中山市健康成人外周血EB病毒抗体谱的调查研究

中山市健康成人外周血EB病毒抗体谱的调查研究 中山市健康成人外周血EB病毒抗体谱的调 查研究 热带医学杂志Z生墨箜Z鲞箜墨 【文章编号】1672-3619(2007)08-0729-03 - 729? . 基础研究论着? 中山市健康成人外周血EB病毒抗体谱的调查研究 易冰-,余元龙2,季明芳2,程伟民2,顾耀亮3罗秋育2詹希美4宗永生卜 (1.中山大学中山医学院病理教研室,广州510080; 2.中山大学附属中山市人民医院肿瘤研究所,中山528403; 3.中山生物医学工程公司,中山528000;4.中山大学中山医学院寄生虫学教研室,广州510080) 【摘要】目的探讨来自不同地域的人群感染EB病毒的血清学抗体谱是否存在差异.方法从鼻咽癌高 发区中山市的健康成人中收集348例中山籍贯原住居民的血清和8l例外省籍贯居民的血清,用ELISA法检测 血清中的EBNA1.IgA,EBNA1.IsG,VCA.p18.IgA,VCA.p18.IgG,zta.IgA和ZtaIgG等6种抗体水平,比较不同抗 体组合时两类人群样本的抗EB病毒抗体谱的差别.结果当三项IgA类抗体皆为阴性时,外省籍贯阴性率远 远大于中山籍贯样本(P=O);当EBNA1.IgA单阳时,外省籍贯样本阳性率远远高于中山籍贯样本(P=0,001);当 Zta.IsA单项阳性时(P=O,008).或者Zta.IgA和VCA.p18.IgA同时阳性时(P=O.001),中山籍贯样本阳性率明显 高于外省籍贯样本:而三项IgG类抗体的任意组合.中山籍贯和外省籍贯都无统计 学意义.结论中山籍贯原住 居民感染的EB病毒常常处于激活状态;相反,外省籍贯的中山居民感染的EB病毒 处于潜伏期时表达的 EBNA1水平更高.提示中山籍贯原住居民比外省籍贯居民具有更高的风险罹患鼻 咽癌. 【关键词】EB病毒感染;EB病毒抗体谱;鼻咽癌高发区;健康成人 中图分类号:R739.63文献标识码:A SerologicalAnalysisofAnti-Epstein-BarrVirusAntibodyintheHealthyAdults inZhongshanCity YIBing,YUYuan—long,jIMing—fang,CHENGWei—min,GUYao—liang,LUOQiu— yu, ZHANXi-mei,ZONGYong—sheng (DepartmentofPathology,ZhongshanMedicalCollegeofSunYat— senUniversity,Guangzhou 510080,China) 【Abstract】ObjectiveToanalyzeandcomparethelevelsofanti,Epstein— Barrvirus(EBV)antibodyinthe healthyadultresidentslivingintheZhongshancitywit}lthoseresidentscomingfromforeignprovinces.MethodThe 8eraof348healthyadultresidentsfromZhongshanand81healthadultresidentsfromforeignprovinceswerecollected andanalyzedinthisstudy.ThelevelsofEBNA1一IsA,EBNA1一IsG,VCA—p18一 IsA,VCA—p18一IgG,Zta—IgAandZta— IgGweremeasuredbyELISAmethod.ResultAllresidentsfromforeignprovinceshadahigherserupositiveratefor theEBNA1IsA,VCA— p18IgA,andZtaIgAthanthelocalresidents.Residentsfromforeignprovinceshadahigher rateofsingleserupositiveforEBNA1一 IsA.ResidentslivingatZhongshanhadahigherrateofsinglepositiveforZta. IgA(P=0.008)orbothZta—IgAandVCA—p18一 IsApositive(P=0.001)thantheresidentsfromforeignprovinces. ThelevelsofIgGforEBNA1,VCA— p18andZtaweresimilarbetweenthetwostudiedgroupsofresidents. ConclusionResidentslivinginZhongshanhadahigherlevelofantibodytothelyticphaseanti gens,suggestingthe re— activationof''latentphase"EBVharboringinrestmemoryBlymphocytes.Theseresultsalsos uggestthat ZhongshanresidentsmayhaveahigherrisktohaveNPCthantheresidentsfromtheforeignpro vinces. 【Keywords】Epstein—Barrvirusinfection;anti—Epstein— Barrvirusantibody;highriskyareaofnasopharyngeal carcinoma;healthyadults 作者简介:易冰(1974-),女,中山大学中山医学院博士后,现在中山大学附属中山医 院肿瘤研究所工作,主要研究方向为肿瘤学. +通讯作者:宗永生(1928一),教授,博士导师,主要研究方向为肿瘤病理. ? 730? EB病毒感染与鼻咽癌的发生密切相关【l'.流行病学调 查表明.EB病毒感染具有普遍性,其中只有少数感染者会 发生鼻咽癌,而且鼻咽癌具有很强的地域倾向性;鉴于此, EB病毒感染和鼻咽癌发病的地域性倾向之间是否有关联, 是值得探讨的问题.广东珠江三角洲和西江流域是世界上 鼻咽癌发病率最高的地区,中山市是其中的高发区之一.本 文通过检测血清中的EBNA1.IgA,EBNA1-IgG,Vc-pl8- IgA,VCA.pl8-IgG,Zta.IgA和Zta—IgG等6种抗体,分析比 较两组人群感染EB病毒的血清学抗体谱是否存在差异,以 探讨EB病毒感染和鼻咽癌发病的地域性倾向之间的关系. 1材料与方法 1.1标本 随机收集在中山市人民医院康体保健中心2005年 6,l1月通过健康体检的年龄在2O一7O岁之间的健康成 人,共447例的未抗凝外周血(2ml/例),其中包括祖籍中 山的原住居民348例.外省籍贯的中山市居民81例;另外 收集160例祖籍广东珠江三角洲的经病理确诊但尚未治 疗的鼻咽癌患者的未抗凝外周血(2ml/例);分离上述标 本的血清于一2O?冻存备用. 1.2酶联免疫吸附检测IELISA) 检测EBNA1一lgA,EBNA1一IgG,VCA—p18一IgA,VCA-p18- IgG,Zta—IgA和Zta.IgG的ELISA试剂盒均由香港神农有 限公司(SinocloneHongkongLtd.)提供.参照试剂盒说明, 血清标本用含有2%/b牛血清的PBS缓冲液稀释.每个孔 100稀释血清,经孵育,缓冲液冲洗后加入辣根过氧化 物酶标记的抗血清,再孵育,再冲洗后,加100l的TMB (3,3',5,5'一四甲基联苯胺),加入100l的0.3mol/L H:S04终止显色反应.在450nm对620nm的条件下检测 吸光度.为保证结果的稳定和统一性,所有样本各项目所 用试剂均为同一批次. 1.3相对密度与临界值 血清抗体水平用相对光密度值(rOD或rA)表示,即 样本光密度值(OD或A)除以两份阳性对照血清的平均 光密度值.将鼻咽癌患者和健康成人的相对光密度值的 范围均分为2O个区间.将相对光密度值超过每一个区间 JournalofTropicalMedicine—— V.. o1.. . ..— 7—— No—— . — 8— Aug.2007 的相对光密度值的鼻咽癌患者数的百分率连接起来的曲 线称为灵敏度曲线.将等于或低于每个区间相对光密度值 的健康成人的百分率连接起来的曲线称为特异度曲线.两 条曲线的交接点即临界值.当检测样本的rOD等于或大 于临界值时定为阳性反应,低于临界值时则为阴性反应. 1.4统计学分析 采用SPSS(Statisticalpackageforthesocialscience) 13.0统计学软件进行统计分析,文中率的比较采用四格表 法,P值由程序自动生成. 2结果 2.1IgA类抗体组合 统计分析来自两个籍贯的样本的三种IgA类抗体即 EBNA1.IgA,ZtaIgA和VCA—pl8-IgA检测结果分别为三项 全阴性,单项阳性,两项阳性和三项都阳性时是否存在差 异,结果显示(表1),当三项皆为阴性时,外省籍贯阴性率 远远大于中山籍贯样本(P=0);当EBNA1一IgA单阳时,外 省籍贯样本阳性率远远高于中山籍贯样本(P=0.001);当 Zta—IgA单项阳性时(P=0.008),或者Zta.IgA和VCA—pl8. IgA同时阳性时(P=0.001),中山籍贯样本阳性率明显高于 外省籍贯样本 2.2IgG类抗体组合 统计分析来自两个籍贯的样本的三种IgG类抗体即 EBNA1一IgG,Zta.IgG和VCA—pl8-IgG检测结果分别为三项 全阴性,单项阳性,两项阳性和三项皆阳性时是否存在差 异,结果显示(表2),IgG类抗体任意组合,中山籍贯和外 省籍贯都无显着性差异. 2.3IgA类和IgG类抗体检测阳性率的比较和相关性分析 将上述两组人群共429例样本的检测结果.按照抗原 性质和抗体类别分组进行分析比较,结果表明,EBNA1一 IgG抗体的阳性率(20.27%)显着高于EBNA1一IgA(15.38%), 二者之间成正相关(相关系数0.241,P=0);而Zta—IgA抗 体的阳性率(28.90%)显着高于Zta.IgG(19_81%),二者之 间成正相关(相关系数0.311,P=0);VCA.pl8-IgA抗体的 阳性率(30.76%)显着高于VCA.pl8-IgG(25.41%),二者之 间成正相关(相关系数0.386,P=0). 表1中山籍贯和外省籍贯健康成人I吕A类抗体组合的比较 Tab?1ComparisonofI吕 AantibodiesreactionlmtternsbetweenZhongshanandforeignadults 热带医学杂圭生墨箜鲞箜墨 表2中山籍贯和外省籍贯健康成人IgG类抗体组合的比较 Tab.2ComparisonofIgGantibodiesreactionpatternsbetweenZhongshanandforeignadults ? 731? 3讨论 众所周知,人体感染EB病毒并成为携带者之后,一 般会引起免疫反应,产生抗体.血液中抗体水平如果持续 存在,则反映潜伏的EB病毒经常被再激活.EB病毒在反 复再激活的过程中可能容易发生基因变异,从而在鼻咽癌 变中起作用.被激活的EB病毒可以导致许多种抗体的产 生,各种抗体水平间互相平衡,且此种平衡因人而异,就会 形成不同的血清抗体谱,因此检测血液中的多种抗体能更 好地反应EB病毒被激活的状态[3].由此,可根据检测不同 的EB病毒抗体水平来预测携带者罹患鼻咽癌的风险. Chan等[]和Dardari等[]的报道以及ChanJKC等[在世 界卫生组织肿瘤组织学分类一书中的观点,均认为在血清 学诊断鼻咽癌时.最好合并采用几种ELISA.较早常用的 抗体指标有VCA—IgA/IgG和EA—IgA/IgG,后来EBNA1一 IgA/IgG和zla—IgA/IgG等抗体检测的应用进一步提高了 灵敏度和特异度. 本文根据以往的研究报道.采用ELISA法检测了 EBNA1一IgA/IgG,Zta—IgA/IgG和VCA?p18?IgA/IgG六项指 标.比较了不同抗体组合时,来自中山市籍贯原住居民和 外省籍贯中山居民两类群体的样本的抗体谱.结果发现 IrA类的三项抗体组合比IgG类抗体组合更具有意义,当 EBNA1.IrA,Zta.IgA和VCA—p18IgA三项皆为阴性时, EBNA1.IrA或Zta.IgA单项阳性时,以及Zta.IgA和VCA— p18.IgA同时阳性时,两籍贯样本存在显着性差异.此外, 比较了所有样本针对同种抗原的IgA抗体和IgG抗体检 测的阳性率.发现针对每种抗原的IrA类抗体和IgG类抗 体的阳性率都有显着的差异,EBNA1.IgG相对EBNA1一IgA 更为敏感些,而Zta和VCA.p18的IrA抗体较其IgG抗体 更敏感.不过,针对上述三种抗原的IgA抗体和IgG抗体 的检测阳性率都成正相关的,说明两组人群IgA和IgG抗 体水平基本上是平行的.由于两种类型抗体的半衰期有所 不同,因此.所反映的现象不同. 过往的研究表明,IrA类抗体比IgG类抗体更能提 示鼻咽癌的风险性[];而EBNA1.IgA是潜伏性感染的 EB病毒持续表达的产物Is].Zta是少数鼻咽癌细胞中的 EB病毒由潜伏性感染转化为溶解性感染立即早期时相 的产物,VCA与EB病毒的形成是一致的,是出现较晚 的抗原,因此本文结果提示.相比较而言,中山原住居 民感染的EB病毒常常处于激活状态,而外省籍贯的中 山临时市民感染的EB病毒处于潜伏期时表达的EBNA1 水平更高.关于哪种抗体组合能够更好的运用于临床筛 查鼻咽癌.已经有很多的研究报道.胡维维等]采用6 种抗EB病毒抗体对85例鼻咽癌和132例健康人血清 的检测结果提示,临床血清学诊断鼻咽癌,首选Zta—IgG 或EBNA1一IgA.同时检测两种ELISA,宜采用Zta—IgG/ EBNA1一IgA或Zta—IgG/EBNA1一IgG.3种ELISA同时检 测,可以提高特异度.推荐Zta—IgG/EBNA1一IgA/EBNA1一 IgG或Zta—IgG/EBNA1一I/Zta—IgA三项.而顾耀亮等…] 的研究表明,单项以EBNA1一IgA为好,在双重抗体联用 时,以EBNA1一IgA与Zta—IgA联合应用效果最好.如果 参照顾耀亮等推荐的组合,则从本文结果可以进一步推 论.中山原住居民比外省籍贯的居民具有更高的风险罹 患鼻咽癌. [参考文献] [1]马桂璋,莫薇,李剑,等.EBV反义LMP1转染CNE2细 胞对裸鼠致瘤的作用[J].热带医学杂志,2003,3(3): 264-266. [2]江培洲,甘明,黄华,等.运用蛋白质组学技术研究EB 病毒诱导鼻咽癌细胞CNE2表达变化的蛋白质[J].中山大 学(医学科学版),2005,26(1):29—33. [3]宗永生,吴秋良,林素暇,等.EB病毒相关性疾病病理学 研究的进展[J].中山大学(医学科学版),2005,26 (5):481-487,492. [4]CHANKH,GUYL,NGF,eta1.EBVspecificantibody— basedandDNA—basedt~saysinserologicdiagnosisof nasopharyngealcarcinoma[J]IntJCancer,2003,105(4): 706-770. [5]DARDARIR,HINDERERW,LANGD,eta1.Antibody responsesrecombinantEpstein—Barrvirusantigensin nasopharyngealcarcinomapatients:Complementarytestof ZEBRAproteinandearlyantigensp54(下转第721页) 热带医学杂志2生墨箜2鲞箜墨 理过程的的重要作用,FARs能结合视黄醇的特性使FARs 还可能在线虫致病,干扰宿主的防御反应中扮演一定的角 色.如盘尾丝虫(Onchocercavolvulus)分泌的Ov—FAR一1能 耗竭寄生部位的视黄醇,从而影响组织分化与修复及胶原 的合成.是导致患者出现严重眼部及皮肤损害的重要原 因之一[5].犬钩虫寄生咬附于肠壁过程中,分泌的Ac. FAR.1与视黄醇结合而可能使宿主减少可利用于修复组 织损伤的视黄醇而增强犬钩虫的感染能力[2].视黄醇能阻 止鼠肠黏膜IgA及Th2细胞因子水平下降.犬钩虫分泌的 Ac.FARs可能能通过限制可利用于上调Th2细胞因子的 视黄醇的量来降低肠道保护性IgA的水平,利于钩虫的生 存[.此外,FARs是线虫主要抗原之一,可能发展成为 抗感染疫苗或诊断抗原;FARs作为寄生线虫与寄生生活 有关的关键分子,还可能作为发展抗线虫感染药物的靶 标. 钩虫引起的贫血严重影响人们的身体健康.FARs在 十二指肠钩虫寄生于宿主及致病过程有何作用.值得进一 步探讨.本文克隆并表达了Ad.FAR.1基因.为进一步研 究Ad.FAR一1的特性与功能,阐明其在十二指肠钩虫寄生 于人体及其致病中的作用奠定了基础. [2] [参考文献】 GAROFALOA,ROWLINSONMC,AMAMBUANA,eta1. TheFARproteinfamilyofthenematodeCaenorhabditiselegans. Differentiallipidbindingproperties,structuralcharacteristics, anddevelopmentalregulation[J].JBiolChem,2003,278 (1O):8065—8074. BASAVARAJUS,ZHANB,KENNEDYMW.eta1.Ac— FAR一1.a2OkDafattyacid-andretinol—bindingproteinsecreted byadultA,lcs幻,ndcaninumhookworms:genetranscription pattem,ligandbindingpropertiesandstructuralcharacterisation [J].MolBiochemParasitol,2003,126(1):63—71. ? 721? [3]KENNEDYMW,GARSIDELH,GOODRICKLE,eta1.The Ov20DroteinoftheparasiticnematodeOnchocercavolvul. Astructurallynovelclassofsmallhelix?-richretinol?-binding proteins[J].JBiolChem,1997,272(47):29442—29448. [4]GAROFALOA,KLaGERSL,ROWLINSONMC,eta1.The FARproteinsoffilarialnematodes:secretion,glycosylation andlipidbindingcharacteristics[J].MolBiochemParasitol, 2002,122(2):161—170. [5]BRADLEYJE,NIRMALANN,KLAGERSL,eta1. Riverblindness:aroleforparasiteretinoid—bindingproteinsin thegenerationofpathology[J].TmndsParasitol,2001,17: 471-474. [6]P砌ORA,JONESJT,BLOKVC,eta1.Asurface— associatedretinolandfattyacidbindingprotein(Gp—FAR一1) fromthepotatocystnematodeG如60dempallida:lipid bindingactivitiesstructuralanalysisandexpressionpattern [J].BiochemJ,2001,356:387—394. [7]BETHONYJ,BROOKERS,ALBONICOM,eta1.Soil— transmittedhelminthinfections:ascariasis,trichuriasis.and hookworm[J].Lancet,2006,367:1521—1532. [8]全国人体重要寄生虫病现状调查办公室.全国人体重要寄 生虫病现状#调查#[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2005,23(5)suppl:332-339. [9]彭礼飞,杨陈,王会兰,等.线虫抗凝血蛋白AcaNAP7基 因克隆,表达及抗凝活性鉴定[J].中国药理学通报, 2007.23(3):630—634. [10]KENNEDYMW.Thepolypmteinlipidbindingproteinsof nematodes[J].BiochimBiophysActa,2000,1476(2): 149—164. 【l1]MCDERMOTYL,COOPERA.KENNEDYMW.Novel classesoffattyacidandretinolbindingproteinfrom nematodes[J].MolCellularBiochem,1999,192:69—75. (收稿日期:2007—03—26;修回日期:2007—05—12) (上接第731页) andp138[J].JClinMicro,2001.39(9):3164—3169. 【6jBARNESL,EVESONJW,REICHARTP.eta1.W0rld HealthOrganizationClassificationofTumou~.Pathology& Genetics.Headandnecktumou~[M].LyonFrance:IARC Press.2oo5:85-97. [7]李振权,潘启超,陈剑经.鼻咽癌临床与实验研究[M]. 第一版.广州:广东科技出版社,1983:l1O. 【8]MTYI-IEWP.THOMPSON.RAZELLEKURZROCK.Epstein— BarrrimsandcancerCJ].ClinCancerRes,2004.10:803—821. 【9jCAYROLC,FLEMINGTONEK.Identificationofce11ular targetgenesoftheEpstein—BarrvirustransactivatorZta: Activationoftransforminggrowthfactorish3(TGF—ig}l3)and TGF一1[J].JViml,1995,69:4206—4212. [1O]胡维维,宗永生,李风萍,等.六种抗EB病毒抗体检测 在鼻咽癌血清学诊断中的比较[J].中国肿瘤临床.2006. 33(14):795-798. [11]顾耀亮,张昌卿,吴子柏,等.抗重组EB病毒抗原双重 抗体检测血清学诊断鼻咽癌的研究[J].癌症.2003.22 (9):903—9O6. (收稿日期:2007—03—02;修回日期:2007—04—18