素,调节甲醇与 ::。 水的比例,确定甲醇一水一冰醋酸的体积比为 .检测波长取岩白菜素的标准品用甲醇溶液溶解,以纯甲醇溶液为空白,在 ?紫外波长范围内扫描,得紫外吸收光谱见附图,由图可见 岩白菜素在左右有最大吸收,故确定本实验中岩白菜素的测定波长为 。 系统适用性试验 参照中华人民共和国药典一部附录高效液相色谱法对仪器进行系统适 用性试验,规定如下: .色谱柱的理论塔板数不得低于。 .分离度 不得少于.。 .对称因子不得大于. 。精密度试验 取岩白菜素对照