植物染色体的Giemsa分带

植物染色体的Giemsa分带 (武汉生物学院 园本一班 实验组：熊冰峰 陈家定） 摘要:Giemsa 分带是通过改变分带前的处理程序可产生的带型较荧光带丰富。显示C带主要方法：BSG法和HSG法。BSG法：染色体经比较温和的Ba(OH)2变性处理后，DNA双链解开；再在盐溶液中温育复性。复性时异染色体较常染色体快，可以优先与Giemsa结合，染色较深，而常染色体则着色较浅，从而在整条染色体上形成深浅不一的条文。HSG法：染色体经比较温和的HCl处理使得DNA变性，其余复性、染色等步骤同BSG法。N带的方法：以高温的NaH2PO4处理染色体，再用Giemsa染色即可。 关键词: 1.实验材料与方法[4] 1.1实验材料 小麦或大麦染色标本若干片。 1.1.1试剂 染色缸； Sorenson磷酸缓冲液，Giemsa染液； 5%Ba(OH)2,0.1mol/LHCl,0.2mol/LHCl; 2×SSC液：0.3mol/L氯化钠，0.03mol/L柠檬酸钠。 1mol/LNaH2PO4溶液。 1.1.2仪器 普通光学显微镜；恒温水域锅 1.1.3生物材料 无 1.2试验方法 去低渗法制备的标本，在分带处理前，先要在60℃0.1mol/LHCl(可用染色缸装载）中浸泡5min,再用蒸馏水彻底冲洗。注意:染色缸要在水浴中放置一段时间，以确保达到60℃。 1.2.1 BSG法显示C带 变性：染色体标本 5%Ba(OH)2染色缸中 静置15~20min 在水龙头下 将Ba(OH)2溶液全部冲洗干净（用逐步置换法） 换人蒸馏水 每隔4~5min换水一次，重复3次左右。 复性:取出制片 干燥后 放入60℃2×SSC溶液 保温30~40min 用蒸馏水换洗几次 染色：用1:10的Giemsa染液 染色10min 蒸馏水漂洗 空气干燥后即可观察 1.2.2 HSG法显示C带 变性：染色体标本 HCl溶液染色缸中 静置15~20min 在水龙头下 将Ba(OH)2溶液全部冲洗干净（用逐步置换法） 换人蒸馏水 每隔4~5min换水一次，重复3次左右。 复性:取出制片 干燥后 放入0.2mol/L HCl 溶液 室温处理60min 用蒸馏水换洗几次 染色：用1:10的Giemsa染液 染色10min 蒸馏水漂洗 空气干燥后即可观察 1.2.3 N带 染色体标本 置94 1℃ 1mol/LNaH2PO4溶液 保温8~10min 蒸馏水冲洗 再用20:1染液染色（30min) 经自来水冲洗，空气干燥后即可观察 结果与 大麦染色体的C带与N带（引自李学等，1996） C带在植物染色体的两条臂、着丝粒及其附近均可显现。 1.着丝拉带 2.中间带 3.末端带 4.核仁溢痕带 观察分带结果，并比较。 讨论 染色体制片实验中，秋水仙素预处理作用是什么？ 抑制纺锤丝的形成，收集更多中期分裂相；同时使染色体缩短伸直，在细胞内更分散。 染色体显带方法有哪些？ BSG法显示C带 HSG法显示C带 N带 _1234567890.unknown