HPV治疗性重组融合蛋白疫苗的抗肿瘤作用及机制初步探讨_

HPV治疗性重组融合蛋白疫苗的抗肿瘤作用及机制初步探讨_ 经典 博硕论文 硕 士 论 文博士学位论文,,,治疗性重组融合蛋白疫苗的抗肿瘤作用及机制初步探讨赵清正研究员杨隽钧阳妇产科学北京协和医学院完成日期:妇科肿瘤学科专业:指名姓,,,,年,月院所教授研究方向:号 导教师:向学校代码:学:,,,,,,,,,,?,,同等学力申请博士学位: 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文录目一部分,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗在体内抑癌作用的研究综述中文摘要英文缩略词全文结论英文摘要相关肿瘤生长的信号传导机制初步研究致谢前言参考文献第第二部分,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗抑制,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文英,,, 文缩略词(,,,,,,,缺氧诱导因子一,血管内皮生长因子人乳头瘤病毒白介素,蛋白钙网蛋白信号转导与转录激活附分子一,抗原提呈细胞热休克蛋白詹纳斯激酶改造的钙网蛋白丝裂原活化蛋白激酶微血管密度不完全弗氏佐剂,,,,分枝结核杆菌热休克细胞毒性,淋巴细胞,,,,,,,,血小板一内皮细胞粘树突状细胞完全弗氏佐剂,,,,,蛋白,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,;,,,,;,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,;,,,,,,,;,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,’,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,一,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,,,’工,,,,,,,,;,,，,一,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,一,,,,,,,,,,,,,,，,一,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,; 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文机制初步探讨,,,治疗性重组融合蛋白疫苗的抗肿瘤作用及其中文摘要杨隽钧向授赵清正研究员,’导师:教研究生:阳的微小肿瘤病灶具有治疗作用。将两组肿瘤组织切片进行免疫组化分析，发现融合蛋白疫苗能够有效的抗肿瘤生长，诱发特异的肿瘤排斥反应，对未形成实体瘤将两组肿瘤细胞进行,,,,,,,,、,,,,,蛋白表达水平明显下降，活化的,,,,,,,一,通过体外实验证明了该疫苗可诱导到较高水平的,,,活性及抑制血管生长作用。本研究方向。本课组前期构建了针对,,,,,的,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗，并减少发生转移浸润的机会。并不理想。自从发现宫颈癌与,,,感染密切相关后，,,,治疗性疫苗成为一个重要的宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，对于中晚期患者通常放化疗和手术治疗的效果,,,,—,,,信号传导通路:结果显示疫苗组细胞中,—,,,、,—,,,、,—,,,的表达降低，,,,,来初步研究,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗抗肿瘤生长的分子机制。(,)，,一,,,,,,,,信号传导通路:结果显示疫苗组的蛋白水平明显提高。说明,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗能够通过抑制，,一,和,,,,,,以及其下游相关基因的表达来抑制血管生成及促进了肿瘤细胞的凋亡。(,)说明,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗能够通过抑制,,,,—,, ,信号通路链中相关,,,,激酶活性，抑制肿瘤细胞的生长。研究进一步通过体内试验研究其抗肿瘤作用及其分子机制。,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白能够减少肿瘤新生血管的形成，降低肿瘤的生长速度，我们建立了,,,,,,,小鼠,,一,肿瘤模型，体内实验结果表明,,,,,,,,,,,,,重组中文摘要北京协和医学院博士研究生学位论文，,一,、,—,,,,,、,,,,、,，,一,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文关键词:移，最终产生有效的抗肿瘤作用。信号传导通路和,,,,—,,,信号传导通路来抑制肿瘤新生血管的形成和肿瘤浸润转本研究结果表明:,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗可能通过抑制，,一,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗;抗血管生成;，,一,;,,,,,,:,,,,北京协和医学院博士研究生学位论文中文摘要, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文,;,,,,坶,,,,,,,(?,,,,,;,,,,,,,,,,七,,,,,,,,,—;,,;,,,,,，’,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,;;,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,;,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,;,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,;,,,,;,,,,,,,(,,,;,,,,,,;,,,，,,,,,,,,,;,加,,,,,,;,,,,;,,,;,,,,,,;,,,,,;;,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,(,,,,,,;,,,,,,,,;,,,,，,,,,;,,,,,;,,,,,,;,,,,;,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,珈,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,;,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,;;,,,;,,,,,;,,,,,,,，,,,，,,,,:,(,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,:,,,,,,,,;,,,,,,(,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,一,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,—,,,;,,,;,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,一,,,;,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,?朋,,,,,,,,,,(,,,,,,,,;,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,;,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,;;,,,,,,,,,,,,,,,;;,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,;,,,，,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文(,)，,一,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:(,),,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,;,珥,,,,,,,,,,,:,,;,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,一,:;,,;,,,,,,，,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,;,加,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,;,,,,,,,,,，,,;,,,,,,,,,,,,,一,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,;,,;,,,,,,,,,,,,—,,,,,，，,一,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,:,,,,,,;;,,,,,,,,,:,,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,:,,;;,,,:,,,,,,,;,(,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,;,,,,(,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,’,,,,,,,;,,,,,,,,,,,—,,,,—,,,，,—,,,，,,,,,,,;,,,,,,,,,北京协和医学院博士研究生学位论文,,,,,,,,,英文摘要,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;;,,,(,,,,,,,,,,,,,,，,一,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,，, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文士,翮『舌易发生变异，是主要的种特异性抗原?,。,,编码的衣壳蛋白较少，但变异多，反映,,，这两种蛋白组成病毒的衣壳。,,高度保守，特异性强，在抗体的压力下不容细胞转化功能及致癌性有关。?,区主要编码主要衣壳蛋白,,和次要衣壳蛋白,,,抗原的多态性。?长控制区(,,,)，又称为上游调控(,,,)或非编码区(,,,)，码含,,,个氨基酸和,,,个氨基酸的病毒原癌蛋白，是,,,的主要致癌蛋白，与病毒维持病毒复制、编码病毒蛋白和细胞内病毒高拷贝数的基因。其中,,和,,分别编,,，,,和,,等早期蛋白，参与病毒,,,的复制、转录、翻译调控和细胞转化等，是早期基因(,)区、晚期基因(,)区和长控制区(,,,)三部分。?,区编码,,，,,，,,，的增生性病变。,,,基因组有,,,,个开放读码框架(,,,)，主要包括,个区域:包括复制起点和,,,基因表达所必需的调控元件，调控病毒的转录与复制;该区有许多人乳头瘤病毒属乳多空病毒科乳头瘤病毒属，是一种无包膜、基因组高度螺旋瘤。也将由此成为人类通过注射疫苗、筛查和早诊早治来预防以致消除的第一个恶性肿,,组成，位于,,和,,之间，不编码蛋白质。,,,含有,,,基因组,,,的开创了宫颈癌预防和治疗的新方向。,,,,年,月，宫颈癌预防性疫苗,,,,,,,,经过内外学者对宫颈癌与,,,的关系进行了大量的研究，并着手研制与研发,,,疫苗，,,,,,,,,,，,,,)与宫颈癌发病相关之螅 紫确?至巳巳橥妨霾《荆ǎ瑁酰恚幔睿龋幔酰螅澹睿?源由细鍪兰 停福澳甏 鹿 蒲Ъ夜 隆こ ず郎 ǎ龋幔颍幔欤淞品椒 疤匾煨砸?锸橇俅仓瘟乒 卑 ?档突颊咚劳雎实闹匾 呗浴,埽 的晟 媛式觯常 玻ァ 保常ィ 苌 嫫谛?冢保案鲈拢狻 矗薄,虼耍 罢也? ?碌闹稳〉昧钊寺 獾牧菩В 叶杂诟捶 ?闹瘟聘 窍嗟崩 眩 嗍 颊咧瘟坪笫 淙皇质跫胺呕 埔讶涨鞒墒欤 杂谀承?? 绕涫蔷植客砥诠 卑?颊卟?凑寂 陨 诚低扯裥灾琢龅模罚常ァ 梗常ヘ浚薄, 昀垂 卑??〕鱿只颊吣昵峄 魇疲 唬 磕晷略龅墓 卑?颊咴迹保常 保低蜃笥遥 际澜绻 卑?路?? 苁 模玻福 福ィ 暝加校担巴蛐路?? 劳霾? 加校玻低蛉耍睿场, 夜 鞘澜缟瞎 卑?母叻? 卑?俏挥诘诙 唤龃斡谌橄侔?难现匚:ε 越】档亩裥灾琢觥, 澜缑炕 乃 幢栈沸》肿樱模危敛《尽,饕 腥颈砥ず驼衬ぷ橹 鹣嘤Σ课簧掀ぷ橹 ご铮保岸嗄甑牧俅惭芯恐沼诨褡忌鲜校 晌 死嗬 飞系谝桓霭??呙缜浚薄, 卑?加桑保埃埃埃穑幔穑椋烨把员本? 鸵窖г翰?垦芯可 宦畚模担 酰?经典论文 博硕论文 硕 士 论 文皮后由,，,向癌转化的过程中相当关键的步骤。?干扰机体免疫反应的途径:高危病毒基因组的整合可能会激活原癌基因，致使细胞恶性转化。?参与逃避宿主免疫,,、,,能够下调免疫干扰素促进因子野生型白细胞介素,,(，,一,,)的表达型,,,感染后，,,,,细胞活性降低，局部,,数目减少，癌变危险性增加。有作者证实,,,,,细胞周期中的,,,纠错功能，染色体的突变累积，最终导致细胞失去,,期阻滞和凋和,,结合是,,,致癌的重要机制。,,蛋白和,,,结合使,,,被快速降解，使其失去在,,、,,蛋白分别与细胞内肿瘤抑制物,,,监视的机制，阻止凋亡的发生。其中,,,亡等功能。?,,,感染与端粒酶激活有关;端粒酶的激活是高危型,,,感染宫颈上和过度表达。由于,,和,,蛋白的转录不受限制，能促使微小病变进展为宫颈癌。?体发生整合，,,、,,基因被破坏，从而导致了,,、,,基因的表达失控，呈持续表达,,,的合成和复制以及宿主细胞的增生、增殖和恶化;病毒基因组与宿主染色型所必须。,,,的致癌机制主要包括以下几方面:?早期基因的表达促进宿主细胞,,病毒基因整合入细胞基因组,,,中并持续表达为诱导细胞恶性转化及维持恶性表,,,的致癌作用主要是依赖于,,，,,蛋白实现的，是关键的致癌基因,射。,,和,,的疫苗是改善宫颈癌预后的关键。导致鳞状细胞癌，,,(,,的富颈癌与,,,,,相关，主要导致腺癌,纠钔。因此研发针对,,,,,，大约引起,,,左右的宫颈癌，其中约,,(,,的宫颈癌与,,,,,感染相关，主要,,,以上的宫颈癌中,,,,,，,,，,,和,,型阳性，最主要的两个高危型是,,,,,和因，,,,以上的宫颈癌与,,,感染有关。国际癌症研究中心(，,,,)的研究结果表明:大量的分了生物学与流行病学研究证明持续性,,,感染是宫颈癌发生的重要原头颈部肿瘤。度的宫颈病变以及生殖器疣等，而高危型,,,可以引起宫颈癌、肛门和生殖道癌及,,，,,，,,，,,，,,，,,等),,,。低危型,,,很少引起癌症，但可以引起良性或低病变的性质分为低危型(,,,,，,,等)和高危型(,,,,,，,,，,,，,,，,,，,,，,,，,,，可以诱发各种疣状增生、鳞状上皮异型性增生以及癌变。粘膜型,,,又根据其引起型。粘膜型主要感染人泌尿生殖道、肛周及口咽部的粘膜上皮或粘膜移形区上皮，字排列，己分离鉴定出的,,,主要分为,类，即粘膜型、皮肤型和疣状表皮发育不良,,,目前已经被鉴定出,,,余 种基因型，其命名依据它们被发现的时间先后按数结合位点，可以结合转录激活物和抑制物，与病毒复制转录的调控有关口,们。北京协和医学院博士研究生学位论文前言,,,,【,，,,,,,,。 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文异大、不能增强细胞介导免疫、存在注射后局部反应以及有可能导致脑病的发生等结构，促进抗原的可溶性表达，故,,,又被称作分子伴侣口,,,,在体内可与多种蛋白形成复合体，发挥其调节靶蛋白的作用又不改变靶蛋白的正常状态下水平较低，存在于胞质中，应激状态下表达迅速提高并进入胞核中啪,。广泛存在于生物界，从原核到真核生物细胞中具有高度保守性质的一组蛋白质啪,与肿瘤的发生、发展、生物学特性及预后关系密切晗利。热休克蛋白又称应激蛋白，,,,,,,,，,,,)等。近年研究证明,,,其在提高抗体效价免疫持久性方面优于铝佐剂，但其不良反应严重，易引起过敏反其他佐剂主要有热休克蛋白(,,,,同的作用。但细胞因子昂贵，具有种属特异性、有一定毒性及潜在的自身免疫性。细胞因子佐剂能够增强抗原特别是肿瘤抗原特异性免疫反应，不同的细胞因子有不效果好、呈递作用好等优点，但其存在不良反应、不稳定性、生产成本高等缺点。对再次免疫应答时抗体的水平无明显提高。脂质体佐剂具有靶向性好、抗感染免疫激复合物(，,,,,,)，用于多种疫苗，其中流感疫苗已进入临床研究阶段嘶,，但它市的人用佐剂，可增强体液免疫应答和细胞免疫应答嘲。天然来源佐剂包括免疫刺应，因此只用于动物疫苗乜钔。水包油乳剂目前主要有,,,,，是除铝佐剂外第二个上表达，只在转化的恶性细胞中持续表达，故经修饰去除其转化活性而保留其抗原性和水包油乳剂，其中油包水乳剂分为福氏完全佐剂(,,,)和福氏不完全佐剂(，,,)，缺点心,,;对基因工程蛋白或多肽方面则作用很很差。矿物油佐剂主要有油包水乳剂,,,。目前，在重组蛋白疫,,余年，具有便宜、安全、合成简单的优点;但是其存在不能冻干、制备后质量差细胞因子佐剂以及其他类型的佐剂(包括,,,及,,,等)等。铝作为疫苗佐剂己使用可供应的佐剂约有,,,多种乜羽，主要包括铝佐剂、矿物油佐剂、天然来源的佐剂、必须考虑的有效性、安全性、选择性、可控性等及技术和制造等问题口,’,?。目前尚用。但是，佐剂是外源性物质，能引起一系列的毒副反应。因此，佐剂的应用具有我们前期实验证明,,,,,重组融合蛋白本身免疫原性很低，必须与佐剂联合应即可作为治疗性疫苗理想的靶抗原,钔。因工程疫苗。目前,,,预防性疫苗已经上市，但是对已经存在的,,,感染或宫颈癌没,,和,,蛋白含有多个抗原表位，可诱导特异性的细胞免疫反应，且在正常组织中不,,早期区编码的与转化有关的感染细胞和肿瘤细胞来达到治疗宫颈癌的效果。,,,有治疗作用;,,,治疗性疫苗是用于防治己经存在的癌前病变继续恶化，并清除,,,由于,,,的多样性、在体外难以培养并且存在潜在的致癌性，因此只能研制基,,,;,前言北京协和医学院博士研究生学位论文,,,,。 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文姗,,,分子，表达至细胞膜上，提呈给免疫活性细胞进行免疫应答;(,)诱导,,,成抗原，以,,,一肿瘤抗原肽复合物形式通过删,—，通路活化,,记忆，增强抗肿瘤特异性免疫应答‘蚋,,。其中,,,与其,端(,—,,,,,,,,外和体内实验中专一地抑制血管内皮细胞的增生和抑制肿瘤生长。最近越来越多证,,,，简写为,,,,)能够减少成纤维细胞生长因子诱导的血管内皮细胞生长，在体据表明,,,,是,,,分子伴侣作用的功能区呻，唧。这些结果表明携带,,,,的肿瘤疫 苗有望成为有效的抗肿瘤治疗性疫苗。关的疫苗研究已经证明其能特异性增强肿瘤抗原,,的递呈，诱导产生长期的免疫亡细胞被吞噬的过程、参与抗原处理及递呈，增强肿瘤细胞的免疫原性，诱导特异合区及中间的富含脯氨酸并有两段重复序列的,区。,,,能够通过信号传递启动凋应答过程中一种重要的免疫因子;由,个功能区组成:,端的保守区、,端的钙结钙网蛋白(;,,,,,,;,,,,，,,,)是内质网主要的钙结合蛋白，也是抗肿瘤免疫‘,,刊和载体疫苗‘叫等。应‘,,叫引。目前，已经被的,,,,,疫苗涉及到肽疫苗嘞,、蛋白疫苗口,—,。,训、,,,疫苗使其释放，,一,、肿瘤坏死因子和干扰素等细胞因子，经细胞免疫途径发挥抗肿瘤效,)熟;(,)通过自然杀伤细胞(,,)发挥作用;(,)通过激活辅助性,淋巴细胞((,,,,融合基因相性,淋巴细胞增殖等功能发挥强大的抗肿瘤效应。对,,,和,,,的,细胞反应和强烈的,,,效应;(,)介导外源抗原进入内源递呈途径:当,,,摄入外,，,细胞，诱导特异性源性抗原后，产生大量,,,,,，与抗原及,,,结合，使抗原解离出肽片段并将其传给具有的抗肿瘤的作用主要表现在:(,)能够介导抗原提呈细胞(,,,)内吞和加工肿瘤肽段的,,,效应，小鼠体内也产生了对抗表达,,蛋白肿瘤负荷的保护性反应。,,,,,下，用含有,,,病毒的,,蛋白和,,,,,分子的融合蛋白免疫小鼠诱导了可识别,,蛋白要,,,，,细胞的帮助，不受心,限制，不需要病毒载体口,—,嘲,。,,等,订在无佐剂情况空间结构，增强抗原的可溶性表达，提高抗原的免疫原性，而且不需要佐剂，不需多项研究表明:,,,,,作为一种有效的分子伴侣，不仅利于蛋白分子形成正确的应‘,,侧。受到重视嗍。已有研究证实,,,,,与肿瘤抗原肽相伴可诱发肿瘤特异性主动免疫反,,，,,,,,,,)的应用越来越(,,;,,,;,,,,,,苗的发展受到缺乏理想佐剂困扰的情况下，分枝结核杆菌热休克蛋白,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,;,北京协和医学院博士研究生学位论文,,,,,,,,,前言,,,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文有利于在不同的遗传学背景的个体中与高度多样化的删,分子形成细胞内肽一心,生长的情况以及抗肿瘤血管生成作用:并且通过不同的信号传导通路来初步探讨础上，用,,,,,,,雌性小鼠为模型，观察,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗抑制肿瘤生长具有较强的抑制作用，具有显著的抗肿瘤功能。本研究基于上述研究工作的基抗血管生成的体外实验证明了,,,,,,,,,,,,,可诱导到较高水平的,,,活性，对血管组融合蛋白疫苗进一步研发提供了一定的实验依据。,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗的抗肿瘤作用及其分子机制。为,,,,,,,,,,,,,重,,,，比未改造的,,,,,,,,,,,大约提高了,倍，而且容易提纯，显著提高了回收率。(,,,,)。,,,,,,,,,,,,,显著提高了融合蛋白的表达水平，含量约占菌体总蛋白的我们前期通过特异性细胞毒杀伤(,,,)活性测定和鸡胚绒毛尿囊膜模型分析蛋白变性后复性困难等问题。为克服以上难题，我们课题组经反复研究试验，删除了某白表达量很低，约占菌体总蛋白的,,一,,,，且存在较难提纯，蛋白提纯回收率低，,,,,,共表达的,,—,肿瘤细胞为模型)。但,,,,,,,,,,,融合蛋及其转移(以,,,一,,,,特异的,,,反应，而且可以预防和治疗,,,相关的肿瘤不仅可以显著增强,,,一,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白(约,,,,)，并证 明在无其它佐剂的条件下，该融合蛋白两个不同的成员都能够有效的增强,,,治疗性疫苗的免疫原性，表达并纯化了一个复合物，从而避免删,表型限制。我们课题组在前期依据,,,和,,,,作为,,,家族内些片段和点突变，构建了一个修饰的(,,,,,,,,)融合基因，称之为,,,,,,,,,,,,,抗原衍生的肽混合物可以提供抗原中所包含的各种己知的或潜在的抗原表位，非常由于蛋白疫苗具有安全、有效、可重复用药和制备较简单等优点，并且由蛋白北京协和医学院博士研究生学位论文前言, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文研究第一部分?,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗在体内抑癌作用的材料与含有,,,胎牛血清，,,,,,,的青霉素和链霉素，,舳,,,,谷氨酰胺，,牛罚 牛痘 蚣凹せ畹模恪 取 颍幔蠡 蜃 纬桑 茫担罚拢蹋 丁,淙橄侔???式系停 醒劬θ彼穑 苑派湫杂械挚沽Γ 越岷烁司 舫屎谏 慕 泄潭ǎ 嘤 桑茫担罚拢蹋 蹋椋簦簦欤搴蠼 值模茫担罚拢痰诹 檠窍刀 ?笞鹘 着嘤 保 茫危铮 担沸凼蠛停危铮 担泊剖蠼慌浜笈嘤 桑茫担贰,?冢茫担 洞菩孕?螅ǎ樱校萍叮 ,菩裕茫担罚拢蹋 缎?笤从冢分薪 茫担罚拢蹋 保梗玻蹦辏茫 茫 蹋椋簦簦欤逵茫蹋幔簦瑁颍铮穑牵矗保福 冢常贰妫 担ィ茫埃卜跸渲信嘌 ,匦璋被 幔 希 矗恚纾 桑桑欤蹋恚恚埃保 谭侵掳?芯俊,保叮矗芭嘌 校 嘌 校鳎踅淌诨菰 ,裕谩 熘琢鱿赴 昱嘌 冢遥校停纱笱б窖г海浴 帽臼笛樗 ?玫模茫担罚拢蹋 洞菩孕?缶 浮 保爸芰洌 逯兀 灾泄 窖Э聘校 允蠖徊《居幸欢ǖ牡挚沽Γ 扇潘夭 扛撸 园偃保浮 玻埃梗 湛纫赘幸蜃用舾小,,糜冢裕靡唬敝琢鱿赴 昃 沧 荆龋校郑欤叮保 蚕赴 芭嘌 跫 恚洌危茫遥裕 牛罚 瑁螅鹬刈槿诤蛋白疫苗由前期研究人员制备，并由本实验室保存。,(,蛋白疫苗来源,材料与试剂学院实验动物研究所实验动物繁育场购买。全部动物饲养在,,,环境中(中国医学助治疗手段提供实验数据。疫苗的体内抗肿瘤作用，以期明确重组融合蛋白的抑瘤作用，为寻找新的宫颈癌辅组融合蛋白疫苗的抗肿瘤效应，本研究以,,一,肿瘤动物为模型，观察重组融合蛋白,,,活性并对肿瘤血管生长具有较强的抑制作用。为了进一步观察,,,,,,,,,,,,,重前期的体外实验已经证实了,,,,,,,,,,,,,重组融合蛋白疫苗可诱导到较高的科学院实验动物中心)。每周观察两至,次。来源于,,,,,,,小鼠，目前己被广泛用作宫颈癌的治疗模型‘峨,,,，由,,,,, (,实验动物,,,,,,,第一部分北京协和医学院博士研究生学位论文,,,? 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文,(,主要试剂超净工作台恒温,,。细胞培养箱,,,,,公司公司北京昌平长城空气净化工程公司,(,主要仪器和分析软件其它常用化学试剂甲醇、无水乙醇、异丙醇、氯仿、异戊醇、硼酸等均为国产分,,,显色增强剂,,,,缓冲液枸橼酸钠缓冲溶液中性树胶北京化学试剂公司二甲苯北京中杉公司鼠抗人,,,,单克隆抗体,,,,,苏木素溶液析纯试剂。北京经科宏达生物技术有限公司,,,,,,,,,溶液,,,,高糖培养基,,,,,,,玻璃纤维滤纸南京金鱼工具有限.