植物花青苷（anthocyanin）酶联免疫分析

植物花青苷（anthocyanin）酶联免疫分析 植物花青苷(Anthocyanin)酶联免疫分析 试剂盒使用 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围: 96T 1µg/L -24µg/L 使用目的: 本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中花青苷(Anthocyanin)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物花青苷( Anthocyanin) 。用纯化的植 物花青苷(Anthocyanin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 花青苷(Anthocyanin)，再与 HRP标记的花青苷(Anthocyanin)抗体 合，形成抗体-抗原 -酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的花青苷( Anthocyanin)呈正相 关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中植物花青苷 (Anthocyanin)浓度。 试剂盒组成 1 7 30倍浓 20ml×1瓶 终止液 6ml×1瓶 6ml×1瓶 8 0.5ml×1瓶 2 酶标试剂 标准品(48µg/L) 9 3 酶标包被板 12孔×8条 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1份 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 5 显色剂 A液 11 封板膜 6ml×1瓶 2张 6ml×1/瓶 6 显色剂 B液 12 密封袋 1个 标本要 1(标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融 2(不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过 (HRP)活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 24µg/L 5号标准品 150µl的原倍标准品加入 150µl标准品稀释液 12µg/L 4号标准品 150µl的 5号标准品加入 150µl标准品稀释液 6µg/L 3号标准品 150µl的 4号标准品加入 150µl标准品稀释液 2号标准品 150µl的 3号标准品加入 150µl标准品稀释液 3µg/L 1号标准品 150µl的 2号标准品加入 150µl标准品稀释液 1.5µg/L 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl， 然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 37?温育30分钟。 温育:用封板膜封板后 4. 30倍稀释后备用 配液:将 30倍 浓 5. 洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静 30秒后弃去，如此 重复 5次，拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。 7. 温育:操作同 3。 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37?避光显色 15分钟. 10.终止:每孔加终止液 50µl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止 液后 15分钟以内进行。 操作程序总: 计算 以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上 ，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1(试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2(浓洗涤液可能会有 析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响 。 3(各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4(请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值 大于标准品孔第一孔的 OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5(封板膜只限一次性使用，以避免交叉 。 6(底物请避光保存。 7(严格按照说明书的操作进行，试验 . 8(所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9(本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期 1(试剂盒保存:;2-8?。 2(有效期:6个月