寒性药物抗大鼠急性心肌缺血的药效学研究_韩蕾

第 30 卷 第 11 期 2 0 1 2年 1 1 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 11 Nov． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 2542 学 刊 寒性药物抗大鼠急性心肌缺血的药效学研究 韩蕾1，李月2，周晓辉3 (1． 江苏建康职业学院，江苏 南京 211800;2．辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110032; 3．中国药科大学临床药学教研室，江苏 南京 211198) 摘 要:目的:通过结扎冠状动脉造成大鼠急性心肌缺血模型，观察寒性药物豨莶草提取液的抗心肌缺血作 用。方法:结扎冠状动脉左前降支造成大鼠心肌缺血模型，进行心电图监测、组织染色检查和血清酶学等综合指 标测定来确定心肌缺血范围和损伤程度，并考察豨莶草提取液(7g 生药 /kg)对其影响。结果:与假手术组比较， 模型组大鼠心电图 ST段波形明显改变，组织染色学检查可见明显心肌缺血损伤，大鼠血清中MDA丙二醛含量增 加;与模型组相比，豨莶草提取液组各项指标均有不同程度改善。结论:豨莶草提取液对大鼠实验性急性心肌缺 血具有一定的保护作用。 关键词:豨莶草;心肌缺血;保护作用;实验研究 中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)09 － 2542 － 04 Pharmacodynamic Research on Siegesbeckia Orientalis in Anti － acute Myocardium Ischemia HAN Lei1，LI Yue2，ZHOU Xiao-hui3 (1． Jiangsu Jiankang Vocational College，Nanjing 211800，Jiangsu，China; 2． Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China; 3． China Pharmaceutical University，Nanjing 211198，Jiangsu，China) Abstract:Objective:To discuss the preventive effect of Siegesbeckia Orientalis extract on experimental acute myocardi- um ischemia in rats． Methods:The left anterior descending branch of coronary apery(LAD)was ligated to form an acute myocardium ischemia model in rats，detecting the electrocardiogram(ECG) ，NBT staining tissue section and enzymes of serum to determinate the damage degree and the scope of ischemia area，so as to inspect the effect of Siegesbeckia Orien- talis extract(7g crude drug /kg)． Results:Comparing with the shame operated group，obvious elevation of ST segment of ECG and myocardium damage were observed in the model group，with increasing level of MDA;comparing with the model group，there was remarkable difference in the Siegesbeckia Orientalis extract group． Conclusion:The extract of Siegesbeckia Orientalis has a protective effect against acute myocardial ischemia caused by LAD． Key words:Siegesbeckia Orientalis;myocardial ischemia;protection experimental study 收稿日期:2012 － 06 － 22 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30901993) ;中国药科大学 引进人才启动基金资助项目(01211100) 作者简介:韩蕾(1975 －) ，女，辽宁沈阳人，副教授，博士，研究方 向:中药药性理论、中药药理学。 通讯作者:周晓辉(1971 －) ，男，河北景县人，副教授，医学博士，研 究方向:慢性前列腺炎的临床与基础研究，中药药性理 论。 心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧 减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种 病理状态。造成心肌缺血的原因有:血压降低、主动脉供血 减少、冠状动脉阻塞、心瓣膜病、血粘度变化、心肌本身病变 等。由于心肌供血不足，通过神经传导和反射常导致病人 有胸痛、胸闷的感觉，供血严重不足时可致心肌产生缺血性 坏死(心肌梗死) ，并因此产生循环的不稳定甚至休克或死 亡，也可由于心肌局部缺血产生心肌电位不平衡并因此产 生各种心率失常，个别恶性心率失常可导致病人的猝死。 临床显示:引起心肌缺血最主要、最常见的病因，是冠状动 脉狭窄［1］。冠心病预后差，对现有的多种治疗手段效果不 佳。目前对于心肌缺血缺乏十分有效的治疗方法，现有的 各种治疗办法尽管某种程度上能缓解心肌缺血的一些症 状，但如何选择合理而又有效的治疗药物一直是令医药界 困扰的难题。现代药理学、临床医学的不断深入，极大地拓 展了中医药的价值，发现了许多中草药在防治各种疾病中 前所未知的作用。 豨莶草为常用中药，性寒，味辛、苦。始载于唐代《新 修本草》［2］。Siegesbeckia Orientalis，别名黏金强子、粘为扎、 珠草、棉苍狼，为菊科植物豨莶 Siegesbeckia orientalis L．、腺 梗豨莶 Siegesbeckia pubescens Makino 或毛梗豨莶 Siegesbeck- ia glabrescens Makino的干燥地上部分;我国大部分地区有 产，湖南、湖北、江苏等地产量较大;其味辛、苦，性寒，有小 毒;归肝，肾经;具有祛风解，行气散瘀，凉血平肝，消肿止 痛，降血压之功效;传统应用于治疗感冒发热头痛，风湿骨 痛，风湿性关节炎，四肢麻痹腰膝无力，高血压;其含生物 碱，酚性成分:豨莶苷，豨莶苷元，氨基酸，有机酸，糖苷，苦 味质等，还含有微量元素 Zn、Cu、Fe、Mn等。现代研究发现 豨莶草有抗炎和较好的镇痛作用;有降压作用;对细胞免 2452 第 30 卷 第 11 期 2 0 1 2年 1 1 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 11 Nov． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 2543 学 刊 疫、体液免疫及非特异性免疫均有抑制作用;可增强 T细胞 的增殖功能，促进 IL － 2 的活性，抑制 IL － 1 的活性，可通 过调整机体免疫功能，改善局部病理反应而达到抗风湿作 用;有扩张血管作用;对血栓形成有明显抑制作用;对金黄 色葡萄球菌有较强的抑制作用，对大肠杆菌、绿脓杆菌、宋 内痢疾杆菌、伤寒杆菌、白色葡萄球菌、卡他球菌、肠炎杆 菌、鼠疟原虫等也有一定的抑制作用，对单纯疱疹病毒也有 中等强度的抑制作用。 本实验中，我们主要研究豨莶草的扩张血管作用，探讨 豨莶草对抗大鼠急性心肌缺血的作用。心肌严重而持久地 缺血导致心肌不可逆的坏死即为梗死。心肌梗死范围是影 响心功能的主要基础，因此缩小心肌梗死范围是治疗急性 心肌缺血梗死的主要途径之一，也是评价抗心肌缺血药物 的主要疗效指标。故本实验采用大鼠心肌缺血前、后 的标准Ⅱ导联心电图 ST段变化和 NBT染色法来测量心肌 缺血梗死范围，及血清酶学变化，以此来考察豨莶草提取液 对心肌缺血的保护作用。 1 材 料 1． 1 实验动物 清洁级 Wistar大鼠 32 只，雌雄兼用，体重 140 ～ 230g， 购自大连医科大学动物实验中心。 1． 2 药品及试剂 1． 2． 1 豨莶草提取液 药材购于大连开发区同仁堂药房， 其产地为辽宁省。取 500g 豨莶草，乙醇回流提取得到 700mL提取液，使用时加入等体积蒸馏水，即得豨莶草提取 液。 1． 2． 2 磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液 在 800mL 蒸馏水中 溶解 8g NaCl、0． 2g KCl、1． 44g Na2 HPO4和 0． 24g KH2 PO4， 用 HCl调节溶液的 pH值至 7． 4 加水定容至 1L，4℃冰箱保 存。 1． 2． 3 氯化硝基四氮唑蓝(NBT) 上海第一生物药业有 限公司，产品批号 71029360，应用时以 PBS 缓冲液配至所 需浓度，4℃冰箱保存。 1． 2． 4 盐酸地尔硫卓 30mg /片，天津田边制药有限公司 生产，产品批号 0410044。 1． 2． 5 乙醚 天津市科密欧化学试剂有限公司生产。 1． 2． 6 水合氯醛 上海曹杨第二中学化工厂生产，产品批 号 19949391，应用时以蒸馏水稀释至 10%浓度。 1． 3 实验仪器 (1)常规手术器械;(2)RM6240 － BD 多道生理信号采 集处理系统:成都仪器厂生产; (3)标配心电图导联电极; (4)恒速离心机:上海手术器械厂生产;(5)旋涡振荡器:xw － 80A，编号 08，上海医科大学仪器厂生产;(6)佳能数码相 机;(7)恒温振荡器:57590 型，常州国华电器有限公司生 产;(8)微量移液器:上海求精生化试剂仪器有限公司生 产;(9)7230 分光光度计:上海分析仪器厂生产; (10)MDA 试剂盒:南京建成工程研究所生产，产品批号:20070514; (11)image － pro plus 图像分析软件:media cybernetics 公 司。 2 方 法 2． 1 动物分组 将 Wistar大鼠 32 只，随机分为 4 组，每组 8 只。分别 为模型组(平右心耳结扎大鼠的左冠状动脉前降支) ，阳性 药对照组(盐酸地尔硫卓 16mg /kg) ，豨莶草提取液组和假 手术组(在冠状动脉前降支处仅用针穿线，不结扎)。其中 前 3 组需手术制作模型，合称手术组，最后一组为假手术 组。 2． 2 造模 2． 2． 1 手术组 ①用 10%水合氯醛进行腹腔注射麻醉， 麻醉满意后置于手术台，四肢及头部仰卧固定于手术台上， 四肢皮下连接心电图电极，记录标准Ⅱ导联心电图。 ②左前胸去毛，消毒铺巾，顺肋间隙方向于胸骨左旁第 3 ～ 4 肋间切开皮肤，长约 1cm，逐层分离皮下组织、肌肉， 于 2 ～ 3 肋骨间撑开进胸，向右上方推开胸腺，可暴露心脏 及大血管根部。 ③切开心包，轻挤大鼠胸廓，将心脏挤出，用左手中指 以中等力度顶心脏靠脊柱侧根部使左心耳根部下方暴露清 晰(有部分动物在左心耳下缘与肺动脉圆锥问可以看见左 冠脉前降支起始部) ，于肺动脉圆锥与左心耳之间、左心耳 根部下方 2 ～ 3cm 处，用 6 － 0 Prolene 线缝针迅速穿线，进 针深度控制在 0． 1cm，宽度为 0． 1 ～ 0． 2cm，结扎冠状动脉 左前降支［3］;回纳心脏入胸廓，收线打结。 ④使大鼠恢复自主呼吸，短暂观察后，彻底止血逐层关 胸。手术过程中记录标准Ⅱ导联心电图变化(无 ST段及 T 波改变者淘汰)［4］。 2． 2． 2 假手术组 仅在左心耳下缘与肺动脉圆锥间左冠 脉前降支位置取同样大小的针缝针而不打结，余操作与手 术组同。 上述 4 组均于右肋骨下缘正中 1cm 处开口，暴露十二 指肠，以备十二指肠给药。 2． 3 给药 各给药组均于给药前灌胃给予相应药物 1 周，实验当 日于结扎后 5min采用十二指肠注射方式给药，阳性药对照 组给予盐酸地尔硫卓，豨莶草提取液组给予豨莶草提取液， 假手术组及模型组给予等体积生理盐水，各组给药体积均 为 2mL /100g。 2． 4 观测指标 2． 4． 1 标准心电图监测 大鼠插肢体电极监测标准Ⅱ导 联心电图，监测冠脉结扎前、结扎即刻、结扎后 5、10、15、 30、45、60、90、120、180min共 11 个时间点的心电图，计算标 准心电图各时间点 ST段毫伏数。 2． 4． 2 大鼠血清 MDA含量检测 结扎 180min后，打开大 鼠腹腔，于腹主动脉取血;血液静置 20 ～ 30min 后，离心 (3000r /min，10min)取血清，按照试剂盒说明书的标准方法 测定血清中 MDA的含量。 2． 4． 3 心肌梗死面积的计算 大鼠于结扎 180min 后，腹 主动脉采血毕，打开胸腔，沿主动脉根部将心脏切下，生理 盐水冲洗干净后于 － 20℃冷冻 10 ～ 15min。取出后于心脏 结扎线下，平行冠状沟将心肌横切成 5 片，置于 NBT 磷酸 缓冲液(pH7． 4)溶液中，染色 10min。存活正常心肌被染成 暗红色。数码相机拍照后经图像分析软件分析梗死区面 积，计算梗死区面积与心肌切片总面积的比值。 2． 5 统计学处理 统计数据用均数 ±标准差(珋x ± s)表示，多个样本均数 3452 第 30 卷 第 11 期 2 0 1 2年 1 1 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 11 Nov． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 2544 学 刊 的比较用单因素方差分析(one － way ANOYA) ，采用 SPSS for Windows 10． 0 软件进行实验数据处理。 3 结 果 3． 1 豨莶草提取液对心肌缺血大鼠心电图∑ST段的影响 表 1 豨莶草提取液对大鼠心电图的影响(mV，n = 6，珋x ± s) 组别 剂量 结扎前 结扎即刻 结扎 5min 结扎 10min 结扎 15min 结扎 30min 结扎 45min 结扎 60min 结扎 90min 结扎 120min 结扎 180min 假手术组 － 0． 37 ± 0． 19 0． 36 ± 0． 23 0． 38 ± 0． 08 0． 33 ± 0． 09 0． 30 ± 0． 08 0． 27 ± 0． 06 0． 29 ± 0． 13 0． 27 ± 0． 13 0． 19 ± 0． 06 0． 18 ± 0． 06 0． 17 ± 0． 06 模型组 － 0． 41 ± 0． 19 0． 71 ± 0． 28 0． 72 ± 0． 24＊＊ 0． 69 ± 0． 16＊＊ 0． 76 ± 0． 28＊＊ 0． 72 ± 0． 14＊＊ 0． 74 ± 0． 14＊＊ 0． 72 ± 0． 15＊＊ 0． 59 ± 0． 34＊＊ 0． 56 ± 0． 31＊＊ 0． 53 ± 0． 33＊＊ 地尔硫卓组 16mg /kg 0． 32 ± 0． 23 0． 43 ± 0． 13 0． 46 ± 0． 06△△ 0． 35 ± 0． 15△△ 0． 32 ± 0． 13△△ 0． 39 ± 0． 12△△ 0． 45 ± 0． 12△△ 0． 42 ± 0． 11△△ 0． 34 ± 0． 11△△ 0． 32 ± 0． 02△△ 0． 34 ± 0． 02△△ 豨莶草组 7g生药 / kg 0． 29 ± 0． 03 0． 57 ± 0． 13 0． 57 ± 0． 06△ 0． 55 ± 0． 07△△ 0． 50 ± 0． 15△△ 0． 51 ± 0． 26△△ 0． 54 ± 0． 07△△ 0． 48 ± 0． 03△△ 0． 45 ± 0． 03 0． 46 ± 0． 06 0． 41 ± 0． 13 注:与假手术组相比* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组相比△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01。 由表 1 可见，模型组大鼠心电图出现明显波形改变，ST 段异常抬高，心肌缺血程度持续加重;地尔硫卓对照组与同 一时间点的模型组比较 ST 段分别有不同程度下降(P ＜ 0. 01) ，且能持续 3h，表明其有减小心肌缺血程度的作用; 豨莶草提取液组也有一定的作用趋势，且从结扎 5min开始 至结扎 60min(P ＜ 0． 01) ，具有显著性差异。 3． 2 豨莶草提取液对心肌缺血梗死范围的影响 表 2 豨莶草提取液对大鼠心肌梗死 范围的影响(n = 6，珋x ± s) 组别 剂量 梗死范围(%) 假手术组 － 0． 00 ± 0． 00 模型组 － 35． 15 ± 3． 22 地尔硫卓组 16mg /kg 15． 54 ± 5． 51＊＊ 豨莶草组 7g生药 /kg 27． 12 ± 7． 71 注:与假手术组相比* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。 由表 2 可见，模型组大鼠出现明显心肌缺血梗死;地尔 硫卓对照组可使心肌梗死范围明显减少(P ＜ 0． 01) ，而豨 莶草提取液组与模型组相比未见统计学差异。 3． 3 豨莶草提取液对心肌缺血大鼠血清 MDA含量的影响 表 3 豨莶草提取液对大鼠血清中 MDA 含量的影响(n = 6，珋x ± s) 组别 MDA(nmol /mL) 假手术组 3． 0561 ± 0． 42353 模型组 5． 3462 ± 1． 07586△ 地尔硫卓组 3． 4152 ± 1． 05713* 豨莶草组 3． 8463 ± 0． 40688* 注:与假手术组相比，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0. 01;与模型组相 比△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01。 由表 3 可见，与假手术组比较，模型组大鼠血清中 MDA含量明显升高(P ＜ 0． 05)。地尔硫卓对照组与模型 组相比，MDA含量降低(P ＜ 0． 05)。豨莶草提取液组与模 型组相比，MDA水平降低亦有所降低(P ＜ 0． 05)。 4 讨论与结论 4． 1 讨论 心肌缺血造成心肌细胞数目减少、心肌收缩力下降，其 动物模型主要用于心肌缺血后的病理生理变化、新的治疗 方法的实验研究［5］。制作实验性急性心肌缺血动物模型 的方法有多种［6］，如冠状动脉注射药物法、经皮冠状动脉 内铜圈栓塞法、微电流刺激冠脉内膜法、局部注射福尔马林 溶液等 。其中较为公认的方法即为本文所采用的结扎大 鼠冠状动脉左前降支模型，该方法可造成大鼠心肌缺血及 心肌梗死模型。冠状动脉结扎法其优点为:能人为地仿造 临床心肌梗死过程的冠状动脉梗死，其梗死部位、分布范围 相对一致，病理生理、生化改变与临床心肌梗死相似;且梗 死发生快，缺血的范围大致固定，并可进行心电图 ST 段标 测、组织染色检查和血清酶学等综合指标测定，来确定心肌 缺血范围和损伤程度。但该方法受多种因素的影响:心梗 区面积不易控制，位置常变化，动物模型之间的变异大，心 功能检测易出现多变性，且该法操作难度大，创伤大，动物 存活率不高［7］。 因此模型制作对于操作者的手法要求较高，在实验中 有较多需要注意的关键性操作步骤:①胸腔打开后必须快 速闭合。开胸时间超过 10s 或更长，动物的存活率会有所 降低。②结扎部位的高低可造成面积大小不等的心肌梗 死，因此应保证精确的操作步骤，并力争在同一高度确切结 扎。③大鼠左冠状动脉主干短，自左冠状窦发出后立刻分 为回旋支与左前降支，大部分动物的左前降支肉眼无法辨 认。因此在模型制作的过程中，应以左心耳的下缘为标记， 平左心耳的前下角进针，向右缝 0． 1 ～ 0． 2cm 以跨越前室 间沟缝扎前降支，进针深度 0． 1cm 就已经足够，且不易形 成心脏的穿透性损伤。④为保证手术操作的精确度，必须 有良好的手术视野，自第 2 ～ 3 肋间与身体纵轴线成 45 度 角撑开，向上方推开胸腺后，可满意显示左心耳与肺动脉圆 锥，挤出心脏后可方便地在左心耳与肺动脉圆锥间缝针。 ⑤如果心脏出血，不应盲目钳夹，以防造成更大的损伤，此 时可以干纱布压迫出血点，如压迫准确，力度适当，大多数 情况下可以止血。⑥缝针的要点是动作准确，力争一次成 功，如结扎不成功，再次或多次结扎均易加重心肌损伤，导 致心律失常或失血过多，造成动物死亡，且可能会影响模型 的稳定性，导致实验结果的偏差。 大鼠心电图 S 段极短，几乎与 T 波融合，本实验以 ST 段抬高作为评价心肌缺血损伤的指标［8］。心肌梗死时，心 肌中氧张力降低或无氧代谢加强，出现了电位差，即可出现 ST段抬高现象。本实验通过观察各组大鼠冠脉结扎前后 及给药后不同时间点心电图 ST段变化，发现冠脉结扎后大 鼠心电图 ST段立即抬高。而豨莶草提取液的 ST段抬高程 度与模型组相比仅表现出一定的降低趋势，心肌缺血面积 有减小的趋势，但均不构成统计学差异。这可能与实验动 物例数较少，或药物剂量设置较低，缺乏量效关系评价的依 据等因素有关。 本实验采用 NBT染色法［9］测量心肌梗塞范围，大鼠心 肌经过 NBT组织化学染色法染色后，梗死区因乳酸脱氢酶 活性消失而不着色，非梗死区被 NBT染为深红色。模型组 大鼠出现明显心肌梗死;阳性药地尔硫卓对照组和豨莶草 提取液组可使梗死区面积明显缩小。上述结果表明，豨莶 草提取液可缩小冠脉结扎所致的大鼠心肌梗死范围，维持 4452 收稿日期:2011 － 06 － 17 基金项目:牡丹江医学院科研项目(2010 － 31) 作者简介:石秀梅(1964 － ) ，女，黑龙江牡丹江人，教授，硕士，研 究方向:中草药中生物活性成分的化学研究。 时间较长，对冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血损伤具有一定 的保护作用。 近年来心肌缺血损伤机制的研究发现大量氧自由基生 成及脂质过氧化反应是心肌缺血损伤的主要机制之一［10］。 氧自由基不但通过生物膜中 PUFA 的过氧化引起细胞损 伤，而且还能通过脂质过氧化物的分解产物引起细胞损伤。 MDA是脂质过氧化的中间代谢产物。因而测试 MDA的量 常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞 受损的程度。具有减少 MDA 生成的药物都有助于减轻心 肌超微结构的损伤，从而减轻心肌缺血。与模型组相比，阳 性药地尔硫卓对照组和豨莶草提取液组血清中 MDA 含量 降低，说明豨莶草提取液对冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血 的损伤有一定保护作用。 4． 2 结论 本实验研究结果显示，豨莶草提取液可使结扎冠状动 脉左前降支造成急性心肌缺血的大鼠心电图 ST 段抬高幅 度呈现下降的趋势，并使其心肌梗死面积呈现减小的趋势， 且可使血清中 MDA含量降低。提示豨莶草提取液对大鼠 急性心肌缺血有一定保护作用，但尚需要进行更为深入的 实验研究。 参考文献 ［1］ 肖文良，张红，王士昌．目前对缺血性心肌病的认识［J］．河北 医学院学报，1995，16(6) :378 － 380． ［2］ 高学敏．中药学［M］． 2 版． 北京:中国中医药出版社，2004: 219 － 220． ［3］ 周文武，林玲，陈军，等．冠脉结扎法制做大鼠心肌缺血模型 ［J］．中国实验动物学报，2004，12(4) :226 － 230． ［4］ 李贻奎，宁可永，梁嵘，等．大鼠冠状动脉结扎心肌缺血模型 方法的改进［J］．中国新药杂志，2005，14(4) :427 － 428． ［5］ 周文武，林玲，陈军，等．冠脉结扎法制做大鼠心肌缺血模型 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Different Parts of Humulus SHI Xiu-mei，LIU Xuan，LIU Jia-wei (Department of Pharmacy，Mudanjiang Medical University，Mudanjiang 157011，Heilongjiang，China) Abstract:Objective:The content of the total flavones of different parts of Humulus was determined． Methods:With the rutin as the reference substance，the total flavones was extracted by Ultrasonic extraction． It was a good condition that the concentrations of NaNO2，AlCl3 and NaOH were 5%，10% and 4% respectively． And the UV － Vis spectrophotometry was used in the determination of the concentration of the total flavones of different parts of Humulus． Result:The concen- tration of the flavones in Humulus was detected when the wavelength was 510nm． The rutin concentration within the scope of 0． 024 ～ 0． 064mg /mL had a good linear relation． The regression equations:y = 0． 0817x － 0． 0018(R2 = 0． 9995)． The stability was good within 1 hour(RSD = 0. 364%)． The degree of the precision was good(RSD = 0. 600%)． And the re- covery rate was 99． 46%(RSD = 1． 685%)． Conclusion:The concentration of the total flavones of the corona of Humulus 5452