独一味胶囊镇痛、止血作用的实验研究

独一味胶囊镇痛、止血作用的实验研究 【摘要】通过观察独一味胶囊对小鼠镇痛作用与血清、脑组织中NO含量的影响，以及对小鼠出血时间和血浆复钙时间的影响，得出结论:独一味胶囊能显著提高小鼠痛阈值，降低小鼠血清及脑组织中NO水平，明显缩短小鼠出血时间及血浆复钙时间，表明独一味胶囊具有良好的镇痛、止血作用。 【关键词】独一味胶囊 镇痛 止血 一氧化氮(NO) 独一味胶囊是《中国药典》收载的经典中成药，具有活血止痛、化瘀止血的功能。本文主要对独一味胶囊进行了镇痛、止血新机理探讨和研究，进一步阐明独一味胶囊镇痛、止血的作用机理，从而为临床药物的使用提供实验依据。 1 材料 1.1对象 选用健康3,5周龄昆明种小鼠150只，雌雄各半，体质量24,26g，购于成都中医药大学实验动物中心。整个实验过程小鼠自由饮食饮水，于室温(22?2)?、24小时饲养环境中光照12小时，黑暗12小时条件下饲养。 1.2试剂及仪器 独一味胶囊(DYW，甘肃独一味药业提供，批号:07111214);独一味胶囊高剂量为925.71mg/kg，中剂量为462.86mg/kg，低剂量为231.43mg/kg;阿司匹林(ASPL，陕西汉王药业有限公司，批号:070416);L-精氨酸(L-Arg)(北京化学试剂公司，批号:070112);L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)(美国Sigma公司)。紫外可见分光光度计(日本 岛津)，柠檬酸钠溶液、生理盐水、氯化钙溶液等。 2 方法 2.1对小鼠镇痛作用及血清和脑组织NO含量的影响 2.1.1以小鼠痛阈的影响 2.1.1.1浸尾法(45?)检测痛阈 昆明种小鼠50只，随机分为5组:DYW组(462.86mg/kg)、DYW(462.86 mg/kg)+L-Arg(200mg/kg)、DYW(462.86mg/kg)+L-NAME(37.5mg/kg)、ASPL组(200mg/kg)、对照组(生理盐水)。将小鼠尾尖部3cm处用苦味酸做一标记，并将这一部位浸入45?热水中，以鼠尾缩出水面为痛反应指标，以鼠尾浸入水中至缩出水面的时间为痛阈。首先测定基础痛阈(间隔10 min测定2次痛阈，以2次均数为基础痛阈)。然后各组依次分别:DYW灌胃(ig)、DYW灌胃(ig)+L-Arg腹腔注射(ip)、DYW灌胃(ig)+L-NAME腹腔注射(ip)、ASPL灌胃(ig)、生理盐水灌胃(ig)。药后30分钟、60分钟分别按药前方法测定药后痛阈。实验结束后，摘小鼠眼球取血，3500r/min离心15分钟，取血清。取血后快速处死小鼠取脑称质量，加入适量生理盐水低温(冰水浴中)制成脑组织匀浆。血清和脑组织匀浆均置于-20?冰箱保存待测。 2.1.1.2血清及脑组织NO含量的测定 按试剂盒说明采用硝酸还原酶法进行操作，检测血清和脑组织中的NO含量，于550nm处用Griess法测定。 2.2对小鼠出血时间及血浆复钙时间的影响 2.2.1对出血时间的影响[1] 取22,25g小鼠45只，雌雄各半，随机分为生理盐水组、药物高、中、低剂量组，共4组，禁食禁水24小 时，按0.02ml/g体质量分别灌胃给予生理盐水和相应剂量的药物。45分钟后剪去鼠尾3mm便有血液流出，立即计时，每隔10s用滤纸轻轻拭血1次，直至拭后不再出血为止。从开始出血到出血停止，所经历时间即为小鼠出血时间。 2.2.2对血浆复钙时间的影响[2] 取22,25g小鼠45只，雌雄各半，实验分组同上，禁食禁水24小时。摘眼球取血1ml，放入加有0.1ml柠檬酸钠溶(38mg/ml)的离心管内，混匀后以1000r/min离心10分钟，取内径8mm试管1支，加入混合血浆和生理盐水各80μl，随即放入37?水浴中温浴2分钟，然后加入80μl氯化钙溶(2.8mg/ml)，混匀后再放入37?水浴中，立即计时，自加钙后至纤维蛋白形成、液面不动所需时间，即为生理盐水组血浆复钙时间。将生理盐水换成独一味胶囊药物高、中、低剂量，按相同方法和条件测出各组的血浆复钙时间。 2.3统计学处理 应用SPSS10.0软件进行统计学处理。数据以x-?s表示，组间比较采用t检验，P<0.05表示有统计学差异。 3 结果 3.1对小鼠镇痛作用及血清、脑组织中NO含量的影响 3.1.1对小鼠痛阈的影响 结果显示:DYW组在提高小鼠痛阈值方面优于生理盐水组;L-Arg能显著减弱DYW的镇痛作用。 3.1.2对小鼠血清和脑组织NO含量的影响 结果显示:DYW组小鼠血清和脑组织中NO含量显著低于生理盐水组;同时，DYW组同DYW+L-Arg组比较，后者脑组织中NO水平明显高于前者。 3.2对小鼠出血时间及血浆复钙时间的影响 实验表明，药物组 同对照组比较:独一味胶囊高、中剂量组在缩短出血时间及血浆复钙时间方面，明显优于对照组;剂量组之间比较，高剂量组效果优于低剂量组，呈现明显的量效关系。 4 讨论 本研究结果显示，独一味胶囊对小鼠浸尾45?致痛模型有显著的 -Arg可部分拮抗独一味胶囊的镇痛作用，L-NAME可部分增强镇痛作用，L 独一味胶囊的镇痛作用。同时独一味胶囊可明显降低小鼠血清和脑组织中NO含量，提示独一味胶囊的镇痛作用机制与降低体内过量的NO有关。对于小鼠止血实验表明，独一味胶囊能明显缩短小鼠出血时间及血浆复钙时间，说明独一味胶囊具有明显的止血作用。 参 考 文 献 [1]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社，1993:111. [2]阴健.中药现代研究与临床应用[M].北京:学苑出版社，1995:68.