溶血对ELISA和TRFIA法检测低值弱阳性HBsAg的影响

溶血对ELISA和TRFIA法检测低值弱阳性HBsAg的影响 【摘要】  目的探讨样本溶血对酶联免疫吸附试验(ELISA)一步法和时间分辨荧光免疫技术(TRFIA)检测低值弱阳性HBsAg的影响。方法用80例不同HBsAg浓度样本人为造成溶血，作为检测对象。然后分别用两种方法检测其HBsAg的浓度，通过对结果分析观察溶血对两种方法检测结果的影响。结果ELISA法检测时部分溶血标本产生假阳性;TRFIA法检测时部分溶血标本产生假阴性。结论溶血对两种检测方法有一定干扰。 【关键词】  溶血;酶联免疫吸附测定;时间分辨荧光免疫技术;肝炎表面抗原，乙型 　HBsAg是HBV感染的最主要病原标志和直接证据。在诊断和监测急、慢性HBV复制状态及评价抗病毒治疗效果中HBsAg值的准确性尤为重要。ELISA因易于操作，快速简便，成本较低而成为大批量健康体检的首选;时间分辨荧光免疫技术(TRFIA)因能定量分析而做为疫苗接种及抗病毒治疗观察的首选。目前国内外就标本溶血对酶联免疫吸附试验(ELISA)的影响报道较多，而对TRFIA的报道较少。笔者就样本溶血对两种检测方法的影响进行比较，现报道如下。 　　1样本来源和方法 　　1.1样本来源收集我院住院患者检测乙肝五项指标定量(TRFIA法)样本中低值弱阳性浓　　度HBsAg样本40例，其中低值样本20例，弱阳性样本20例;来我院做健康体检人员检测乙肝　　五项指标定性(ELISA法)样本中低值弱阳性浓度HBsAg样本40例，其中低值样本20例，弱阳　　性样本20例。 　　1.2方法分别记录好样本溶血前结果。40例住院患者均重新抽血(无溶血，脂血)，与40例健康体检人员样本放置-30℃冰箱1h，取出融化，再以3 000r/min离心10min，吸取溶血血清分别用TRFIA法和ELISA法检测HBsAg的浓度。 　　1.3仪器与试剂上海科华生物技术股份有限公司提供的乙肝五项指标定性ELISA诊断试剂盒;上海新波生物技术股份有限公司时间分辨免疫分析仪：Anytest2000，试剂为专用配套试剂;质控品：卫生部临床检验中心乙肝病毒血清标志物定值质控品;酶标仪：桂林优利特URIT-660;严格按操作进行试验。 　　1.4结果判断ELISA法：Cut off值=样本OD值/阴性对照孔OD值×2.1≥1.0为阳性，<1.0判为阴性，1.0～2.0之间判为弱阳性;TRFIA法：HBsAg浓度≥0.5ng/ml为阳性，<0.5判为阴性，0.5～1.0判为弱阳性。 　　2结果 　　2.1阴性标本溶血后两种方法检测HBsAg结果的比较两组方法比较：χ2=17.14，P<0.05。说明阴性标本溶血后两种方法检测HBsAg时结果有差异，ELISA的误差率大于TRFIA(以溶血前检测值为判断标准)，见表1。表1阴性标本溶血后两种方法检测HBsAg结果的比较 　　2.2弱阳性标本溶血后两种方法检测HBsAg结果的比较两种方法比较：χ2=17.14，P<0.05。说明弱阳性标本溶血后两种方法检测HBsAg时结果有差异，ELISA的误差率大于TRFIA(以溶血前检测值为判断标准)，见表2。表2弱阳性标本溶血后两种方法检测HBsAg结果的比较 　　3讨论 　　实验表明，ELISA法检测阴性溶血后标本产生假阳性，误判率为60%，弱阳性标本溶血　　后全部为阳性，其OD值呈升高趋势。分析原因可能是溶血后红细胞破裂释放出血红蛋白(Hb)，Hb有与辣根过氧化物酶类似的活性[1]，Hb的非特异性吸附及与包被物非特异性结合可以使反应产物颜色加深影响结果判断，使阴性误判为阳性。TRFIA法检测溶血标本产生假阴性40%，原因可能是溶血后红细胞内容物如水(64%～70%)、Hb、无机盐、蛋白质等溢出，一方面稀释了样本浓度，另一方面会产生一些非特异性荧光干扰。但TRFIA通过时间延迟去除非特异性荧光，在固定时间检测特异性荧光，解决了自然背景干扰问，并通过激发光与发射光之间较大的Stokes位移，明显排除了非特异性荧光干扰[2]，使稀释作用明显表现出来，造成样本浓度降低，使弱阳性样本出现假阴性。统计学表明，ELISA的误差率大于TRFIA，溶血对TRFIA的干扰小于ELISA，这是实验方法不同所致。因此溶血样本对ELISA　　法和TRFIA法检测HBsAg会造成一定干扰，影响结果的准确性，造成患者漏诊和误诊，给健　　康体检人员及乙肝患者抗病毒治疗观察带来误导。我们要尽量避免溶血样本进入实验室，溶　　血样本应在化验单上注明，并建议重新采血复查，保证检验结果准确可靠。 【参考文献】   　[1]陆仁飞.溶血标本对乙型肝炎病毒表面抗原检测结果的影响[J].检验医学与临床，2008，5(17)：1065. 　　[2]陈景芬，曹松.时间分辨荧光免疫法检测乙型肝炎病毒标志物[J].检验医学与临床，2008，5(14)：860-861.   订阅登记：