紫外法测定血清总蛋白

null紫外分光光度法测定血清蛋白质紫外分光光度法测定血清蛋白质临床生化实验室一、实验目的一、实验目的掌握紫外分光光度法测定血清蛋白质的原理。 学习754型紫外分光光度计的使用方法。 二、实验原理二、实验原理大多数蛋白质中酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在280nm具有一个紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，因此可作蛋白质定量分析。 二、实验原理二、实验原理 由于生物样品中常混有核酸，核酸中的碱基对紫外也有吸收，但其峰值在260nm附近，因此可用下列公式计算蛋白质浓度： Lowry-Kalckar公式： 蛋白质浓度（g/L）=（1.45A280-0.74A260) （A280和A260分别代光径为1cm时蛋白质溶液在280nm和260nm处测得的吸光度值。）三、实验操作三、实验操作（一）实验操作步骤 1、取待测血清0.1ml于大号试管内 2、取生理盐水9.9ml加入到此试管内，边放边震荡，轻轻混匀 3、生理盐水调零，测定波长280nm及波长260nm的吸光度值三、实验操作三、实验操作（二）紫外分光光度计的使用方法 1、接通电源，打开仪器开关，预热10min 2、调波长为260nm 3、依次把生理盐水、待测液倒入比色杯内，放入比色槽 4、推动拉杆至最前方，以生理盐水调零 6、测定待测液的值 7、调波长为280nm，重复3~6步的操作 四、结果计算四、结果计算计算公式： 蛋白质浓度（g/L）=（1.45A280-0.74A260) ×100 参考范围： 正常人：60~80g/L五、方法学评价五、方法学评价 紫外法优缺点： 优点 操作简便，可保留蛋白生物活性； 没有发生化学反应，标本可重复利用。 五、方法学评价五、方法学评价 紫外法优缺点： 缺点 各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同，因此测定有一定误差； 在280nm测定易受尿酸和胆红素的干扰，导致准确性和特异性受影响； 若样品种含有嘌呤嘧啶等会出现比较大的干扰，此时必须同时测定260和280nm吸光度，通过公式校正测定，以消除核酸的影响，而推算出蛋白质浓度。 null临床意义见双缩脲法六、注意事项六、注意事项 需用石英比色杯，光径=1cm，拿法同722型比色杯，价值昂贵，用时小心 双用10ml的吸量管取生理盐水时，先查看吸量管刻度是否到尖端，若到尖端，应先放掉0.1ml，再将剩下的9.9ml液体放入试管中。 六、注意事项六、注意事项由于各种蛋白质的酪氨酸和苯丙氨酸含量不同，显色深浅随不同蛋白质改变，因而本法只适用于蛋白质相对浓度的测定，核酸对结果也有影响，尽管进行了公式校正，但是不同样品干扰成分差异较大，致使280nm紫外吸收法检测的准确性较差。