肿瘤坏死因子

肿瘤坏死因子 --------------------------------------第X页 共X页------------------------------------------- 肿瘤坏死因子 肿瘤坏死因子 Osteoclast formation and bone resorption induced by tumor necrosis factorα 【Abstract】 AIM: To investigate hether tumor necrosis factorα can induce osteoclast formation from peripheral blood mononuclear cells independent of receptor activator of nuclear factor kappa B ligand hich ere TRAP positive and shoed evidence of lacuna resorption pit formation on dentine slices. RANK:Fc did not inhibit this process hile neutralizing antiTNFα antibody pletely blocked both the formation of MNCs and lacuna resorption. CONCLUSION: In the presence of MCSF, TNFα can directly induce mononuclear phagocyte osteoclast precursors to differentiate into osteoclastic cells capable of lacuna resorption. 【Keyords】 TNFα; osteoclast; bone resorption 【摘要】 目的: 验证肿瘤坏死因子α(TNFα)是否可以直接诱 外周血单核细胞(PBMCs)分化为具有骨吸收作用的破骨细胞. : 小白鼠PBMCs体外培养中加入TNFα和白细胞介素1α(IL1α)及巨 噬细胞克隆集落刺激因子(MCSF);同时，分别加入细胞核因子κB 受体活化因子配体配制成完全培养基30 min. 吸取处于界面层的细 胞，重悬于MEM并离心(600 g)10 min，重复两次，然后重悬于MEM/FCS. 50 mL/L醋酸溶解红细胞后，细胞记数板记数PBMCs. 事先将灭菌的 4 mm直径的象牙磨片和直径6 mm的玻璃盖玻片分别放入96孔细胞 培养板. 将2×105 PBMCs加入放有象牙磨片或盖玻片的96孔细胞培 养板，调整培养液30 min、超声波处理去除黏附的细胞及碎片后， 蒸馏水润洗并于空气中晾干. 甲苯胺蓝染色后，光学显微镜下检测虫 蚀样骨吸收陷窝的形成，并计算虫蚀样骨吸收陷窝面积占象牙磨片总 体面积的百分比. 另外有一部分象牙磨片用梯度乙醇脱水、空气晾干 并覆以金粉涂层后做电镜(Philips SEM 505)扫描. --------------------------------------第X页 共X页------------------------------------------- 统计学处理: 每次实验中各组分别设3个象牙磨片，实验一共重复3次. 应用SPSS 10.0软件包处理数据. 计量资料以x?s表示. 在比较C组与E组的骨吸收陷窝面积差异时采用Students t检验，P 0.05时认为差异具有显著性. 2结果 2.1TNFα诱导PBMCs形成具有骨吸收活性的MNCs24 h后终止细胞培养未见TRAP阳性MNCs或虫蚀样骨吸收陷窝形成. 培养终止后，仅有MCSF和IL1α存在的条件下(A组)，未见TRAP阳性细胞或虫蚀样骨吸收陷窝形成. 而加入sRANKL后(B组)有大量TRAP阳性MNCsvs ，n=9,P 0.05,.2.2TNFα诱导RAW246.7细胞的影响为了进一步验证上述结果，我们将25 μg/L TNFα和10 μg/L IL1α加入RAW264.7细胞培养中. 于培养结束时见小的TRAP阳性MNCs和小而浅的骨吸收陷窝