海藻玉壶汤加减方及方中相关药物碘含量的测定_余跃

收稿日期:2012 － 03 － 10 基金项目:浙江省自然科学基金资助项目(Y2110967) 作者简介:余跃(1987 －)，女，浙江慈溪人，硕士研究生，研究方向: 中药新药及中药质量研究。 通讯作者:宋霄宏(1954 －)，女，山东泰安人，研究员，研究方向:中 药新药及中药质量标准研究。 5 pH对山楂叶总黄酮溶液稳定性的影响 (n = 3) PBS pH值 10h后药物溶液中总黄酮含量(%) 0． 5(mg /mL) 0． 2(mg /mL) 0． 1(mg /mL) 5． 0 92． 33 ± 0． 43 83． 07 ± 0． 16 60． 44 ± 0． 27 6． 5 87． 26 ± 0． 62 90． 07 ± 0． 25 92． 51 ± 0． 64 7． 0 82． 16 ± 0． 58 90． 38 ± 0． 66 91． 82 ± 0． 55 7． 4 90． 33 ± 0． 19 82． 82 ± 0． 39 74． 62 ± 0． 28 9． 0 62． 24 ± 0． 24 60． 21 ± 0． 34 60． 69 ± 0． 32 药物在体内的吸收、分布、转运与药物的油水分配系数 有关［4］。药物的油 /水分配系数与药物在生物膜中的分配 有关，在一定范围内的增大，油水分配系数较大者，有利于 跨膜转运，从而使进入体内的药物量增加，生物利用度提 高。本文研究表明，山楂叶总黄酮在 pH6． 0 时油水分配系 数最大，而随 pH进一步增加而下降，这也可能与其碱性条 件下溶解度较大有关。 山楂叶总黄酮原料的溶液稳定性研究结果表明，溶解 介质种类、温度等对其稳定性均有不同程度影响，尤其在较 高 pH(pH9． 0)条件下，稳定性较差;由此提示在研制其液 体剂型时，要注意介质 pH条件。 参考文献 ［1］ 罗玉梅，王贺振．山楂的化学成分及药理研究进展［J］． 时珍 国医国药，2004，15(1):53 － 54． ［2］ 张文莉，高敏，石森林．分光光度法测定山楂叶提取物中总黄 酮的含量［J］．中华中医药学刊，2011，29(5):1148 － 1151． ［3］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:1 部［S］．北京:中国 医药科技出版社，2010:1023 － 1024． ［4］ Dressman J B，LennernasH． Oral Drug Absorption:Predictio- nand Assessment［M］． New York:Marcel Dekker，INC，2000: 51 － 72． 第 30 卷 第 8 期 2 0 1 2 年 8 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 8 Aug． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 1768 学 刊 海藻玉壶汤加减方及方中相关药物碘含量的测定 余跃，田港，宋霄宏 (浙江中医药大学 药学院，浙江 杭州 310053) 摘 要:目的:研究海藻玉壶汤加减方及方中相关药物碘含量的测定及碘在复方药物提取中的变化情况。方 法:在弱酸性条件下，采用重铬酸钾氧化 I －为 I2，氯仿定量萃取比色，测定波长为 510nm。结果:总碘含量(按一 个处方药物配伍比例计算)的高低依次为海藻药材 ＞海藻药材提取液 ＞海藻玉壶汤加减方及不同药物组合提取 液 ＞海藻醇处理上清液 ＞海藻玉壶汤加减方中相关药材及其提取液。结论:海藻玉壶汤加减方及方中相关药物 碘含量的测定结果可为制剂工艺的优选、药效研究及甲状腺疾病分型治疗提供参考依据。 关键词:海藻玉壶汤加减方;相关药物;碘含量测定;氧化萃取比色法 中图分类号:R927． 2 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)08 － 1768 － 03 Detection of Iodine in Modified Haizao Yuhu Decoction and Related Drugs within It YU Yue，TIAN Gang，SONG Xiao-hong (College of Pharmacy，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China) Abstract:Objective:To study the iodine in different Chinese herbs of modified Haizao Yuhu Decoction and its quanti- ty change under the compound extraction． Methods:Iodine was oxidated to I2 by using heavy chromium acid potassium in the weak acidic solution，then it was extracted quantitatively by chloroform and detected with UV － Vis spectrophotometry under 510nm． Results:The rank of total iodine which was calculated by one prescription proportion was Sargassum，the ex- traction of Sargassum，the compound extraction of modified Haizao Yuhu Decoction and different related Chinese herbs，the upper liquid of the extraction of Sargassum after adding ethanol and other related Chinese herbs and its extraction in modi- fied Haizao Yuhu Decoction except Sargassum． Conclusion:The detection of iodine in modified Haizao Yuhu Decoction and related drugs within it could provide a reference basis for optimization of preparation process，efficacy research and the treatment of thyroid disease in different types． Key words:modified Haizao Yuhu Decoction;related drugs;detection of iodine;oxidation extraction colorimetric method 8671 第 30 卷 第 8 期 2 0 1 2 年 8 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 8 Aug． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 1769 学 刊 甲状腺疾病属中医“瘿病”范畴。中医应用富碘中药 复方治疗“瘿病”历史悠久且疗效显著。明代医家陈实功 《外科正宗》中记载的海藻玉壶汤为治疗诸“瘿病”的代表 方剂，其君药海藻因富含碘在临床上具有“软坚散结”之功 效，是治疗“瘿病”的要药之一。但随着现代医学对甲状腺 疾病与碘化物关系的深入研究，其在治疗某些甲状腺疾病 (如甲状腺机能亢进等症)的过程中，这一传统用药逐渐遭 到质疑。加之全国普及碘化食盐，碘过量摄入所引发的相 关甲状腺疾病［1］，如导致甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲 状腺炎、原发性甲状腺功能减退症等引起人们及政府职能 部门的广泛关注。富碘中药及其复方是否仍可用于甲状腺 疾病的治疗，富碘中药与碘化物作用的相关性，海藻玉壶汤 加减方在提取过程中，富碘药物是否与其他药物发生化学 反应，使碘含量增加或减少等尚未见相关报道。鉴于此，本 实验对海藻玉壶汤加减方及方中相关药物碘含量及富碘中 药复方在提取过程中碘含量的变化等加以探讨，其研究结 果以期可为制备工艺筛选、药效研究及临床正确选用富碘 中药复方制剂治疗甲状腺疾病提供相关的参考依据。 1 材料与仪器 1． 1 实验药材 海藻:马 尾 藻 科 植 物 海 蒿 子 Sargassum pallidum (Turn．)C． Ag． 或羊栖菜 Sargassum fusiforme(Harv．)Setch． 的干燥藻体，产地浙江，批号:20090404;川芎:伞形科植物 川芎 Ligusticum chuanxiong Hort． 的干燥根茎，产地四川，批 号:20110420;法半夏:半夏的炮制加工品，产地四川，批号: 20110420;夏枯草:唇形科植物夏枯草 Prunella vulgaris L．的 干燥果穗，产地安徽，批号:20110213，以上四味药材均购于 安徽亳州市凯利中药饮片有限公司，符合 2010 版《中华人 民共和国药典》项下规定，并经浙江中医药大学资源鉴定 教研室陈孔荣副教授鉴定为正品。 1． 2 实验试剂 浓硫 酸，AR．:衢 州 巨 化 试 剂 有 限 公 司，批 号: 20071201;重铬酸钾，AR．:国药集团化学试剂有限公司，批 号:T20050216;碘化钾，AR．:汕头市西陇化工厂有限公司， 批号:20080119;三氯甲烷，AR．:衢州巨化试剂有限公司， 批号:20110101，水为纯化水。 1． 3 实验仪器 分析天平 XS 105DU(德国梅特勒公司);电子天平(上 海民桥精密科学仪器有限公司);HH － S型水浴锅(巩义市 予华仪器有限责任公司);旋转蒸发器 RE － 5205(上海亚 荣生化仪器厂);H101 － 2A 数显电热鼓风干燥箱(南通沪 南科学仪器有限公司);高温箱形电炉 SX2 － 2． 5 － 10，电阻 炉温度控制器 KSW －4D － 11(上海博迅实业有限公司医疗 设备厂);紫外可见分光光度仪 － 2550(SHIMADZU COR- PORATION)。 2 方法与结果 2． 1 碘含量测定的方法学考察 2． 1． 1 灰化条件的确定 参考《中华人民共和国药典》及 相关文献［2 － 4］，灰化条件为取一定量药材或浸膏，置坩埚 中，缓缓加热炽灼，温度每上升 100℃维持 10min，升温至 400 ～ 500℃时维持 40min，取出，放冷。炽灼残渣置烧杯 中，加水 100mL，煮沸约 5min，滤过，残渣用水重复处理 2 次，每次 100mL，滤过，合并滤液，残渣再用热水洗涤 3 次， 洗液与滤液合并，加热浓缩至一定量，放冷，定容。 2． 1． 2 氧化显色条件的确定［5］ 氧化显色条件为取各溶 液总体积为 40mL，分别加浓硫酸 0． 5mL 和 0． 2mol·L －1 K2Cr2O710． 0mL，摇匀，放置 30min，然后加入氯仿 10． 0mL， 振摇萃取，分取氯仿层。 2． 1． 3 检测波长的确定 分别将对照品溶液和供试品溶 液在紫外可见分光光度仪—2550 于 400 ～ 700nm波长范围 内扫描，对照品溶液和供试品溶液的最大吸收波长分别为 λ1 = 512． 4nm、λ2 = 509． 4nm，结合参考文献 ［5］，510nm 为检 测波长。 2． 1． 4 对照品溶液的制备和标准曲线的绘制 精密称取 碘化钾 6． 53mg，用纯化水定容至 100mL量瓶中，摇匀，得浓 度为 0． 0653mg·mL －1的碘化钾储备液，相当于每 mL含碘 0． 05mg。分别移取碘化钾储备液 0． 5mL，1． 0mL，2． 0mL， 4. 0mL，8． 0mL，16． 0mL于 125mL分液漏斗中，加入10mol· L －1KOH 溶液 1． 0mL，再加入纯化水使总体积为 40mL，按 “2． 1． 2 氧化显色条件的确定”项下操作，于 510nm 处以试 剂作空白调零，测定各管吸光度值，以吸光度 A 对浓度 C (mg)做线性回归，得标准曲线方程:Y =0． 6353X － 0. 0098， r = 1． 0000。结果表明碘含量在 0． 025 ～ 0． 800mg范围内线 性关系良好。 2． 1． 5 供试品溶液的制备 移取海藻提取液 10mL(相当 于原生药材 10g)，于 105℃烘箱中干燥 3h，得干浸膏，按 “2． 1． 1 灰化条件的确定”项下操作，经灰化处理后，定容至 100mL量瓶中，移取 10mL，稀释至 40mL，按“2． 1． 2 氧化显 色条件的确定”项下操作，即得供试品溶液。 2． 1． 6 精密度试验 同一浓度的对照品溶液氧化显色后， 连续 6次测定其吸光度值，RSD为 0. 45%(n = 6)，表明该仪 器精密度良好。 2． 1． 7 稳定性试验 同一供试品溶液，经氧化显色后，分 别于 0、30、60、90、120、150min 测定吸光度值，RSD 为 0． 78%(n = 6)，表明该测定方法在 150min内稳定性良好。 2． 1． 8 重复性试验 同一批海藻提取液，平行 6 份，各移 取 10mL，按“2． 1． 5 供试品溶液的制备”项下制备供试品溶 液，测定吸光度值，并计算海藻提取液中的碘含量。结果海 藻提取液中碘平均含量为 0． 296mg·g －1，RSD为 2． 56%(n = 6)，表明该测定方法的重复性良好。 2． 1． 9 加样回收试验 移取 6 份已知含量(经灰化处理) 的海藻提取液 10mL 于分液漏斗中，加碘化钾 0． 32mg， 10mol·L －1KOH 溶液 1． 0mL，加纯化水使总体积为 40mL， 按“2． 1． 2 氧化显色条件的确定”项下操作，测定吸光度值 并计算加样回收率。平均回收率为 97． 34%，RSD 值为 1. 65%(n = 6)，表明回收率高，方法可行。 2． 2 海藻玉壶汤加减方及方中相关药物碘含量的测定 2． 2． 1 提取条件 海藻玉壶汤加减方及方中相关药物的 9671 第 30 卷 第 8 期 2 0 1 2 年 8 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 8 Aug． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 1770 学 刊 提取条件均为提取 2 次，第 1 次加水 12 倍量，提取 1． 5h，第 2 次加水 10 倍量，提取 1． 5h。 2． 2． 2 海藻、夏枯草、半夏药材与海藻药材提取液中碘含 量的考察 称取海藻 10g，经灰化处理后，定容至 100mL量 瓶中，移取 10mL，稀释至 40mL，经显色处理后测定吸光度 值并计算含量;移取海藻提取液 10mL(相当于原生药材 10g)，于 105℃烘箱中干燥 3h，得干浸膏，经灰化处理后，定 容至 100mL量瓶中，移取 10mL，稀释至 40mL，经显色处理 后测定吸光度值并计算含量;称取夏枯草，半夏各 15g，分 别经灰化和显色处理后，测定吸光度值并计算碘含量。结 果海藻和海藻提取液碘含量分别为 0． 47mg· g －1、 0． 29mg·g －1，而夏枯草、半夏均检测不到碘(吸光度值均 为 0)。 2． 2． 3 海藻玉壶汤加减方及不同药物组合提取液中碘含 量的考察 ①海藻、川芎、半夏、夏枯草按处方比例经提取 后，移取 20mL(相当于原生药材 10． 8g);②海藻、半夏、夏 枯草按处方比例经提取后，移取 50mL(相当于原生药材 42g);③按处方比例称取的海藻、半夏和海藻、夏枯草，经提 取后，分别移取 20mL(相当于原生药材 21． 6g 和 24g);④ 半夏、夏枯草按处方比例经提取后，移取 40mL(相当于原生 药材 21． 6g)，将上述各提取药液于 105℃烘箱中干燥 3h，得 干浸膏，经灰化处理后，定容至 100mL 量瓶中，分别移取 40mL、10mL、10mL、10mL、40mL，并稀释至 40mL，经显色处 理后测定吸光度值并计算含量。结果总碘含量依次为(按 一个处方药物比例计算)3． 75mg、3． 92mg、4． 06mg、4． 14mg， 而半夏、夏枯草提取液中检测不到碘。实验结果所示:海藻 玉壶汤加减方经提取，其总碘含量呈下降趋势。 2． 2． 4 海藻醇处理工艺碘含量的考察 海藻提取液移取 24mL(相当于原生药材 12g)，在充分搅拌的情况下，加入 95%乙醇使含醇量达 70%，置冰箱中静置 24h，4000r·min －1 离心 10min，得上清液和沉淀两部分。上清液和沉淀部分经 挥去乙醇后，于 105℃烘箱中干燥 3h，得干浸膏，经灰化和显 色处理后测定吸光度值并计算碘含量，结果上清液和沉淀 (海藻粗多糖)碘含量分别为 0． 24mg·g －1、0. 01mg·g －1。 据实验结果所示:海藻提取液经醇处理，碘主要富集于上清 液，沉淀部分主要为海藻粗多糖等，碘含量甚少。 3 分析及讨论 含碘中药自古以来都是中医治疗“瘿病”的要药。 晋·葛洪《肘后方》中首次提出用海藻、昆布治疗“瘿病”。 唐·孙思邈的《千金要方·瘿瘤》和《千金翼方·瘿瘤》共 收载 19 首治瘿方，皆用到海藻、昆布。《外台秘要》收载 35 首治瘿方，其中 27 首有海藻、昆布［6］。明·陈实功《外科 正宗》中记载的“海藻玉壶汤”最为著名，是碘含量非常丰 富的中药复方，具有软坚散结消瘿作用，至今仍为临床应用 频率较高治疗“瘿病”的基础方。据现代药理研究表明该 方还含有海藻多糖等物质，具有免疫调节活性、抗氧化、抗 肿瘤等功效，且能起到扶正固本的作用［7］。 随着对甲状腺疾病生理、病理研究的不断深入，人们对 碘与甲状腺疾病的关系有了清晰的认识。碘是人体的必需 微量元素之一，碘摄入量过低或过高都会导致甲状腺疾病 发生［8］。碘缺乏可引起单纯性甲状腺肿、甲状腺结节、甲 状腺肿瘤;而碘过多摄入则可能导致甲状腺功能亢进、淋巴 细胞性甲状腺炎、原发性甲状腺功能减退症等。因此，在临 床实践中逐渐突破了习用含碘中药的传统［9，10］。应用含碘 中药复方制剂是否跟单纯碘过量一样会引发甲状腺疾病; 针对不同的甲状腺疾病，合理选择含碘中药复方制剂，以提 高疗效、降低不良反应，现已成为研究的“热点”。 据本研究结果所示:总碘含量(按一个处方药物比例 计算)的高低依次为海藻药材 ＞海藻药材提取液 ＞海藻玉 壶汤加减方及不同组合提取液 ＞海藻醇处理上清液 ＞海藻 玉壶汤加减方中相关药材及其提取液。提示:海藻药材和 海藻玉壶汤加减方中碘含量变化情况是依据药味数，并随 着提取次数及提取时间的增加，其碘含量逐渐减少。究其 原因:其一是，在复方中各药物之间相互作用、相互反应，既 有协同，也有拮抗。其二由于碘不稳定，随着提取次数、提 取时间的增加或延长可能使药材中碘有所损失［5］。但在 本实验中，夏枯草、半夏药材中均检测不到碘，这与文献报 道不完全一致［11］。海藻提取液经醇处理，碘主要富集于上 清液，沉淀部分主要为海藻粗多糖等醇不溶性物质，碘含量 甚少。 海藻玉壶汤加减方为富碘中药复方制剂，是否仍可用 于碘过量所致甲状腺疾病的治疗，而采用以提取海藻多糖 为主的海藻玉壶汤加减方可否克服富碘中药复方制剂治疗 甲状腺疾病弊病从而提高疗效，还须进一步通过药效及临 床加以验证。本研究结果有望为制剂工艺的优选、药效研 究及对甲状腺疾病分型治疗提供参考依据。 参考文献 ［1］ 徐卫民，叶真．碘摄入量与甲状腺疾病的研究进展［J］． 浙江 预防医学，2009，21(12):65 － 67． ［2］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:1 部［S］．北京:中国 医药科技出版社，2010:195． ［3］ 张俊．萃取比色法测定昆布中碘的含量［J］． 药学实践杂志， 2003，21(6):337 － 339． ［4］ 王伯涛，郭立玮，刘训红．氧化萃取比色法测定昆布中碘的含 量［J］．中药材，2001，24(5):343 － 344． ［5］ 刘学湘，陈建伟．昆布中水溶性有效成分提取工艺研究［J］． 时珍国医国药，2001，12(1):20 － 22． ［6］ 梁苹茂，黄梦哲，刘倩，等． 瘿病原道说解［J］． 中华中医药杂 志，2011，26(9):1943 － 1946． ［7］ 谢苗，钟剑霞，甘纯玑．海藻多糖的药用功能与展望［J］．中国 药学杂志，2001，36(8):513 － 516． ［8］ 于志恒，胡宣扬，朱惠民，等．碘与甲状腺肿流行规律的调查 研究［J］．中国地方病学杂志，1987(6):331 － 332． ［9］ 陈继东，程健高．甲状腺机能亢进症从肝论治辨析［J］． 湖北 中医杂志，2007，29(2):18 － 20． ［10］ 方水林．甲状腺功能亢进辨治心法［J］．四川中医，2002，20 (3):15 － 16． ［11］ 王旭，尤爱琴，李伟，等．临床常用消瘿中药含碘量测定研究 ［J］．南京中医药大学学报，2007，23(6):387 － 388． 0771