马拉色菌菌丝相培养研究
马拉色菌菌丝相培养研究 36WE,CttlNAMEDICALjouRNAL2005,VoI.20,No.1CN51—1356/fl [文章编号]1002—0179(2005)01—0036—02
马拉色菌菌丝相培养研究
AStudyfromCultureofMycelialPhaseofMalassezia
梁作辉,冉玉平,代亚玲,熊琳,周光平
LIANGZuo—hui,RANYu—ping,DAIYa—ling,etal
(Pq川大学华西医院皮肤性病科,四川成部6I(~-1)
(Detuwtmenlo厂1)ermatotenereolog),ltbstChimzHospital,Sichtum(%itersit),Chengdt』610041C/lina)
摘要:目的:探讨马拉色菌菌丝相形成的条件.
:用由酵母浸膏,牛磺胆酸钠,角鲨
吐温 烯,『于氮酸,
一
8O等多种成份组成菌丝培养基(pH5.6),接种花斑癣患者鳞屑后置30%孵箱内培养肉眼和镜下观察菌落和
菌丝生长情况,并用形态学和生理生化学方法鉴定菌种.结果30例患者中有8例的标本(26.7%)初代培养长
出菌丝,其中2株初代培养菌丝生成率为10~A,2()%,次代培养可提高到25%,经菌种鉴定发观产牛蔺丝的均为
糠秕马拉色菌[占糠秕马拉色菌66.6%(8/12)],而未产生菌丝的菌种包括全部合轴马拉色菌(8/8),球肜马拉
色菌(4/4),限制性马拉色菌(2/2),钝形马拉色菌(2/2)和部分糠秕马拉色菌(4/12):结论:使马拉色茼体
外产生菌丝的条件除与培养基成分有关外,还与菌种有关:
关键词:花斑癣;马拉色菌;菌丝相
[中图分类号]11756.9[文献标识码]A
Abstract:Objective:ToinvestigatetheconditionofnncellalphasefommtionofMalassezia.
Methods:Thes(-alesfromthe
lesionsofthepatientwithpitasisversicolorwereirKulate'1toaMvcelialCultureMediumthatconsiste~1ofyeastextract.sodiunl
tauroeholate,squalene,glycine,Tween一
80an(1othercomponentsvdthpH5.6,thenincubatedat30cc.Hiecolonyall(1 mycelialphasedevelopmentwereobservedtlm)ughmacro—
altdmieroscop3r..rI1eisolatesWereidentifiedtospe('ieshadOilthe morphologyandthephysicalandchemicalchm'aeteristies.Results:Mycelia]phasewasnotedfrom8of30(26.7cA)smnplesof
theprimaryeulture.Amongthe8samples,2strainshad10%,
20%ofmycelialphasefonnationbypfimax?culture,and
reachedto25%bysecondaryculture.A1lofthesn"ainsthatCOulddmelophyphaewereidentifie(1asM.furfilr(8/I2),?rhere.
as,thestrainsthatcouldriot,,eloph}1)haewereidentifiedasM.s3mpodialis(8/8),M.globo~a(4/4),M.restrieta(2/
2),M.obtase(2/2)andM.furfur(4/I2).Conclusion:TheC1)ll(1itionsthatcouldin/lucehyphaedneloputentiuvitronot011.
1yrelatedtothecompositionofthemedium,butalsorelate(1totilespeciesofMalassezia. Keywords:Pityriasisvelsi(olor;Malassezia:lnvcelimn
(Re(eived(1ate:2004—09—15)
花斑癣是常见的皮肤真菌病,在皮
损中的马拉色菌表现为菌丝相:但在含
菜子油培养基中很难见到菌丝,而是以
酵母相存在_l_.我们用自制菌丝培养基
初步培养出该菌的菌丝相并进而探讨了
菌丝相形成与培养条件及菌种的关系.
现报道如下:
l材料与方法
1.1材料
1.1.1患者:到四JII大学华西医院皮 肤科就诊的花斑癣患者,有典型临床表 现,刮取鳞屑加50%派克墨水染色后 直接镜检查见孢子和菌丝.
1.1.2菌丝培养基和含菜子油培养 基_I主要成份来源:琼脂(上海西宝生 物公司),蛋白胨(OxoidLTD),牛磺胆 酸钠,酵母浸膏(北京奥博星生物技术 责任有限公司),油酸(天津市试剂 厂),角鲨烯(Sigma),单硬脂酸甘油 酯,甘氨酸,硝酸钾,氯化钠,硫酸 镁,硫酸亚铁,吐温一20,吐温一40, 吐温一6o,吐温一80等(成都科龙化工 试剂厂),市售超高热灭菌纯牛奶(内 蒙古伊利实业集团股份公司).两种培 养及配方见表1.
作者简介:梁作辉
东菏泽人,住院医师
*通信作者,E
hotmail.eom
(1978一).男.山
医学硕士研究生.
mail:ranyuping@ 表1菌丝培养基和菜子油培养 基的组成及培养条件
菌丝培养基菜子油培养基
2方法
2.1菌丝培养基:添加各试剂后加热 使其充分溶解,在121?15磅灭菌10
分钟,待温度降到6o?时添加已过滤 除菌的酵母浸膏,甘氯酸和纯牛奶,分 装试管制成斜面备用一
2.2培养及观察:将患者鳞屑接种在 菌丝培养基斜面上,每份标本接种3 管,分别置27cc,30,37cc孵箱内培 养:每2天观察.共持续3周:挑取单 菌落涂片,用50%派克墨水染色后镜 下观察菌丝的生成情况同一试管标本 涂3张片,每张涂片在镜下随机观察 100个孢子.计数这100个孢子中有菌 丝生长的孢子数得到菌丝生长百分率= 同时挑取菌落转种于含菜子油培养基上 保种.随后经形态学和生理生化学鉴定 到种.
3结果
3.1形态学观察:
3.1.1肉眼观察鳞屑在菌丝培养基 上孵育3—5天后仅有一些点状菌落生 长,以后渐多渐大,其菌落单个或多 数,直径0.2,0.6em,部分融合成片: 菌落初为乳白或淡黄色,扁平,乳酪 状,表面光滑湿润,不向培养基内生 长.7,14天内生长较快,以后培养基 变干,菌落颜色变为褐黄色,生长速度 减慢.
3.1.2镜下观察:在菌丝培养基上生 长3,5天后挑取菌落涂片,镜下可见 孢子直径2,6tan,易于聚集成簇,偶
尔可见极细小延长的芽体.5,9天时
华西医学2005;20(1)CN51—1356/R37
[文章编号]1002—0179(2005)01—0037—03
压疮易患病人易患因素的评估研究
AnEvaluationandStudyofPrecipitatingFactorsofPressureSoresinHighRiskPatients
成翼娟,朱明霞,谷波
CHENGYi—jUSFI,ZHUMing—xia,GUBo
(四川大学华西医院护理部,151)Jl成都610041)
(WfChinaHospital,SichuanL'Sffversit),Chengdu610041,China)
摘要:目的:为压疮易患病人发生压疮可能性的评估探讨一种准确可靠的工具.方法:本研究在Norton评估
表基础上结合营养因素进行修改设计了压疮易患因素评估表.包括年龄,活动等易患因素和营养状况两方面,共
14项,对100例压疮易患病人和79例压疮病人作易患因素的评估比较.对易患因素的相对危险度(Exp(B))和
可能发生压疮的界值进行了
?结果:可能发生压疮的界值为35分(P<0.O1).
多元逐步回归(前进法)得
作者简介:成翼娟(1949年一),女,
主任护师
可见一些被染成深蓝色的肥大厚壁孢
子,直径5,8lma,有些可见出芽9,
l4天时可见菌丝,l4,2l天时菌丝最
多,长约5,1gem,直径1.5,2.57m,
菌丝和孢子接合部明狭窄,折光性
好亦可见一些不带孢子的弯曲短棒
状,香蕉状菌丝.
3.2马拉色菌形成菌丝相的能力
2004年5,8月用菌丝培养基共分
离30株马拉色菌,有8株产生菌丝 (经鉴定均为糠秕马拉色菌),其中2株 初代培养菌丝生成率为10%,2()%,在 次代培养菌丝生成率提高列25%左右 (图1),第3,4代培养未见菌丝继续增 多;有22株在初代和次代培养均无菌 丝产生,经鉴定为糠秕马拉色菌4株, 合轴马拉色菌8株,球形马拉色菌6 株,限制性马拉色菌和钝形马拉色菌各 2株.
图1.花斑癣鳞屑接种到菌丝培养基(pH 值5.6)置3o?孵育后转种次代培 养,可见有25%的孢子一端长出菌 丝(5o%派克墨水染色×1000).经 鉴定为糠秕马拉色菌.
3.3菌丝相形成与培养条件之间的关 系
3.3.1培养基成份:通过向改良的含 油培养基中分别或同时添加不同的成份 来观察其对马拉色菌菌丝相形成的影 响.单独某成份对马拉色菌菌丝产生的 影响并不明显,但同时添加多种成份发 现菌丝的生成率明显提高.添加不同浓 度的油酸,对马拉色菌产生延长的芽体 影响很小.仅0.1%角鲨烯(v/v)的培 养基可诱导马拉色菌产生一些延长的芽 体.添加不同浓度的牛磺胆酸钠, 0.4%(v)牛磺胆酸钠能诱导马拉色 菌短菌丝产生.与其他吐温相比,添加
吐温一80的培养基中马拉色菌菌落生 长较好,有助于诱导拉色菌菌丝相的 形成.甘氦酸对菌丝的生长作用不明 显,可观察到酵母浸膏刺激马拉色菌产 生肥大厚壁孢子:
3.3.2pI{值:将培养基的【)H值分别 调节为4.5,5.6,6.2,对菌丝的产生 无明显差异.
3.3.3培养温度:接种后的培养基分 别置于27?,30?,37?孵箱内孵育, 30T1较适合马拉色菌菌丝生长,亦可见 较多的肥大厚壁孢子.
4讨论
马拉色菌菌丝相培养困难,国外曾 陆续有培养成功的报道,国内少有报 告一3.我们参考了Saadatzadeh_4培养方 法,利用自制菌丝培养基初步培养出马 拉色菌菌丝相
实验结果提示,培养基成份,孵育 温度等在马拉色菌菌相转化过程中均起 重要作用.本实验中,角鲨烯被马拉色 菌用以能量的来源,有诱导短菌丝生长 的潜能i5.0.4%牛磺胆酸钠能诱导出 短菌丝,脂酶激活剂牛磺胆酸钠与激活 位于细胞壁/膜系统的脂酶活性有关6. 吐温作为碳和脂的来源,本实验中2ml L吐温一80对诱导菌丝生长是必要 的.有学者报道增加吐温一80的浓度, 脂酶活性首先被激活,随后将会被抑
制L7,因此,吐温一80的浓度非常重 要.甘氦酸对菌丝产生的影响并不明 显,甘氨酸通过"活性转导系统"被组 织吸收.酵母浸膏提供氮源,刺激产生 肥大厚壁孢子,进而有利于菌丝的产 生.M通过对酶活性和细胞支架组 织的双重作用,在白念珠菌菌相转化过 程中起了核心作用.也有学者描述了 马拉色菌酶活性的诱导效应.可以推 断,本实验中ng,等盐离子至
少一种在马拉色菌菌丝相形成的过程中 是必不可少的.多数双相型真菌在 25?环境中培养表现为菌丝相,在37? 则为酵母相,但对马拉色菌菌丝相的培 养各家报道不一.我们观察30?较适 合于菌丝相形成不同的pH值对菌丝 相形成的影响并不明显,最终选择pH 5.6是因其接近人体皮肤的生理值: 菌丝培养基能使来自花斑癣皮损鳞 屑的部分马拉色菌(8/30)产生菌丝. 进一步鉴定发现能产生菌丝8株菌全为 糠秕马拉色菌(占糠秕马拉色菌8/ 12),而不能产生菌丝的菌株经鉴定为 合轴马拉色菌(8/8),球形马拉色菌 (6/6),限制性马拉色菌(2/2),钝形 马拉色菌(2/2)及部分糠秕马拉色菌 (4/12).提示菌丝相的形成与菌种有 关.Saadatzade|r3曾报道产生菌丝的糠 秕马拉色菌均有血清型A抗原,有待
进一步证实.
5参考文献:
[1]冉玉平,罗汉超,李志玉.含菜子油培
养基对花斑癣致病真菌的培养研究:J:.
中华皮肤科杂志,1987,20(1):4—7.
[2]GuillotJ,Gu6hoE.Thedi,,ersit',of Malasseziayeastscmffirmotby.
rDNA-
quenceandnuclearDNAcomparisons:J. AntOilievanLeeuWe~dwek.1995,67:297 —
3l4.
[3]王文岭,朱一元.圆形糠秕孢子菌菌丝
相培养观察[J].中华皮肤科杂志,
1995.28(6):381—383.
14JSaadatzadehMR,Ashtx~HR,HollandKT. ProductionofthemvcelialphaseofMala.~sezia invitmIJJ.MedicalMycology,2001,39: 487—493.
15JCLl|1di舱WJ.Biochemistryofthepiloseba- CPOHSunitlAj.1n:MarksR,ed.cne, 1ste&llCJ.London:MartinDunitzLtd, 1992.163—177.
16JRanYP,YoshiketT,OgawaH.Lipaseof Malasseziafurfur:Somepropertiesandtheir relationshiptocellgro~dllJj.JMeelVet Myco1.1993,3l:77—85.
17JP1otkinU,SquiqueraL,Math【l,l,eta1.
Characterisationofthelipaseactivityof
Malasseziafurfur【JJMlVetlmCOl,
l996.34:43—48.
18JWalkerGM,SullivanPA,ShepherdMG. Magnesiumandtheregulationofgerm formationinCandidaalbicanslJ]JGen Microbiol,I984,130:I94I—I945.
(收稿日期:2004—09—15)