2011年北京市儿童携带A组链球菌的M蛋白基因分型研究

生坐塑堕医生苤查垫!!生!!旦笠堑鲞錾!!翅￡!坚』旦型丛鱼：坠!堡巴!些垫!!：!!!：堑：丛!：!1 2011年北京市儿童携带A组链球菌的 M蛋白基因分型研究 李静刘爽彭晓曼扬鹏张代涛吴双胜梁慧洁崔淑娟段玮卢桂兰 王全意 【摘要】 目的了解2011年北京市儿童携带A组链球菌(GAS)的M蛋白基因(emm)各基因型 别分布情况。方法于2011年5—7月．从北京市36家医院儿科『J、急诊中选取猩红热和咽部感染 患者作为调查对象，共3315例。采集调查对象咽拭子标本，分离GAS菌株。应用PCR法扩增emm 基因，进行测序，确定GAS的emm基斟型别，并比较不同人群、不同疾病间的eY／h-ll基因型别的差异。 结果3315份咽拭子标本中，分离出633株GAS菌株，其中elnm基因阳性菌株共610株，故最终有 610倒患者纳入研究，其中，猩红热患者448例(73．4％)，咽部感染患者162例(26．6％)；城区397例 (651％)，郊区213例(34．9％)；1—5岁儿童240例(394％)，6～18岁儿童369例(606％)。共鉴 定出8种eml，l基因型(猩红热患者：6种，咽部感染患者：4种)和2】种emlll基因亚型(猩红热患者： 16种，咽部感染患者：10种)，包括3种新的cram亚型，分别是emml63、emml262和s61“20，其 中，emml．63在猩红热和咽部感染患者中均存在，而emml2．62和st5144．20仅见于咽部感染患者。 emml2基因型所占比例最高，为805％(491／610)．其次是emml，占180％(110／610)；基因亚型中， emml200所占比例最高，为69．0％(421／610)，其次是eraml．00f169％(103／610)1和emml219 [61％(37／610)]，均是猩红热和咽部感染患者的主要流行菌株。流行菌株的分布在分离地区和宿 主年龄上存在差异，郊区患者emml、emml．00和emml2．19构成比『分别为221％(47／213)、19．2％ (40／213)、8O％(17／213)j高于城区患者[分别为159％(63／397)、15．6％(62／397)、5o％(20／ 397)]，差异有统计学意义(P(o05)]。emml00在6—18岁年龄组构成比[192％(71／369)]高于 1—5岁年龄组[133％(32／240)]，差异有统计学意义(x2=845，P<005)。结论2011年北京市 儿童携带GAS的啪m基因型别中，主要流行的基因型是enanl2和emnll，主要流行的基因亚型是 emml200、emmI00和emml219，其分布在分离地区和宿主年龄上存在差异。 【关键词】链球菌，酿脓；猩红热；疫苗；earn基因 StudyOntypesofMproteingeneingroupAstreptococcusisolatedfromchildreninB蜘ing，2011 L／．1ing‘，UUShuang，PEmcXizw—rain，YANCPeng，ZHANGDai-too．WUShuang—sheng，LIANGttui- 皿，c叫Shu-juan，DUANWei，LUGui·lan，吼ⅣGQm”yi’SchoolofPublicHealthandFamily Medici聊．CapitalMedicafUniversity．Beijing100069．China Correspondingauthor：WANG0啪一一，Email：自如函M珊@126．corY‘ 【Abstract】ObjectiveToexplorethedistributioncharacteristicsofthetypesofMproteingene (elTlm)ingroupA streptococcus(GAS)isolatedfromchildreninBeijingintheyear2011． McthodsDuri．gMaytoJulyin2011atotalof3315patientswho愀-diagnosedscarletfeveror pharyngealinfectionbydoctorsinpediatricoutpatientandemergencyunitsof36hospitals．wereselected目 subieetsTheirthroatswabsamplesweTecollectedandiselatedthesixainsofGAS．Geneemmwasthen amplifiedandsequencedbyPCRmethed．andthedifferenceslntypesofgeneemm1mtweendifferent populationsanddiseaseswerecompared．ResultsAtotalof633strainsofGASwereisolatedfromthe3315 throatswabsamples．610strainsoutofwhich⋯genem⋯positiveartdmreemitedinthestudy．Out ofthe610recruitedstrains，448(73．4％)wereisolatedfromscarletfeverpatients，theother162(266％) DOI：10．3760／cm“】issn0253-9624．201212013 基金项目：科技部t二五重大专项(20t2ZXl0004215—003430)；北京市科技新星计划项目(20t1047) 作者单位：100069北京，首都医科大学公共卫生与家庭医学学院(李静)；北京市疾病预防控制中心传染病地方 病控制所(李静、刘樊、彭晓曼、杨鹏、张代涛、吴双胜、粱慧沽、崔淑娟、段玮、卢桂兰、王全意) 通信作者：王全意，E瑚il：bjedexm@126帅m 论著． 万方数据 生生题喳匡兰堑茎垫!!I：11旦望坐叠錾l!刿些!』!!!坠型-1’!!!!!!!!!l!：!!!．!生』i!』! we』tisolatcI】m㈣【，hap,ngealinfe‘一tin．patients：397(651％)Merefromurban，“1Pother213(349％) we／-pfrI)msuburb：240(394％)werefrompatientsagingbet、*eenl一5yearsold，【}Ieother369(606％)㈣frompatientsagin96一】8),earsoldAtotalof8typesofgeneelnlll(sere'letfeV⋯：6types，pharyngea] infelllon：4types)a．d21subt)pesofgeneenln(scarletfever：16subtypes，pharyngealinfection：10 suhIvI，rs)黼idelltiffrtI，rh⋯⋯wubtvpr㈣foundinthestudy，namingemml63，enlnil262and st514420Amongthememml63wasfountlbothinscarlet缸verandpharyngealjnfeetionpatients，while elnml2 62and‘6】4q20wereonlyfoundinpharyngealinketlonpatientsAmongallthetypesofgone’ emm．enlnll2aeeounle[Iforthehighestpercentagea‘805％(491／610)andthenfollov,el{hvChillil (180％(110／610))Amongallthesubtypes，thedominant‘ubtypewasemnll200，alceountingh 690％(421／610)，folh,ningbvrmm00(169％(103／610))andelHml219(6J％(37／610))．AI】 thealJ【)retypPHandsnl)p,11eRofgene㈣wPrPthenine[prexMontstrains㈣narielfevc7palienlsr"1．1 pharyngeallhi?etionpatientsSignificantdi隔renceslnthedistriImtionotprevalentstrainswereobserveri among,：aftflusdgingpatientsan(1regionsTheeonstihlenlratiosc汀p．mn]1．emml00andenlml219wrrP hl曲Prinpalienlsfmmsuhurb(emml：221昵(47／213)，⋯111100：192％(40／213)，emml219： 80％(17／213))thatlthoselnurbanareas(emml．159％(63／397)．t÷mllll00．156％(62／397)． emFlll219：50％(20／397))Tiledifferen(eshowellslatisti‘，aIsignificance(P<0．05)Theconsfituenl ratioofcnlnll009,-05higheramongpatientsaging6一l8Years¨J{l(192％(71／369))thanthoseaging 1—5yearsohi(133％(32／240))Thedi雎reneealsoshowerIstatisticalsignificance(X’：845，P< 0051 ConclusionAmongthetypesofgeneemminGAS1solatetlfromchildreninBeijing111year20lI． theIIinstprevalenttv．owPrrenlnll2andelnnll．antltilemostpre、alentI。Hlmsubtypeswereemml20()， elllllll00ail(iemml219 Asignifit，antdifferenceintheirdistributionIlet"e,eenvariousagingpatientsn刊 isolatedplaces('allbeohvicmsly“1un(1 【Keywords】Streploeoe(·iispyogenes；Scarletfever；Vaccines；Geneernm A组链球菌(groupAstreptococcus，GAS)叉称 酿脓链球菌．是引起儿童感染性疾病的重要致病菌。 近年来，全球GAS感染性疾病负担较严重。。“，已经 成为全球公共卫生问题一2011年北京市猩红热患 者明鼎增多，而不同型别的A组链球菌的致病性不 同，因此，了解GAS的型,Nx,J-于其流行病学的研究 具有重要意艾。M蛋白基因(encodingmatureM proleingene，emlll)编码M蛋白，其3’端高度保守， 而5’端高度变异，是GAS型别特异性的基础’，根 据这一特点可以把GAS分成不同的elnm基因犁， 基本原理是应用通／tj引物，通过PCR扩增及测序获 得emlla基因的5’端nf变区域，将序列上传至相关数 据库，进行elllm基冈序列的比较，确定emm基 因型及亚型4 该方法具有准确、快速的特点。因 此，笔者应tI=}jetllm基因分型技术对2011年北京市 儿童携带A组链球菌的流行菌株进行分析，了解北 京市GAS菌株流行情况。 对象与方法 1．对象：干2011年5—7月从北京市36家猩红 热病例较多的医院的儿科门诊、急诊中选取诊 断为咽部感染(包括链球菌感染、扁桃体炎、咽峡 炎)或猩红热的患者作为研究对象，其3315例。收 集患者人口学特征信息、主要临床表现、临床检查结 果和临床诊断结果一 2样本采集：经患者知情同意，应用北京市 CDC绕一提供的咽拭了，采集患者口N拭子标本，共 3315份。将采集的拭子直接浸入采样肉汤液巾， 24h内送至北京市CDC实验室。将咽拭子标本接 种于50ml／L脱纤维羊血的胰大豆蛋白胨血琼脂平 板上，于370c体积分数为5％的CO：恒温箱中孵 育24h。根据血平板的形态特征及其／3溶血环，应 用英国Oxoid公司生产的链球菌分群诊断试剂对 GAS的菌落进行鉴定。 3基因检测：应1L}j上海之江生物科技有限公司 提供的细菌DNA提取试剂，提取GAS的DNA。应 用PCR扩增emm的N末端片段，引物采用美国 CDC网站公布的erllm基因分型引物，上游序列： 5’一TATT(C／G)GCTTAGAAAATFAA一37，下游序列： 5’一GCAAG‘几℃7ITCAGC‘ITG'ITI’1--3‘。PCR反应条件： 95℃预变性5min：95甲变性20s，50℃退火45s， 72℃延伸90s，30个循环172qC延伸5min；产物 4。c恒温保存。将扩增产物进行纯化，应用测序引 物：5’-TAlTrcGcTTAGAAAATTAAAAAcAcG一3’进行 测序，最后将得到的核酸测序结果与美国CDC提供 的序列(http：／／”，wcdc．gov／ncidod／biotectCstrep／ strephiasthim)进行同源性比对，判断emlrll基因 分型， 4统计。学分析：用Epidata3 1软件建立数据 库，数据进行双录入。使用SPSS13．0进行统计分 析。采用x!检验和Fisher精确概率检验比较不同 人群、不同疾病间的emm基冈型别的差异，以 P(0．05为差异有统i{学意义 万方数据 尘茔塑陵墼芏苤盍垫11生l!旦苤堂堂筮!!型!!坐』!堡!丛旦：望!!!丝坚垫!!：!!!：堂，坠!! 结 果 1． ·般情况：3315份咽拭子标本中，分离出 633株GAS临床菌株，其中elllin基吲阳性菌株共 610株，故最终有610例患者纳入研究，其中，男性 382例(62．6％)，女性228侧(37．4％)；城区397例 (651％)，郊区213例(34．9％)；研究对象年龄中 位数是6岁，1～5岁儿童240例(39．4％)，6～18岁 儿童369例L606％)；猩红热患者“8例 (73．4％)，咽部感染患者162例(266％)，见表1。 表l不同特征研究对象患病情况 特}l}= 猩红热患者 (448例) 咽部感染患者 (162例) 性别 男 女 地区 城区 郊区 年龄(岁) 1～5 6～18 292(479) 90(i48 156(256) 72(118 270(443) 178f292) 202(3321 246f404) 127(20．8) 35(57) 38(62) 123(202) 382(626 228f374 397(651) 213(349) 240(394) 369(606) 合计448(734) 162(26．6) 610(100．0 注：括号外数值为患者数(例)，括号内数值为构成比(％) 2．emm基因型别分布：610株enlm基冈阳性 GAS菌株中，共鉴定出8种ell3m基因型和21种 elTim基围亚型。其中，猩红热患者中共鉴定出6种 emll3基闰型和16种emm亚型，咽部感染患者共鉴 定出4种e1]Ellll型和10种emm亚型。在emll，l亚型 中发现3种新的型刷，分别是emml．63、emml262 和st5144．20，其巾，ellainl．63在猩红热和咽部感染 患者中均存在，而emml2．62和st5144．20仅见于咽 部感染患者。在鉴定出的8种emm基因型中， emml2所占比例最高，占80．5％(491／610)，其次是 emm]，占18O％(1IO／610)。在emm基因亚型中， emml200占69．O％(421／610)，其次是emml．00， 占169％(103／610)．emml2．19占6．1％(37／ 610)，这3种型别共占总数的92．O％(561／610)，其 他emm亚型分布情况，见表2。在两种疾病中丰要 流行菌株相同，均是基因型ernml2[猩红热患者： 79．7％(357／448)；咽部感染患者：82．7％(134／ 162)]、emml[猩红热患者：19．2％(86／448)；咽部 感染患者：148％(24／162)]和基冈亚型cmml2．00 l猩红热患者：67．O％(300／448)；咽部感染患者： 74．7％(121／162)]、emml．00[猩红热患者：18．1％ (81／448)；咽部感染患者：13．6％(22／162)]、 emml2．19[猩红热患者：65％(29／448)；咽部感染 患者：4．9％(8／162)]。同时，流行菌株在这两种疾 病中的分布均较接近，差异无统计学意义(P> 0．05)。 表2 A组链球菌M蛋白基因各型别在不同患者中的 分布情况 基圊型 业型 猩红热皇者 嘤部感孳患者 合H (448例) (162例) ⋯ 300(67o) 1(02) 16(36) 2(04) 3(07) 29(65) 1(o2) 3(o7) o(o．o) 2(o4) 0(0．0、 8 l 0 81j 2) ．0) 9) l(02) 2(o4) 1(o2) 0(o0) I(02) 0(0．0) 21(747 0(0．o) o(00) 0(00) 2(12) 8(49) o(oo) o(oo) 2(12) 0(o0) l(O6、 22 0 l l 421【69o) l(02) 16(26) 2(03) 5(08) 37(61) l(o2) 3(o5) 2(o3) 2(o3) 1(O2、 136) 103 o0) 1 o6) 1 061 5 o(0o 0ro0 o(o0 3(19 o(0o 169) 02) 02) o8) !!!：!! !垫!!—— 合汁488(100．o)162(100o)610(1000) 注：括号外数值为患者数(例)，括号内数值为构成比(％) 3．emm基因型人群差异：本次研究中GAS流 行菌株基因型为emml2(491株)和emml(110株)， 基因亚型为emm]2．00(421株)、emml．00(103株) 和cmml2．19(37株)。上述流行菌株在不同人群中 的分布情况见表3。主要流行菌株的基因型和亚型 在男、女问的分布率均较接近，差异无统计学意义。 城区儿童中enmll2的构成比高于郊区儿童，而 emml的构成比低于郊区儿童，差异有统计学意义； ermnl．00和emml2．19在郊区儿童中的构成比均高 于城区儿童，而emml2．oo在城区儿童中的构成比 2 3 2 5 2 0 O 0 0 0 2 ， l 一 ∞∞加¨控伸舢∞鲫”缸 o，，， o ∞ ∞ ∞ ∞ 砌 ～ ㈣蝴枷Ⅶ挑瑚蚴蚴瑚瑚m 瑚岱m m 瑚 ㈤ 枷 ㈣ ㈣ ㈨焉=====：=掣舞篓{{ril蔗一 万方数据 生堡强蚯匡生赶盍2Q12生12且嚣堑鲞噩12塑￡bm』堕!丛型：坠§!￡虫b!12Q12：!Q!：堑，旦g上 表3不同特征患者M蛋白基因各型别分布情况比较 注：emm为M蛋白基因；括号外数值为构成比(％)，括号内数值分子代表各㈣基因型别患者散(例)，分母代表不同特征人群患者教(例 高于郊区儿童．差异具有统计学意义。不同年龄组 间，基因型emml2、emm|的构成情况较接近，差异 无统计学意义；基因韭型emml，∞在6～18岁年龄 组中的构成比较高，而emml2．00和emml2．19在 1～5岁组中构成比较高，差异有统计学意义。 讨 论 笔者研究发现，2011年北京市儿童携带GAS的 菌株型别中，优势菌型是emml2及其亚型 emml2．00，而2007年优势菌型为emml．00”。，这可 能与GAS的M蛋白特异性抗体有关6。另外，也 可能是GAS基因片段发生改变所致⋯。但是，导致 GAS优势菌型发生变化的具体原因，有待进一步 调查。 本次研究结果与我国其他地区调查结果存在差 异，如广州地区主要流行emml[sJ，而与全国调查结 果相似”1。与其他国家主要流行菌株问也存在差 异，如美国主要流行emml，芬兰主要流行 emm28om-t：’i。可见．不同地区GAS的流行菌株存在 差异，其原因可能与地理环境、人群生活习惯及免疫 水平差异有关。 有研究表明，同一国家不同地区，GAS流行菌 株型别可能不同‘“”。。本研究结果显示，北京市城 区和郊区闷GAS流行菌株的分布存在差异。原因 可能是城、郊之间儿童免疫水平不同，此外，也可能 与两个地区的地理环境、医疗水平相关。 笔者发现，emml2．I)0、emml2．19在1—5岁组 患者中的构成比高于6～18岁组。有研究表明， emml2的分布随年龄的增加呈下降趋势”“，说明低 年龄儿童更易携带基因型为emml2的GAS菌株。 出现这种情况的原因可能与机体感染GAS后产生 的特异性抗体保护其避免同型GAS再感染有关。 笔者还发现，从猩红热患者和咽部感染患者中 分离的GAS流行菌株均以emml2和emml为主，与 我国其他地区研究相似‘”，说明导致北京市儿童 患猩红热和咽部感染的GAS菌株流行情况与全国 流行情况基本相符。 疫苗是预防传染病流行的重要防护措施”⋯。 研究表明，美国研制的26价多肽疫苗在控制GAS 感染性疾病中发挥了作用，该疫苗是由4条融合蛋 白构成，分别包含26种流行菌株M蛋白的N端多 肽序列及1种新发现的保护性抗原的N端多肽序 列”“，目前，该疫苗所包含的26种基因型别，覆盖 了80％一90％的北美流行菌株””1。本次研究共 发现8种einm基因型别，其中emml、etnm4、 emml2、emm22、emm75、emm89都包含在26价多肽 疫苗中，可见，该疫苗可以有效防治北京审GAs所 致疾病的流行，但疫苗的推广需要了解不同地区、不 同时期GAS菌株流行情况，但目前我国仍缺乏对 GAS菌株的监测，提示应开展GAS菌株长期监测， 为研制出适合我国的多肽疫苗提供依据。 参考文 献 1]CampetisJR，SteerAC，MulhollandEK．etal TheglobalbuMen ofgmupAstreplrmoccaldiseasesLancetInfectDis，2005，5 万方数据 虫堡盟陵堡堂盘查垫!!垩!!旦墨堂堂翌!!塑!!鱼』堕!坚型：旦竺墅!些垫望：坠!：堑：盟!!! (11)：685-694 钱海坤，杨鹏，张奕，等2005--2010年北京市猩红热发病时 空扫插分析疾病监测。2011，26(6)：435438 WhatmoreAM，KehoeMAHoffgORtal印ne【一ferinthe evolutionofgmuphstrept+M,occal㈣一likegenes：gene⋯ andvarialioninVirregulons,MolMicrobial，1994，11(2)： 363．374 BeMIB．FacklamRThompsontSequencing⋯一spef'ificPCR products forroutineandaccurate typing ofgroupAstrept—ci JClinMiembi01．1996．34(4J：953-958． 粱云梅．常贺生，沈叙庀，等北京地区儿童携带的酿脓链球 菌emm分型和超抗原speA及8pec的相关性研究实用儿科 临床杂志，2010，25(22】：1700—1702 YahJJ，LiuCC，KoWC，etal Malecu]aranalysisofgroupA streptococcalisolatesassociatedwithscarletfe、Terinsouthem Taiwanbet⋯1993粕d2002J C}inMicrobial，2003，41 (10)：48584861 HsiehYC，HuangYCScarletfeveroulbmakinHongKong， 20lIJ MicrobialhnmunoiInfect，2011，44(6)：40941I 谢，4c强，陈兆鸿，邴秋连，等儿童A群链球菌感染的耐药性 分析及其e／O／t／基因分型中国儿童保偿杂志．2008，16(4)： 389．390 弓耀玲．杨永弘，俞桑洁，等中国儿童A旌链球菌感染菌株 emnl分型及超抗原基因谱分布基础医学与临床，2009，29 (11)：1166一1169． O’Lnu小linRE．RobersonA．CieslakPR．dal The epidemiolog)nfinvolvegroupAstreptococcalinf∽tfonand potentialvacelneimplications：UnitedStates2000—2004Clin In如ctDis．2007．45(7)：853-862 Luca一14a『arlB，DarenbergJ．NealS．dal clinical蚰d microbiologlea]chⅡaclefisticsofse⋯S¨eptococeuspyogenes diseaseinEuropeJ ClinMicrobf01．2009．47(4)：1155·1165 DhandaV．Vohl8．H．KuInarR．GroupAStreptOCOCcus订nAenee factors神nesinnorthIndia＆theirassociatiOnwithemmtypein pharyngitisIndianJ MedRes．2011．133：110一115 ChenYY，HuangCT，YaoSM，eta1．Molecularepidemfologyof group AstreptococcuscausingscarletfeverinnorthernTalw蛐， 2001--2002DiagnMicrobiollnf盹tDis．2007，58(3)： 289-295 JaggiP，TanzRR，BeMIB，etal Ageinfluencestheemmtype distributionofpediatricgroupAstmpl帆oc：ea]pharyngealisolates PediatrInfeetDisJ．2005，24(12)：1089-1092 粱云梅，常贺生，沈叙庄，等致儿童咽扁桃体炎酿脓链球菌 emm分型临床儿科杂志，201l，29(4)：382-385． 吴双胜，杨鹏．李海月，等2007--2010年北京市18岁以上居 民流行性感冒疫苗接种情况及阻碍因素 中华预防医学杂 志．2011，45(12)：1077—1081 HuMC．删lsM^．StroopSD．Hal Immunogenicityofa 26一 valeatgroupAstteptoeocealvaccineInfectlmmun2眦．70 (4)：2171-2177 收稿日期：20124_】5．10) (本文编辑：李敬文) ．读者。作者。编者． 关于《中华预防医学杂志》刊出论文中英文缩写的公告 AIDS：获得性免疫缺陷综合征PAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳 BMl：体质指数PFGE：脉冲场凝胶电泳 CDC：疾病预防控制中心 RT．PCR：逆转录一聚合酶链反应 ct值：每个反应管内荧光信号达到设定的阈值时所经历的 SARS：严重急性呼吸综台征 循环数 SDS：十二烷基硫酸钠 EDTA：乙二胺四乙酸 SNP：单核苷酸多态性 ELISA：酶联免疫吸附试验 SPF：无特定病原体 FBG：空腹血糖TMB：四甲基联苯胺 HDL—C：高密度脂蛋白胆固醇 Tc：总胆固醇 Hfv：人类免疫缺陷病毒 TG：甘油三酯 LDL—C：低密度脂蛋白胆固醇Tris：三羟甲基氨基甲烷 M'11B：结核分枝杆菌 WHO：世界卫生组织 PBS：磷酸盐缓冲液 FAO：联合国粮农组织 PCR：聚合酶链反应 (本刊编辑部) 2 3 4 5 6 7 2 3 4 5 6 7 8 9 0 万方数据 2011年北京市儿童携带A组链球菌的M蛋白基因 分型研究 作者： 李静， 刘爽， 彭晓旻， 杨鹏， 张代涛， 吴双胜， 梁慧洁， 崔淑 娟， 段玮， 卢桂兰， 王全意， LI Jing， LIU Shuang， PENG Xiao-min， YANC Peng， ZHANG Dai-tao， WU Shuang-sheng， LIANG Hui-jie， CUI Shu-juan， DUAN Wei， LU Gui-lan， WANG Quan-yi 作者单位： 李静,LI Jing(100069北京,首都医科大学公共卫生与家庭医学学院;北 京市疾病预防控制中心传染病地方病控制所)， 刘爽,彭晓旻,杨鹏,张 代涛,吴双胜,梁慧洁,崔淑娟,段玮,卢桂兰,王全意,LIU Shuang,PENG Xiao-min,YANC Peng,ZHANG Dai-tao,WU Shuang-sheng,LIANG Hui- jie,CUI Shu-juan,DUAN Wei,LU Gui-lan,WANG Quan-yi(北京市疾病 预防控制中心传染病地方病控制所) 刊名： 中华预防医学杂志 英文刊名： Chinese Journal of Preventive Medicine 年，卷(期)： 2012,46(12) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zhyfyx201212013.aspx