小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验

小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验 一 实验目的 1(掌握小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2(熟悉细胞吞噬作用的基本过程 二 基本原理 在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。巨噬细胞在机体的非特异性免疫中具有重要作用，其吞噬异物的能力在一定程度上反映了机体免疫水平的高低。本实验采用测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率，来免疫促进剂转移因子对机体免疫状态的促进作用。 三 实验用品 1(器材:显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、1ml注射器、载玻片、盖玻片、吸管等; 2(试剂:0.9%生理盐水;可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。(6%淀粉中含0.3%台盼蓝); 3(材料:小白鼠;1%鸡红细胞悬液 四 实验步骤 1. 实验前三天，每天向小鼠腹腔注射台盼蓝染液。 2. 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。 3. 周五上午注射提取的转移因子，每只小鼠注射1ml。 4. 周五下午向腹腔内注射1ml 1%的鸡红细胞，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散。 5. 30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠(右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断并致死)，并腹腔注射生理盐水1毫升。 6. 轻揉小鼠腹部约lmin，剪开腹部皮肤,肌肉层上开口，将滴管伸入腹腔吸出腹腔液。 7. 把腹腔液滴加在洁净的载玻片上，每片0.1,0.2ml，每组重复作片3 ,5片; 37?培养箱孵育10min，注意保湿～ 8. 待其标本稍干后，滴加3~4滴瑞氏染液于标本上，以完全盖住标本为宜;5分钟后吸水纸吸干甩去玻片上的染液，显微镜下检查。 9. 观察时，将视野调暗。在高倍镜下，先分辨清楚鸡红细胞和巨噬细胞。鸡红细胞为淡红色、椭圆形、有核的细胞。而体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突起(伪足)，细胞质中有数量不等的蓝色颗粒(为吞入的含台盼蓝淀粉形成的吞噬泡)即为巨噬细胞。变换视野，仔细观察巨噬细胞吞噬吞噬鸡红细胞的过程。可见有 的鸡红细胞(一至多个)紧贴附于巨噬细胞的表面;有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入;有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的吞噬泡;有的局势细胞内的吞噬体积缩小，并呈现圆形，这是与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。 五 注意事项 腹腔注射时不要刺伤内脏。 六 实验报告 1. 绘图:小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的各种形态。2. 计算吞噬细胞吞噬百分数。