[doc] 循环中狼疮抗凝物与检测方法进展

[doc] 循环中狼疮抗凝物与检测方法进展 循环中狼疮抗凝物与检测方法进展 38 【综述】 【Renews】 医学榆验杂志2008年2月第9卷第1期 ChineseJournalofMedicalLaboratory”Technology,Feb2008,Vo1.9No.1 循环中狼疮抗凝物与检测方法进展 ADVANCEMENTINRESEARCHES0FCIRCULATINGLUPUS ANTICOAGULANTANDITSDETECTINGMETHODS 阳泽彬,综述王金良,审校 (大津市公安院,天津300042) 摘要m循环rfl的狼ds ynZebin,WangJinliang.TianjinHospitalofPublicSecurity,Tianjin300042,Chim~ AbstractBothofthecirculatinglupusanticoagulantandtheantiphospholipidantibodyarethenecessaryindexesforthediagnosisof antiphospholipidsyndrome.Basedontherecentforeignliteratures,thepossiblepathologicalanticoagulantsinthebodyandtheirrelateddis— easeswereintroduced.Meanwhile,themechanismsofthrombosisformationwereexplored. KeywordsCirculatinglupusanticoagulant;Detectingmethods;Indication;I nfluencingfactor [中分类]R446.6[文献怀码]A[义章编号]1606—8025(2008)01—038—02 体内的JF常抗凝系统之外【IJ’能的病理性抗凝物大休 }_?f分为类:,心仃?;f0L症状的,女II抗【大l子?,抗予 ?,抗因子?,抗l天l子X,抗于?,抗vWF子,抗纤维蛋白 /纤维货,肝素样抗凝物.,忠者fIJ’能有程度同的出 血者,如抗子V.,忠本尢出血症状者,甚至易形成 血栓者,耍?狼疮抗凝物,抗【人l?. 狼疮抗凝物(LupusAnticoagulant,I,A)足町住体内一然产 乍或冈自身免疫In』产,I的质免疫球自,它可B2精蛋 白1(132GP1),凝血附原及』他柯负IU衙的磷脂结合lmf使磷脂 依赖性的凝时问延长..IAj10【清抗磷脂抗体两各均为阳 性是诊断抗磷脂抗综合的依据.适川于『f『L僻性血柃患 或习惯性流产和北胎的殳I女.TJA持续出现阳性常可提示10L 栓复发I而需继续fl服抗凝J翊J,长期服用抗凝剂会仃出血的 危险,此时的lJA{{;=测对决定继续服药起着关键性作用. 本文拟就TJA试验的进展与枪测巾的『廿J作一介绍.为使内 容集中,不涉及抗磷脂抗体的问题. lIA检测的适应症 (一)年轻((50岁)的静脉和/或动脉血栓的患者.柃塞 部位常住肺部或脏器质. (二)伴有或尢f1身免疫病的患者(SLE,RA,自身免疫性 血小板减少,闩身免疫怍溶帆性贫血等) (二)有惯性流产或死胎的女}女. 2LA和抗磷脂抗综合征的血栓形成机制 主要有:促发蛋fjC或蛋rjS途径的障碍,抑制组织因子 的活化途径,使内皮细胞的纽带素(Annexin)发生置换,促使咀 小板和内皮细胞的活化,诱发组织子的活化和合成,影响纤 维蛋白溶解功能,使纤溶酶原激活物的抑制物增多以及诱发 细胞凋亡等. 3LA试验的类型和选择 斟际栓j止血学会(ISqH)的抗磷脂抗体/狼疮抗凝物 分会提的诊断为: (一)1个或更KI』’_f『日J的磷脂依赖性凝血时问延长,即超 过_r参考值的I限. (二)能址明此种时U延长址于标水中含有抑制物;而 不是山于凝『大1子缺乏. (三)明此抑制物uf抑制负电荷磷脂蛋白复合物,而 是抑制某一凝『人i_『. 根据以f:标准而f”旧层次的试验类型. 3.1筛查试验 3.1.1传统应用AIWF(部分凝血活酶时间)和KCT(白陶土 凝血时间)试验AI:qT试验用不ld厂家制备的试剂因磷脂的 成分和浓度不同而出现差异.如含磷脂酰丝氩酸量多的试 剂会减低榆出率.对磷脂成分的要求足最好能鉴别出LA和 凝血了抑制物,尤困难的是能攀别LA和抗?闪子抑制 物. 3.1.2KCT试验此法磷脂含景较低而比Am试验敏 感,fH白陶上试剂不能用于光学法的检测H’易于形成沉淀物. 此试验对凝血试验时问长的标小重复性差.近期有人硅微粒 子代替白陶土,试验的敏感件一致,可川于光学法检测且不形 成沉淀. 3.1.3稀释蝰蛇毒试验(dRVVT)此法的原理足以蝰蛇毒 激活因子X稀释的磷脂一起用于柃测.此法的特异性好, 在临床上应用较多.Galli等曾比较dRVVTjKCT试验.结 果前者对有血栓高危险性的患肯敏感性更佳』.Pengo等也 发现dRVVT对~2GP1抗体性的IJA更为敏感.检测为阳性的 患者更易形成动脉血栓,但并非所有厂家的试剂都能达此效 【『1国医学检验杂志2008年2月第9卷第1期ChineseJoumalofMedicalLaboratoryTechnolo.Feb20o8.voL9No.1 果J. 3.1.4稀释凝血酶原时问也曾作为筛查试验现已有基因 重绀的凝血活酶用于柃测.此法应用较少.l述各种筛查试 验均小能100%柃出I|A,最好廊用2个试验,即dRVVT结合 Am或KCT试验.女【l果只能作Am,需用1个敏感性高配 合1个敏感性低的试剂来检测.TA试验性的患者廊12 川后经再次榆测确定. 3.2混合试验等量混合患者血浆与正常者血浆进行柃 测.如凝『f『I.时问缩短,明能由于缺乏某个或多个凝因 子.如仍不能纠,则表明患浆内有抑制物.此试验虽 简单,但fE常面l浆需}fl多个(3O人以l)健康者血浆混合制成, 冻存于一70~C,冻f的商Il1]I』l常血浆也应符合此要求.混合 试验的结果解释应慎重.判定心延长的凝血时问是否被纠 jFJ,遵循3个标准: 3.2,1纠正试验结果应达正常参考值以内参考值要依实 验室的仪器,试剂等条件I(1i门行测定Inj得.结果最好以患者/ 健康者的凝时『u】比值来报{. 3.2,2正常血浆加患者血浆纠正试验的凝血时间比正常血 浆加非IA(凝血因子缺乏)血浆的凝血时间要长(>均值的 2s, 3.2.3要符合Rosner等提出循环抗凝物(ICA)的计算指 数 ICA=[(Ctmix—CTnpp)/CT患者]×100 CTmix混合凝血时.Npp]1-常混合10L浆 如ICA值越大,捉爪越有可能存在抑制物.此标准需由 实验室经测定决定其界限值(切点).混合试验的不足足可 有假阴性,对弱的IJA能榆【}|. 3.3确证试验有数种试验可供选择. 3.3.1以老化的血小板经反复冻融后作为磷脂,进行Am 或dRVVT或KCT试验. 3.3.2用人工合成的双层或立体结构的磷脂进行上述试验. 此类确1试验也行缺点,女I1含肝素的ff『L浆会有IJA样作 用,采取血标小时绝小能朋肝素抗凝.含抗凝冈子的If『【浆(如 血友病患者)会行IA样作用,必须仔细问讯病史以排除. 34复合试验即将筛_杏试验确证试验合并,分别jH1低 浓度(低)干?高浓度(高)的磷脂作2次ATrr或dRVVT或 KCT试验.试验结果进行计算:低浓度的时问一高浓度的时 间/低浓度的时问×100或计算低浓度时/高浓度时比值. 也有冉加作一患者血浆与正常血浆的混合试验.此法简单义 可靠,frI也需刚更多的患者标本进一步证实. 4检测前阶段的影响因素 检测血浆tI一所含的Ifl1.IJ~板量是重要的因素,儿其是当血 浆冻存后再复溶时,浆内的磷脂会明升高.Sletnes等观 察,常用的3000离心血小板的残留最高达16×10/L,而用滤 器过滤后可为0,故小经过滤会使检测的时间假忡缩短.用重 复离心法或川0.2m乙酸纤维素薄膜过滤的结果满意. 也有研究发现,过滤可引起高分子量凝血蛋白(vwF,因子?) 39 的丢失,造成APrr时问的假性延长. 5LA试验尚待解决的问题 服用维生素K的拈抗剂(如Coumarin)的患者,其凝血时 问延长与IA相似,使上述的筛查,混合和确证试验结果难以 解释.冈此,必须存停药后检测,或将患者血浆j正常血浆混 合后柃测,也可分别用低浓度和高浓度的磷脂进行试验,或.}}j 蛇毒texterin/ecarin凝血时间法. 抗凝血酶与抗[~2GP1的鉴别.I|A活性可依[~2GP1和凝 血酶的存在与否分为2类,此2类发牛』f『【栓的危险性有差 别,敞有必要加以别.原则I可用固相免疫测定法来分别 检测2种抗体,但检测的方法学尚未标准化.最新的进展是 用分别加和不加心磷脂的确证试验.加者如LA凝血时间缩 短提示为[~2GP1依赖性的LA.另一一法是调整氯化钙的浓 度,分别jH高浓度(10mmol/1)和低浓度(5mmol/1)来促进 152GP1与磷脂的结合,比较2浓度下的APrr或dRVVT.高浓 度的时问进一步延长,表明有152GP1依赖性的LA活性.以上 两法均望成为鉴别试验. 参考文献 [1]TripodiA.Laboratorytestingforlupusanticoagulants:Areviewofis— suesaffectingresults[J].ClinChem,2007,53(9):1629—1635. 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