【doc】不同剂量牛初乳粉对小鼠免疫调节作用的研究

【doc】不同剂量牛初乳粉对小鼠免疫调节作用的研究 不同剂量牛初乳粉对小鼠免疫调节作用的 研究 ※营养卫生最品雨2005,Vo1.26,No.11227 不同剂量牛初乳粉对小鼠 免疫调节作用的研究 徐丽2,生庆海1,郭顺堂:? (1.石家庄三鹿集团股份有限公司,河北石家庄050071; 2.中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083) 摘要:本研究用牛初乳粉对小鼠进行喂养实验,20d后测定NK细胞杀伤活性,T淋巴细胞增殖活性,巨噬 细胞的吞噬功能,研究了不同剂量的牛初乳粉对小鼠免疫调节作用效果.结果明:剂量在36.46~1250mg/kg?d 之间的牛初乳粉都能极显着地增强巨噬细胞的吞噬功能,NK细胞的杀伤活性和T淋巴细胞的增殖活性,其中 78.13~156.25mg~g?d之间对小鼠细胞免疫调节作用和巨噬细胞吞噬功能增强作用效果优于其他剂量. 关键词:牛初乳粉;巨噬细胞;NK细胞;T淋巴细胞;免疫调节 StudyonImmuneModulationEffectofDifferentDosesBovineColostrumsP owderonMice XULi一,SHENGQing—hai.GOUShun—tang’ (1.ShijiazhuangSanluCo.Ltd.,Shijiazhuang050071,China; 2.CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083,China) Abstract:Inthisstudy,cytotoxicactivityofnaturalkillercells,T-lymphocyteproliferationandmacrophagefunctionwere detectedaftertwentydaysofmicefeedingwithdifferentdosesbovinecolostrums.Theresultsshowedthatthephagocytosis,cytotoxic activityofnaturalkillercells,T-lymphocyteproliferationcouldbee~ancedsignificantlybybovinecolostrumspowderbetween 36.46mg/kg’dand1250mg/kg’dwhilethedosesbetween78.13mg/kg?dand156.25mg/kg?dweresuperiortoothers. Keywords-bovinecolostrumspowder;macrophage;naturalkillercells;T-lymphocyte;immunemodulation 中图分类号:$879.1文献标识码:A文章编 号:1002.6630(2005)11-0227.04 牛初乳是母牛产犊最初几天内所分泌的乳汁,与常 乳相比,牛初乳为黄褐色,有异臭,味苦,粘度大, 表面张力明显小于常乳,因此被当作一种异常乳….但 近年来研究,发现牛初乳中含有许多生理活性免疫因 收稿日期:2(104-11.16}通讯作者 基金项目:国家科技部”十五”重大攻关项目(2002BA518A10) 作者简介:徐丽(1976.),女,助理工程师,在职硕士,研究方向为乳品加 工. acceleraterenewingfromfatigueobviously Referonces: 【2】 TheMOHofChina.Functionalassessmentprocedureand testmethodsofhealthfood[M].Beijing,1996,53?57. SunJingfang.ExperimentalMethodinAnimal【M】.Beijing: TheRenminhealthPress,2002.154?158,409?512. 【3】 【4】 【5】 ChenRendun.NutritionandHealthFood【MI.Beijing:The ChinaLightIndustryPress,2002.568-574. HuYuming,HuYixiu,ZangXuebing,eta1.Experimen~ studyofanti?fatigueoneucommiaulmoides’Salc~ol【J]. PracticalPreventiveMedicine,2000,5(7):330?331. HuangMei,ChelaLiming.Experimentalstudyofanti—fa- tigueeffectof851jinyuantablet【J].StraitPharmaceutical Journal,2000,2(12):17?18. 228200f.26,No.11良晶雨※营养卫生 子,如免疫球蛋白,乳铁蛋白,溶菌酶,乳过氧化 物酶等,其中免疫球蛋白的含量最高,对机体免疫具 有调节功能.提取牛初乳中的免疫球蛋白,开发牛初 乳粉高端产品,并作为免疫调节剂添加到乳制品中,提 高乳制品的附加值,是目前乳制品开发高端产品的发展 趋势. 本研究用牛初乳粉进行动物喂养实验,并测定小鼠 NK细胞杀伤活性,ConA诱导T淋巴细胞增殖活性,腹 腔巨噬细胞的吞噬功能,研究了不同剂量的牛初乳粉对 小鼠的免疫调节作用效果. 1材料与方法 1.1实验材料及主要试剂 1.1.1实验原料:经低温喷雾干燥得到的免疫球蛋白 含量为16.0%的牛初乳粉,市场采集. 1.1.2实验动物:二级健康BALB/C雄性小鼠,体重 18~22g,由河北省实验动物中心提供(SCXK(冀)2003—2一 oo3). 1.1l3主要试剂 鸡红细胞,Yak.1,ConA,MTT,RPMI1640培 养基,小牛血清,Hanks液,1%NP40,谷氨酰胺乳 酸脱氢酶试剂盒等化学试剂. 1.2主要仪器设备 普通显微镜,紫外可见分光光度仪,倒置显微 镜,二氧化碳培养箱,超净工作台,酶联检测仪,细 胞培养板及细胞培养常用耗材. 1l3实验方法 1.3.1实验剂量设计 将BALB/C雄性小鼠随机分为7组,每组10只.设 6个不同剂量组和一个对照组.对照组采用普通奶粉, 各组剂量按每日每千克小鼠体重摄入牛初乳粉量计,列 表如下: 将样品用蒸馏水溶解,对小鼠灌胃连续20d后测定 小鼠的NK细胞活性,巨噬细胞的吞噬功能和T淋巴细 胞增殖活性. 1.3.2免疫球蛋白含量测定【:】 1.3.3乳酸脱氢酶法(LDH)~IJ定小鼠NK细胞杀伤活性【a】 将传代好的靶细胞(YAC一1)与脾细胞悬液(效应细胞) 加入u型96孔培养板中.靶细胞自然释放孔加靶细胞 和培养液各100ul,靶细胞最大释放孔加靶细胞和 I%NP40各1001.tl,在37”C,5%COz培养箱中培养4h, 然后将96孔培养板离心,吸取每孔上清1001~l置平底96 孔培养板中,同时加入LDH基质液1001.tl,反应3min, 每孔再加入lmol/L的HCI30ul,在酶标仪490nm处测 定光密度值.按下式计算NK细胞活性. 反应孔OD一自然释放孔0D NK细胞漕l生%=::———?—————?———?二_—_×100(1) 最大释放孔OD一自然释放孔OD 1.3l4小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的测定【s】 经20d喂养后,每只鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液 1ml,间隔30min后颈椎脱臼处死,将其仰位固定于鼠 板上,正中剪开腹壁皮肤,经腹腔注入生理盐水2ml, 转动鼠板lmin,然后吸出腹腔洗液lml,平均分滴于2 片载玻片上,放入垫有湿沙布的搪瓷盒内,移置37? 孵育箱中温育30min,孵毕,于生理盐水中漂洗,以 除去未贴片细胞,晾干,以1:1丙酮甲醇溶液固定,4% (V/V)Giemsa.磷酸缓冲液染色3min,再用蒸馏水漂洗晾 干.以吞噬百分率或吞噬指数表示小鼠巨噬细胞吞噬能 力.油镜下计数巨噬细胞,每张片计数100个,按下 式计算吞噬百分率和吞噬指数. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数 吞噬%=——x100(2) 计数的巨噬细胞数 吞噬指数:璺计数的巨噬细胞数(3) 1.3.5ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应测定【s】 将制备好的脾细胞悬液,分两孔加入24孔培养板 中,每孔Iml,一孔加50uIConA液,另一孔作为对 照,置5%COz,37?培养箱中培养72h.培养结束前 4h,每孔轻轻吸去上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血 清的RPMI1640培养液,同时加入MTT,继续培养4h, 培养结束后每孔加入Iml酸性异丙醇,吹打混匀,使紫 色结晶完全溶解.然后分装到96孔培养板中,每个孔 分装3,6孔作为平行样,用酶联免疫检测仪,以570nm 波长测定光密度值.用加ConA孔的光密度值减去不加 ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力. 1.3.6数据统计分析 实验数据应用SPSS11.0统计软件分析,采用方差分 析法进行统计学处理. 2结果与分析 2.1牛初乳粉对小鼠NK细胞杀伤活性的影响 经灌胃给予小鼠不同剂量的牛初乳粉20d后,小鼠 NK细胞杀伤活性如下表1所示. 从表1中可见,各剂量组小鼠NK细胞杀伤活性与 ※营养卫生食品雨i学2005,VoL26,No.11229 表1牛初乳粉对小鼠NK细胞杀伤活性的影响(X?SD) Table1Theeffectofbovinecolostrumspowderoncytomxic activityofnaturalkillercells(X?SD) 注:与对照组相比,P<O.05,}p<O.01. 对照组相比明显增强,有显着性差异.其中78.13mg/kg?d 和156.25mg/kg?d两剂量组间对增强NK细胞杀伤活性 无显着性差异;36.46,625.00和1250.00mg/kg?d三剂量 组间对增强NK细胞杀伤活性无显着性差异.由此可进 一 步得知:高剂组625.00,1250.00mg/kg?d和低剂量 组36.46mg/kg?d对NK细胞杀伤活性增强效果一致; 剂量在78.13,156.25mg/kg?d之间对NK细胞杀伤活性 增强效果较其它组好. 2.2牛初乳粉对小鼠巨噬细胞的吞噬功能的影响 经灌胃给予小鼠不同剂量的牛初乳粉20d后,小鼠 巨噬细胞的吞噬功能如表2所示. 表2牛初粉对小鼠巨噬细胞的吞噬功能的影响(X?SD) Table2Theeffectofbovinecolostrumspowderonmacrophage function(X?SD) 注:与对照组相比,P<O.05,}p<O.01. 由表2可见,各剂量组小鼠巨噬细胞的吞噬功能与 对照组相比明显增强,有显着性差异.其中36.46,312.50, 625.00和1250.00mg/kg?d剂量组间对巨噬细胞的吞噬功 能增强效果无显着性差异.78.13,156.25mg/kg?d剂量 范围对巨噬细胞吞噬功能增强效果优于其它组. 2.3牛初乳粉对小鼠T淋巴细胞增殖活性的影响 经灌胃给予小鼠不同剂量的牛初乳粉20d后,小鼠 T淋巴细胞增殖活性如表3所示. 由表3可见,各剂量组小鼠T细胞增殖活性与 对照组相比明显增强,有显着性差异.其中剂量 78.13mg/kg?d对小鼠T淋巴细胞增殖活性效果优于其 它组.剂量再增加时其T淋巴细胞增殖活性效果不再 增强,剂量156.25,312.50,625.00和1250.00mg/kg?d 表3牛初乳粉对小鼠T淋巴细胞增殖活性的影响?SD) Table3Theeffectofbovinecolostrumspowderon-lymphocyte proliferation~?SD) 注:与对照组相比,P<O.05,P<O.01. 和剂量36.46mg/kg?d对T淋巴细胞增殖活性效果基本 一 样,无显着性差异. 从以上结果可知,给小鼠按36.46,1250mg/kg?d 牛初乳粉剂量连续灌胃20d后,均能显着增强小鼠的NK 细胞活性,巨噬细胞的吞噬功能和T淋巴细胞增殖活 性,具有调节小鼠细胞免疫和增强巨噬细胞吞噬功能的 作用.综合三项指标结果剂量在78.13,156.25mg/kg?d 之间对小鼠细胞免疫调节作用和巨噬细胞吞噬功能增强 作用效果优于其他剂量. 3讨论 牛初乳的免疫因子虽然来源于产犊后的母牛,但有 许多研究表明,动物包括人均能极大地受益于初乳的被 动免疫,治疗疾病和促进康复等生理活性.初乳中的 免疫因子除直接与肠道病原菌发生免疫反应外,作为异 种抗体被摄入后若未完全降解,可以成为抗原,被结 肠淋巴组织,孤伊尔结M细胞摄取,内部的巨噬细胞吞食 抗原并将之转移到淋巴细胞,引起免疫反应[1】. 近年来,对巨噬细胞活性及其调节的研究已进入分 子水平,成为免疫学研究中相当活跃的领域之--[4].自 然杀伤细胞(naturalkillercell,NK细胞)是固有免疫系统中 一 类十分重要的淋巴细胞,约占淋巴细胞总数的I5%. NK细胞通过发挥细胞毒作用和分泌细胞因子,在机体 抗感染,抗肿瘤,免疫调节和造血调控等方面发挥着 重要的免疫功能.T淋巴细胞是机体细胞免疫功能的 承担者,它分泌各种介质并作用于其他淋巴细胞或巨噬 细胞,行使信息传递,识别,效应等功能,是机体 免疫反应的重要调节细胞. 本研究以巨噬细胞的吞噬功能,NK细胞的杀伤活 性和T淋巴细胞的增殖活性作为反映牛初乳粉免疫调节 功能的重要指标,结果表明,剂量在36.46~1250mg/kg?d 之间的牛初乳粉与对照组相比都能极显着地增高小鼠腹 腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数,提高巨噬细胞的吞噬 功能,增强NK细胞的杀伤活性和T淋巴细胞的增殖活 性.但低剂量与高剂量作用效果无显着性差异.剂量 2302005,Vo1.26,No.11食品雨斗学※营养卫生 海藻糖提高动物热耐受性的研究 葛宇1,宫衡2,刘玲2,赖承兴2,袁勤生2 (1.上海市质量监督检验技术研究院,上海200233;2.华东理工大学生物工程学院,上海200237) 摘要:目的:探讨海藻糖提高热耐受能力的作用,为研制耐热型保健饮料提供依据.方法:以小鼠为模型, 考察不同成分饮用水(水,蔗糖和海藻糖)饲喂的小鼠热暴露的存活时间和衰竭游泳时间.并比较了高温适应前后以 及高温处理前后小鼠的一些生理生化指标如体重,血清中钾离了浓度,血糖含量和血红蛋白含量.结果:海藻糖 能显着延长小鼠的热暴露存活时间.生理生化指标表明海藻糖具有抗脱水,能够在高温环境中维持细胞中钾离子浓 度,有效维持血红蛋白含量.并且有一定储能作用.结论:海藻糖可以提高动物热耐受性,很有希望成为一种 耐热保健饮料的成分. 关键词:海藻糖;热耐受性;动物实验 StudyonHeatEnduranceEffectofTrehaloseDrinksonMice GEYu,GONGHeng,LIULing,LAICheng—xing,YUANQin—sheng (1.ShanghaiAcademeofTestingTechnologyonQualitySupervision,Shangh~200233,China; 2.InstituteofBioengineering,EastChinaUniversityofScienceandTechnology,Shanghai200237,China) Abstract:Objective:Tostudytheeffectoftrehalosedrinksonheatenduranceofmice.SOastoprovidebasisfordeveloping anewheatendurancefunctionalbeverage.Methods:Usingmousewhichwe1”efedbydifferentdrinks(wamr,sucrosewaterand trehalosewateOrespectivelyastestinganimalswhichwereexposedto30~Chabitat.Thesurvivingtimeuponheatexposureand theswimmingtimewereexaminedandthephysiologicandbiochemicalchangessuchasbodyweight,potassiumconcentration, bloodsugar,hemoglobinwerecomparedbeforeandafterheatexposure.Results:Trehalosecouldsignificantlyimprovethe survivingtimeuponheatexposure,effectivelysustainthehemoglobinlevel,andkeepthepotassiumconcentrationinbloodsenlm toprotectcellsfromdamage.Likewislyitcouldincreasethebloodsugarlevelandroserveenergy.Conclusion:Trehalosecould improvetheheatenduranceoftheanima1.Sotrehalosecouldbeagoodingredientinheatsndurancedrink. 收稿日期:2004.12.07 作者简介:葛宇(1971一),女,博士,研究方向为食品检测. 在78.13,156.25mg/kg?d时,对巨噬细胞的吞噬 功能和NK细胞杀伤活性的增强效果最强,剂量为 78.13mg/kg?d时,对T淋巴细胞增殖活性效果最强, 说明牛初乳粉发挥最佳免疫调节作用的最佳剂为量 78.13mg/kg?d,为牛初乳粉的应用开发提供了理论依 据. 参考文献: [1】曹劲松.初乳功能性食品[1】.北京:中国轻工业出版社, 20o0. [2】徐丽.牛初乳制品功能性成分的分析[J】.中国乳品工业, 2004.32(4):18-20. [3】黄雨三.保健食品的功能学评价程序和检验方法[1.北 京:清华电子同方出版社.2001. [4】王玉俊.口蘑多糖对小白鼠免疫功能的影响[J].张家口医 学院,1996,13(1):17.18. [5】庄然.人类NK细胞的亚群及其特征[J].细胞与分子免疫 学杂志,2002,18(3):645.648. [6】谢红.运动对T淋巴细胞的影响及其免疫调节机制[J].西 安体育学院,1999,16(4):81.85.