《动物细胞培养和核移植技术》（用)

nullnull复习提问： 1、植物细胞工程的应用主要表现在哪几方面？ 2、培养人工种子的流程？需要取哪些材料？ 3、人工种子的结构？胚乳中的成分？ 4、培养突变体的流程？原因是什么？ 5、细胞产物的种类？ 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？依据的原理是什么？ 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？依据的原理是什么？ 那么动物细胞常用的技术手段呢？植物组织培养 植物体细胞杂交问题探讨 植物细胞的全能性动物细胞工程的技术手段动物细胞工程的技术手段动物细胞培养、动物细胞核移植、 动物细胞融合、生产单克隆抗体等动物细胞工程技术的基础动物细胞培养 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。原理：细胞增殖动物细胞培养的过程（见课本）动物细胞培养的过程（见课本）思考：1、选材：幼龄还是老龄的组织？分化程度低的还是分化程度高的组织细胞？2、如何分散成单个细胞？用胃蛋白酶 可以吗？3、细胞贴壁、细胞的接触抑制？4、原代培养、传代培养？5、动物细胞培养的过程？null1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞增殖能力强，分裂旺盛。null在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。2.分散成单个细胞动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？成块组织限制了细胞的生长和增殖，使细胞与培养液更充分接触，保证细胞所需的营养物质供应及有害产物的及时排出。3.3.悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞贴壁：细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。null细胞悬液原代培养单个细胞加培养液动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（取材）传代培养动物组织消化后的初次培养（第一次接触抑制之前）贴壁后的细胞重新用胰蛋白酶处理，分瓶继续培养增殖的过程。null动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶或胶原蛋白酶单个细胞制成细胞悬液原代培养传代培养原理：细胞增殖去掉组织间蛋白质动物细胞培养不能 最终培养成生物体加培养液null1、细胞株：能够传代到40---50代的细胞，其遗传物质没有发生改。 2、细胞系：当细胞株细胞传到50代以后，少部分细胞的遗传物质发生了改变，能无限制地传代下去，获得不死性，具有癌细胞的特点。 3、目前使用的或冷冻的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。null1、无菌、无毒的环境 动物细胞培养的条件培养液和培养器具无菌处理 添加一定量的抗生素(防污染） 定期更换培养液（清除代谢产物，防止其积累对培养细胞造成危害。）动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境 2、营养补充合成培养基中缺乏的物质葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子等培养基的不同是动物细胞培养和植物组织培养最重要的区别动物血清、血浆动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和PH 36.5 +0.5度 PH为7.2-7.4动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和PH 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）null思考：2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？3、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清、血浆等细胞增殖能力强，分裂旺盛不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多或获得细胞产物，不能发育成新的动物个体。null动物细胞培养植物组织培养植物细胞的全能性细胞或细胞产品植物体或组织细胞快速繁殖、培育无病毒植株等葡萄糖、动物血清、血浆蔗糖、植物激素、琼脂液体培养基固体培养基细胞增殖培养结果用途培养基特有成分培养基性质原理null（1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 （2）得到基因工程的受体细胞 （3）用于检测有毒物质 （4）用于生理、病理、药理等方面的研究动物细胞培养的应用 null 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 --------------------（　 ） 　　 A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是 ------（　） 　 A.动物细胞融合 B.单克隆抗体　 C.胚胎移植 D.动物细胞培养 ADnull 3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（ ） A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。Anull4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）①无毒的环境 ②无菌的环境 ③培养基需要加入血清 ④温度与动物体温相似 ⑤需要O2，不需要CO2 ⑥CO2能调节培养液PHA、①②③④⑤⑥ B、 ①②③④ C、①③④⑤⑥ D、 ①②③④⑥Dnull5、动物细胞培养的特点 （ ） ①细胞贴壁 ②有丝分裂 ③细胞分化 ④接触抑制 ⑤减数分裂 ⑥原代培养一般传1－10代 A、①②④⑥ B、②③④⑤ C、①③④⑥ D、③④⑤⑥Anull6.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是( ) A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中 B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、 无机盐、生长素和动物血清等 C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌蛋白 D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理Dnull 如何使动物细胞的全能性表达出来? 利用动物细胞核移植技术null1、动物细胞培养，细胞贴壁，细胞的接触抑制，原代培养，传代培养，合成培养基的定义 2、动物细胞培养的过程 3、动物细胞培养的条件 二、动物体细胞核移植技术:二、动物体细胞核移植技术: 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植（难度高）用核移植的方法得到的动物称为克隆动物思考：体细胞核移植难度高的原因null（MⅡ卵母细胞）减数第二次分裂中期去核的卵母细胞供体细胞注入去核卵母细胞受体细胞激活，完成分裂、发育胚胎移植动物细胞培养（或早期胚胎培养）null动物体细胞核移植技术黑面绵羊去核卵母细胞白面绵羊乳腺细胞核重组细胞动物细胞培养 （或早期胚胎培养）早期胚胎胚胎移植另一头绵羊的子宫妊娠、出生克隆羊多利细胞核移植null1、受体细胞 为卵母细胞的原因？为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞的原因？1）细胞比较大，易操作。 2）卵黄多，营养丰富，为发育提供充足的营养。 3）含有使体细胞核表达全能性的物质和营养条件。2、克隆过程运用的技术手段？动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植3、克隆牛的大部分性状与谁一样？提供细胞核的供体牛4、结论？动物体细胞核具有全能性null克隆动物的应用前景1.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2.保护濒危动物 3.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4.作为异种移植的供体 5.用于组织器官的移植体细胞核移植技术存在的问题1.成功率非常低 2. 存在健康问题 3、克隆动物食品的安全性问题。 null7.下列哪项不属于体细胞核移植技术的应用（ ） A.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 B.保护濒危物种 C.获得组织器官异体移植的供体 D.大量产生紫杉醇Dnull10、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： 1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。 （2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 。 动物胚胎或幼龄动物剪碎胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养null （3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有 ________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到这时的培养称为__ 。 （4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 处理，然后配置成 ，再分装。 `动物血清10原代培养胰蛋白酶细胞悬液null动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术