ACP时间进程反应曲线

null酸性磷酸酶时间进程曲线测定酸性磷酸酶时间进程曲线测定临床生物化学教研室一、实验目的一、实验目的掌握酸性磷酸酶时间进程曲线测定的原理 掌握酸性磷酸酶时间进程曲线测定的方法二、实验原理二、实验原理时间进程曲线是指酶促反应过程中产物生成量(或底物减少量)与时间之间的关系曲线。以酶促反应时间为横坐标，产物生成量（或底物减少量）为纵坐标绘制而成。二、实验原理二、实验原理在底物与酶蛋白浓度一定的条件下，在反应的最初阶段，底物常处于过量，产物的生成量或底物的减少量一般是随反应时间而线性递增或递减的，反应速度恒定。随着反应时间的延长，底物不断被消耗，不足以满足酶的要求，反应速度减慢。 二、实验原理二、实验原理本实验是在ACP最适反应条件下，以磷酸苯二钠为底物，采用每间隔一定时间测定产物酚的生成量，从而绘制ACP的时间进程曲线，从曲线上找出代表酶活性的酶促反应时间范围，从而选择适宜的保温时间。 三、实验操作(注：酶液需稀释)三、实验操作(注：酶液需稀释) 　 加入物(ml) 1 2×2 3×2 4×2 5×2 6×2 7×2 酶液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 柠檬酸缓冲液 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 磷酸苯二钠溶液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 37℃保温时间 0 5 10 15 20 30 40 继续对应加入下列试剂（每加一种需混匀） 蒸馏水 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 碳酸盐缓冲液 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 4-AAP溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 高铁氰化钾溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 三、实验操作三、实验操作混匀，室温放置10min，以“1”管调零，在波长510nm处测得各管吸光度值。以时间(t)为横坐标，各管吸光度值的平均值(A)为纵坐标，绘制时间进程曲线，从曲线上找出酶促反应初速度的时间范围。四、注意事项四、注意事项准确掌握反应时间，每一时间应准确无误。 上清液Ⅴ的稀释倍数可根据实验2的酶活性的测定结果稀释后再用，最好吸光度在0.7左右。其它上清液经适当稀释后也可作为本实验的酶液。