重组人生长激素、雌激素联合应用对去势大鼠剩余牙槽骨吸收的影响

重组人生长激素、雌激素联合应用对去势大鼠剩余牙槽骨吸收的影响 论文范文 题目:重组人生长激素、雌激素联合应用对 去势大鼠剩余牙槽骨吸收的影响 编辑:司马小 作者:唐成芳 李晓红 郭三萍 肖卓 胡亚军 【摘要】 目的 观察重组人生长激素、雌激素(estrone, E2)及两者联合应用对抗酒石酸酸性酶(TRAP)的活性及剩余牙槽骨骨形态计量学指标的影响～以明确两药单用及联合应用延缓骨质疏松(OP)所致的剩余牙槽骨吸收及其机制。方法 通过去除SD大鼠双侧卵巢～拔除单侧上颌磨牙～建立去势大鼠剩余牙槽骨动物模型～建模成功后分为模型组和治疗组～治疗组分别给予、E2单用及联合治疗。药物治疗4周及8周后～检测各组血清TRAP含量及形态计量学指标的改变。结果 ?E2治疗组(ERT)、联合治疗组含量低于模型组(P<0.05)～差异有统计学意义,ERT、两组TRAP含量基本相同～但都与治疗组有统计学差异(P<0.05)。?去势可使大鼠剩余牙槽骨的骨小梁面积比减少～宽度减小～髓腔扩大～加速剩余牙槽骨的吸收。、E2单用及两者联合应用4周及 8周后可提高去势大鼠剩余牙槽骨的骨小梁宽度、骨小梁面积视野百分 比～降低骨小梁间隙宽度。结论 、E2单用及两者联合应用在一 定程度上延缓骨质疏松大鼠剩余牙槽骨的快速吸收。 【关键词】 骨质疏松,重组人生长激素,雌激素(E2),剩余 牙槽骨,抗酒石酸酸性酶,形态计量,大鼠 The effect of estrogen and recombine human growth hormone on residual ridge reduction in osteoporotic rats ABSTRACT: Objective To study the effect of estrogen, recombine human growth hormone and their combinations on residual ridge reduction in osteoporotic rats. Methods Animal models were established by ovariectomy and exodontia on left partial maxillary, then were devided into osteoporosis group and treatment groups; treatment groups were given estrogen and recombine human growth hormone medicial alone and their recombinations. After treatment for 4 and 8 weeks with drugs, the effects of estrogen and recombine human growth hormone on histomorphometry changes in maxillary were observed in each gro phosphatase level was obvionsly lower in ERT group and . ? Rabecular width and trabecular area of residual ridge reduced, trabecular separation of residual ridge enlarged in osteoporosis rats, osteoporosis accelerated resorption of residual ridge. Using estrogen, recombine human growth hormone alone and their recombinations for 4 and 8 weeks can increase trabecular area and trabecular width, reduce trabecular separation of residual ridge in osteoporosis rats. Conclusion Single use of estrogen and recombine human growth hormone and their recombinations can relieve resorption of residual ridge in some degree. KEY WORDS: osteoporosis; recombine human growth hormone; acid phosphatase; bone histomorphometry; rat 剩余牙槽骨吸收是影响义齿固位、稳定和咀嚼功能最重要的因素 之一～与骨质疏松(osteoporosis, OP)等全身疾病有一定相关性 。研究骨吸收抑制剂和骨形成刺激剂联合用药是防治OP患者牙 槽骨吸收、阻止骨量持续丢失并促进骨形成、有效提高骨量的关键。 刘慧珠、梁慧君等研究表明:生长激素是绝经后骨代谢的影响 因素之一～可能与雌激素(estrogen, E2)存在相互作用～为联合两药 治疗OP提供了理论基础。故本实验通过建立OP及剩余牙槽骨动物模 型～观察了联合应用重组人生长激素(recombine human growth 、E2对去势大鼠剩余牙槽骨形态计量学及血清抗酒 石酸酸性酶的影 响。 1 材料与方法 1.1 实验动物的分组与模型建立 选用4月龄未交配的同批次 Sprague Dawley(SD)雌性大鼠65只(西安交通大学医学动物实验中心 提供的国家A级实验动物)～体重250-280g。随机分为两组:去势组 (ovariectomized rats, OVX)48只～假手术组 只。OVX组大鼠全麻下摘除双侧卵巢～ 组大鼠切除卵巢附近脂肪组织一块(术后第二天去势组2只大鼠死亡～ 剔出实验)。常规喂养8周后～分别随机抽取两组大鼠各5只处死～取 左侧股骨近心端进行OP造模检测～在全麻下采用自制的开口器及牙挺 拔除所有剩余大鼠左侧上颌磨牙(拔牙后～2个组各死亡1只大鼠～剔 出实验)。建模成功后～将OVX组大鼠随机分为4组～每组10只:分 别为骨质疏松组(OP)、雌激素治疗组(estrone replacement therapy, ERT)、重组人生长激素治疗组(recombine human growth hormone 、雌激素生长激素联合治疗组(estrone and recombine human growth hormone treatment group, ,假手术对照组大鼠11只。ERT组、 组于拔牙后第2天给予苯甲酸雌二醇皮下注射～0.1mL/kg～3日1次, 组、组每天给予皮下注射～0.15u/kg～每日 1次,其余各组每次注射等量的生理盐水。各组动物其他饲养条件均一致。 1.2 取材及切片制作 给药4周及8周后各组随机抽取大鼠5只处死～经腹主动脉抽血～离心～测定血清TRAP含量,取左侧上颌骨～剔净骨周围的软组织～多聚甲醛固定3d～EDTA脱钙3周～流水冲洗～乙醇脱水、透明～常规石蜡包埋～沿牙长轴方向纵行切片～常规HE染色。 1.3 检测指标 1.3.1 OP模型检测 采用病理图像分析仪对去势8周所取左侧股骨骨组织形态计量学测量～计算平均骨小梁宽度(mean trabecular width, MTW)、平均骨小梁间距(mean trabecular separation, MTS)、平均骨小梁面积/视野面积百分比(trabecular bone volume, TBV)。 1.3.2 血清TRAP的检测 采用对硝基苯基磷酸酯为底物的比色法测定各组TRAP含量。 1.3.3 左侧上颌骨骨组织形态计量学的测量 应用病理图像分析仪进行骨组织计量学测定～计算MTW、MTS、TBV。 1.4 统计学分析 应用SPSS12.0统计软件～对1.3.1数据采用t检验分析～1.3.2和1.3.3数据采用单因素方差分析～结果以均数〒标准差(〒s)表示～检验水准α=0.05。 2 结果 2.1 模型复制结果 见表1。OVX组大鼠MTS明显高于组～OVX组MTW、TBV明显低于组～统计学上有显著性差异(P<0.05)。 表1 手术8周时OVX组及组股骨组织切片骨计量学分析结果,略, Table 1 After operation 8 weeks, BMH result of the slices *P<0.05 vs. s 2.2 药物治疗后大鼠血清中TRAP含量检测结果 见表2。用药4周、8周后～组、ERT组、组TRAP含量均低于OP组,有显著性差异(P<0.05),组低于组～有显著性差异(P<0.05)～与ERT组比较无差异(P>0.05)。各4周组血中TRAP浓度均大于8周组～但无显著性差异(P>0.05)。 2.3 药物治疗后上颌骨骨组织形态计量学的测量结果 见表3。 2.3.1 用药4周后结果 OP组较组MTW、TBV明显降低～MTS明显增加,三个治疗组较OP组MTW、TBV明显增加,组较OP组MTS明显减小～有显著性差异。组MTW、TBV高于单独用药组～MTS低于单独用药组～有显著性差异(P<0.05)。 表2 各组大鼠用药4周和8周后血中TRAP浓度,略, Table 2 The serum TRAP level in each group after treatment 2.3.2 用药8周后结果 OP组较组MTW、TBV明显降低～MTS明显增加,三个治疗组较OP组MTW、TBV明显增加～MTS明显减小～有显著性差异(P<0.01)。3个药物治疗组之间MTW、MTS、TBV无明显统计学差异(P>0.05)。 2.3.3 治疗8周后与治疗4周后比较结果 OP组和单独用药组MTW、MTS、TBV比较差异有统计学意义。 表3 药物治疗后上颌骨骨组织形态计量学的测量结果,略, Table 3 The BMH result of the slices of maxillary after treatment *P<0.05, **P<0.01 vs. OP; ?P<0.05, ??P<0.01 vs. 3 讨论 3.1 模型建立可靠 绝经后大鼠OP的模型于1969年由Saville首先建立～后经反复证实～已经成为研究绝经后骨质疏松(PMO)的经典动物模型。本实验股骨形态计量学结果表明切除大鼠卵巢能够建立动物OP模型。国内外研究表明～躯干四肢骨的OP与颌骨OP之间呈明显的线性关系～与剩余牙槽骨密切相关～颌骨OP是全身OP在口腔中的表现。本实验去除了大鼠卵巢并拔除了大鼠磨牙～经股骨组织形态计量学检测证实～因此认为颌骨OP及剩余牙槽骨模型可靠。 3.2 治疗效果 OP是以骨量减少、骨小梁变细变稀乃至断裂的骨微观结构退化为特征的一种疾病。有多种研究表明:生长激素及雌激素单独运用对治疗OP均有一定的疗效～但两者联合应用治疗OP效果目前尚无定论。临床诊断OP主要有骨形态计量学、骨密度以及成骨、破骨指标的测定。骨结构的维持是成骨活动和破骨活动的动态平衡～任何一方面的变化都会引起骨组织的改变。骨组织形态计量学是用定量的方法分析骨组织形态结构改变的测量技术～虽然是创伤性检查～但用于动物实验研究～能反映骨小梁结构变化[12]。反映的是骨组织最终形态学的变化～作为疗效观察的主要指标。另外血清中的TRAP水平反映破骨细胞的活性和骨吸收的状态～原发性骨质疏松患者及绝经后妇女～血清TRAP活性明显增高～其活性与骨矿密度呈负相关[13]。其仅是导致形态计量学改变的一方面～故作为辅助指标。本研究选择骨组织形态计量学和TRAP作为疗效观察的指标。 本实验OP组较OVX组MTW、TBV明显降低～TRAP、MTS明显增加～表明OP可使破骨细胞活性增强促进牙槽骨的吸收。各治疗组治疗4周及8周后～MTW、TBV均显著高于OP组～MTS明显小于OP组～表明一定程度延缓了牙槽骨的吸收。 组TRAP浓度低于、OP组～与ERT组没有差异,MTW、TBV都显著高于OP组～MTS明显小于OP组。表明雌激素主要通过抑制骨吸收来发挥其疗效～可能主要通过促进成骨细胞活性并可能具有轻度的促进破骨细胞活性的作用～最终改善骨小梁结构～ 因此联合用药时削弱了雌激素对骨吸收的抑制作用～致使组TRAP浓度高于ERT组。 各组大鼠用药4周后TRAP含量均高于8周～说明拔牙早期牙槽骨的改建活跃～破骨细胞活性增强～牙槽骨吸收较快,而随着时间的推移～改建活动趋于缓慢～破骨活性也随之减弱～牙槽骨吸收减慢。这与临床上拔牙后1月剩余牙槽骨吸收程度大于拔牙后2月的表现相一致。 ERT、组颌骨骨小梁结构改善8周优于4周～组4周、8周统计学上无差异。可能是由于组提高成骨细胞活性～同时抑制破骨细胞的活性也明显增强～能够在较短的时间内改善OP的破骨大于成骨的过程～使骨量增加,但随着成骨破骨的耦联活动最终使骨形成与骨吸收在一个新的水平上达到平衡。ERT、组则可能由于单因素的作用～要改善破骨大于成骨的活动～使骨量增加最终达到骨形成与骨吸收的平衡～将需要更长的时间。 本结果可为临床上治疗OP、延缓颌骨、剩余牙槽骨的吸收～提高义齿修复效果提供新的基础理论依据～对临床药物选用也有一定指导意义。 综上所述～ERT、及两者联合应用在一定程度上延缓OP大鼠剩余牙槽骨的快速吸收。ERT通过抑制破骨细胞活性～可能促进成骨细胞活性延缓牙槽骨的吸收;联合应用两药能够在较短时间内达到成骨破骨的平衡～改善OP的状态。但达到平衡后～联合用药效果与单独用药没有差别。 【参考文献】 徐普.可摘局部义齿和全口义齿修复设计原理和运用 [M]. 北京:北京医科大学出版社 Krall, Elizabeth A. 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