基因芯片法检测自疑药源性耳聋患者基因突变35例 - 副本

· 768 · ◇临床药理学 ◇ Chin J Clin Pharmacol Ther 20l1 July；16(7) 中国临床药理学与治疗学 中国药理学会主办 CN 34—1206／R，ISSN 1009 2501 http：／／www．cjcpt．coFil 2011 July；16(7)：768— 771 基因芯片法检测自疑药源性耳聋患者基因突变 35例 魏绍煌 ，郭舜民 福建 医科大学附属第二 医院药剂 福建省 医学科学研究院，福建省 医学测试 摘要 目的：对 自疑 药源性非 综合征型耳聋患者 进行 中国人 常见耳聋基 因的突变分析 ，以明确其 分子病因。方法 ：收集 35名 自疑非综合征 药源 性耳聋患者的外周血样本，常规方法提取基 因组 DNA，进行基 因芯 片分析。对突变患者的基 因， 进行 PCR 扩增 ，扩增 产物经 DNA 测序分析 ，并 ·与 NCBI GenBank数据库进行 比对 ，从而对耳聋 相关基因的 突变进行分析 。结果 ：35名 自疑 非 综 合 征 耳 聋 患 者 中 检 出 已 知 的 mtDNA 12SrRNA 基 因 罕 见 致 病 突 变 C1494T 1例 ，占 2，86 ，其余为野生型或是其他基 因突变。结论 ： 在临床 自疑药物性聋病 患者中真正与线粒体基 因 突变相关的仅 占少数 ，48临床开展 药源性耳聋 2O11-04-18收稿 2Ol1—05-30修回 福建省 自然科 学基金资助项 目(2010J01024)；福 建省科技厅省属 公益 院所基本专项资助项 目(2011R1101024—2) 魏绍煌，男，主管药师，研究方向：医院药学。 Tel：15880918778 E—mail：weisha0huang@126．corn 林文津，通信作者 ，男，助理研究 员，研 究方向：药物不 良反应及 个 体化 用药。 E—mail：1wiin@sina．com 基 因 ⋯ ． - ． _． _． -． -+ TS：The prediction modeI showed that it would be Cassia Twig (B)，Ephedra (A)，Apricot (C)，and Liquorice (D)in order by the impor— tance and the best combination iS A plus B， while the worst iS C combined with D．CONCLU— SION：Ephedra and Cassia Twig in combination have significant diaphoretic effect in rats，and ，林 文津 科 ，泉州 362000，福建 重点实验室，福州 350001，福建 检测时，最好同时进行其他耳聋相关基因 而基 因芯片检测是其 中一项很好的方法。 关键词 基 因芯片；测序 法；药源性耳聋 基 因 ；C1494T 的检 测 ， ；线粒体 中图分类号：R968 文献标识码 ：A 文 章 编 号：1009—2501(2011)07—0768—04 白1962年发现世界上首例线粒体疾病患者 以来，人类已发现了多种由于线粒体功能障碍而 导致的疾病。近十年来已经明确了多个与耳聋有 关的线粒体基因突变，遗传性线粒体突变是氨基 糖苷类抗生素致聋(AAID)等非综合征耳聋的原 因之一，临床上发现不但大剂量、长时间使用氨基 糖苷类抗生素可引起耳蜗损害，部分患者小剂量 的用药也可导致耳聋 ，提示存在遗传易感性 的可 能口]。开展线粒体耳聋基因筛查可以帮助预测哪 些个体具有氨基糖苷类抗生素用药风险，加强氨 基糖苷类抗生素用药的安全性，并且降低耳聋的 发病率 。 the combination wilI show better effect in corn parison with any single component． KEY W ORDS Mao—to； Compound； Simula tion；Pharmacodynamic interactions 本文编辑：李 娟 · 770 · 表 I 35例非综合征耳聋患者基 因芯片检测结果 3 讨 论 临床上的耳聋常见为隐性遗传，仅凭线粒体 基 因 12S rRNA A1555G或 C1494T是不足 以产 生耳聋表现型，需要其他的修饰因素，如氨基糖苷 类抗生素的使用。氨基糖苷类抗生素在内耳的外 淋巴和内淋巴聚积，使得 AI555G或 C1494T突 变携带者 的耳蜗细胞 中的线粒体更容 易受 到攻 击，从而对这些细胞形成组织特异性的损伤，最终 导致携带耳毒性 mtDNA突变的个体发生听力缺 失_】 卜 ]¨。因此 ，在携带耳毒性 mtDNA突变 的个 体中，特别是在年龄小于 1O岁的儿童中，哪怕是 小剂量地使用氨基糖苷类抗生素，也会导致严重 的药源性耳聋 。 虽然基因芯片法检测遗传性耳聋相关基因已 有文献报道[7 ]，但 是运用基因芯片法在我省进 行耳 聋 基 因筛 查，发 现 mtDNA 12S rRNA C1494T点突变在我省尚属首例报道，突变率为 2．86 ，为较罕见的突变。临床 C1494T点突变 是目前已知的氨基糖苷类药物易感性的主要分子 遗传基础之一，该患者应禁用氨基糖苷类抗生素。 该实验结果表 明我省临床上 自疑药物性耳聋 的患 者实际与线粒体基因突变有关的仅占少数，多数 患者为其他基因突变或其他因素致聋，故在开展 药源性耳聋基因诊断时应同时进行其他相关耳聋 基因的检测 ，以免误诊 。 2004年，赵辉口 等报道在一个中国大家系的 母系成员中发现线粒体 12S rRNA 的 1494C> T突变。已发现多个 mtDNA 1494 C>T突变母 系遗传耳聋家系[4 ，各家系发病人数从 2～ 28人不等。何勇等 在福州特教学校的 15O名 耳聋学生中没有进行 C1494T突变的检测，所以 无法判断福州市耳聋学生中是否有 C1494T突变 患者 ，本研究结果表明在我省也存 在 C1494T这 种罕见突变，考虑到此突变在散发性耳聋的致病 机制 中占有一定的比例 ，对这种耳聋的预防变得 更为重要 。其预防的关键在于通过筛查检测发现 携带 mtDNA 1494 C>T 突变的个体 ，绝对禁止 此类个体接触氨基糖苷类抗生素，从而避免严重 的耳毒性反应发生 。 对 mtDNA 1494 C>T突变 的检测方法，目 前有实时荧光定量 Taqman探针法 、耳聋基 因芯 片、直接测序法。直接测序的方法，虽然序列测定 为鉴定突变的金，但成本高 ，检测耗时长 ，不 适合大规模筛查 ；新 开发 的 Taqman探针法具有 重复性好 、特异性强、敏感性高和易操作等优点 ， 但还需要通过测序法验证；基因芯片方法简单，准 确率高，重复性好、检测效率高，适合大规模筛查 及临床常规检查。研究者可以根据 自己实验室的 条件选择适合的检测设备，优化检测方法，提高效 率、降低成本，帮助和提醒医生慎重使用特定种类 的抗生素以避免造成携带基因突变个体致聋。 参 考 文 献 [1] 杨烨，殷泽登．线粒体 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chondrial 12S rRNA tlents， one m utatlon gene．RESULTS：In 35 pa— was found out in mtDNA 12S rRNA gene C1494T (2．86 )，the other were wild type or other DNA mutations． CoN- CLUSION： Only a minority of drug—induced hearing 1OSS associated with M itochondria1 DNA mutations amongst clinical self—doubt patients． The other deafness genes test simultaneously would be better．And gene microarray is one of a new and good method suggested． KEY W oRDS Gene microarray：Drug—induced hearing loss；Self-doubt；12S rRNA；C1494T 本文编辑：储冀汝