HPLC测定硫酸沙丁胺醇雾化吸入溶液有关物质方法的研究

416 食品与药品 Food and Drug 2012年第 14卷第 11期 HPLCi~JJ定硫酸沙丁胺醇雾化吸入溶液有关物质的研究 张冬梅，牛 冲，冷佳蔚 (山东省食品药品检验所，山东 济南 250101) 摘 要：目的 研究建立测定硫酸沙丁胺醇雾化吸入溶液中有关物质的HPLC方法．方法 采用Agilent ZORBAX SB-C 柱(250 mmX4．6 mm，5 rtm)；柱温：35℃；流动相：庚烷磺酸钠溶液一乙腈 (78：22)；流速：1．5 mL／mim 检测波长：220 nm。 结果 硫酸沙丁胺醇主峰与各分解产物峰分离良好，硫酸沙丁胺醇的检出限为1．0 ng。结论 此方法准确、简便、快速，适 用于硫酸沙丁胺醇雾化吸入溶液的质量控制。 关键词：硫酸沙丁胺醇；有关物质；高效液相色谱法 中图分类号：R974~．3 文献标识码：A 文章编号：1672．979X (2012)11-0416—03 Determination of Related Substances in Salbutamol Sulfate Nebules Inhalation Solution by HPLC ZHANG Dong．mei。NIU Chong．LENG Jia—wei (ShandongInstituteforFoodandDrug Control,Jinan 250101，China) Abstract：Obiective To establish a HPLC method for the determination of related substances in Salbutamol Sulfate Nebules Inhalation Solution．Methods The HPLC was performed on an Agilent ZORBAX SB—CR column(250 rflnl X 4．6 lnrfl，5 m)with the mixture of22 volumes ofacetonitrile and 78 volum es ofthe solution containing 2．87 g of sodium heptanesulfonate and 2．5 of potassium dihydrogen phosphate R previously adjusted to pH 3．65 with dilute phosphoric acid solution as the mobile phase．Th e detection wavelength was 220 nlT1．Th e flow rate was 1．5mL‘min．Th e temperature ofthe column was 35℃ ．Results An excellent separation was achieved for salbutamol sulfate and its related substances． Th e LOD of salbutamol sulfate was 1．0ng．Conclusion Th is method is accurate，simple，quick and effecfive for testing related substances in Salbutamol Sulfate Nebules Inhalation Solution．It is suitable for the quality control ofSalbutamol Sulfate Nebules Inhalation Solution． Key Words：salbutamol sulfate； related substances；HPLC 硫酸沙丁胺醇系p：。肾上腺素受体激动药，临床用于治 于慢性哮喘和慢性支气管炎的维持治疗，缓解急性支气管 疗与预防支气管哮喘，治疗伴有可逆性支气管阻塞。可用 痉挛和预防运动诱发的哮喘。临床上使用的硫酸沙丁胺醇 收稿日期：2012—03—27 作者简介：张冬梅 (1979．)，女，主管药师，研究方向：药物分析 E．mail：zhangdml000@163．tom 2 L。(3 )正交试验结果 参片多糖的最佳提取工艺。其中乙醇沉淀浓度在90％时， 沉淀稳定且沉淀量大，是本实验最关键 的环节。为复方丹 参片质量的完善提供科学保证。 参考文献 [1]国家药典委员会编．中华人民共和国药典is]．2010年版一部．北 表3正交实验设计方差 京：中国医药科技出版社，2010：907． [2]宋小妹，唐志书．中药化学成分提取分离与制备【M]．北京：人民卫 生出版社，2009：51． 【3】姚莹华，刘强，陈育尧，等．丹参多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用 [J]．中国实验方剂学杂志，2010，16(6)：227·230． [4]吴从平．丹参多糖的提取及生物活性的研究【D]．山东：山东农业 大学，2010． [5]陈新霞，顾呈华，杨明晶，等．三七多糖对小鼠免疫功能调节的研究 [J]_江苏预防医学，2007，18(3)：10—12． [6]姜文茹，毕良佳，赵尔．三七多糖复合自固化磷酸钙人工骨修复骨 缺损的实验研究【j]．中国中医药科技，2008，15(5)：355-356． 食品与药品 Food and Drug 2012年第 14卷第 11期 417 雾化吸入溶液的执行标准系国家食品药品监督管理局标准 [J1 ， 中国药典2010年版、英国药典 (BP)2009版Ⅲ、欧洲药 典 (EP)6．0版收载了硫酸沙丁胺醇原料药，但均未收载该 制剂品种。本文首次研究了硫酸沙丁胺醇雾化吸入溶液的 HPLC有关物质检查方法，并对新建立的方法进行了方法学 验证，保证方法可行。 1仪器与药品 仪器：Agilent1200高效液相色谱仪。 试剂：乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾、磷酸、庚 烷磺酸钠为分析纯，超纯水。 对照品：硫酸特布他林 (中国食品药品检定研究院， 批号100273—199701)；硫酸沙丁胺醇 (中国食品药品检定 研究院，批号100328—200502)；沙丁胺醇杂质B (EP，批 号4．1)；沙丁胺醇杂质D (EP，批号4．0)；沙丁胺醇杂质 F(EP，批号4．O)；沙丁胺醇杂质G (EP，批号3．1)。 样品：硫酸沙丁胺醇雾化吸入溶液 (深圳大佛药业， 批号 ：20090904、20l001Ol、20l00302)。 2方法与结果 2．1 色谱 条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB—C8(250 mm~4．6 mm，5 m)；柱温：35℃；流动相：庚烷磺酸钠溶液[取庚烷磺酸 钠2．87 g与磷酸二氢钾2．5 g，加水溶解并稀释至1000 mL， 用磷酸溶液 (1—2)调节pH值至3．651一乙腈 (78：22)；流 速：1．5 mL／min；检测波长：220 nm；进样量：20 ：记 录色谱图至主成分色谱峰保留时间的25倍。 2．2 溶液的制备 2．2．1 供试品溶液的制备 精密量取本品适量，加流动相稀 释制成每 1 mL中约含沙丁胺醇2 mg溶液，作为供试品溶液。 2．2．2 对照溶液的制备 精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 2．2．3 阴性对照溶液的制备 按处方比例取辅料和其他组分 制成空白样品，按供试品溶液的制备方法配制阴性对照溶液。 2．3硫酸沙丁胺醇与杂质对照品的分离 取硫酸沙丁胺醇对照品与沙丁胺醇杂质B、沙丁胺醇 杂质D、沙丁胺醇杂质F和沙丁胺醇杂质G各适量，加流动 相溶解并配置成一定浓度的溶液。分别按2．1项下的色谱条 件和中国药典2010年版硫酸沙丁胺醇原料有关物质项的色 谱条件检验。色谱图见图l。 以上实验可见，按2．1项下的色谱条件硫酸沙丁胺醇与 各杂质峰分离度 良好，而中国药典20l0年版硫酸沙丁胺醇 原料有关物质项下的色谱条件对于混合溶液中的杂质对照 品不能很好的分离，因此2．1项下的色谱条件更适用于硫酸 沙丁胺醇有关物质的测定。 2．4 系统适用性试验 20 B t／1Tlln 图1硫酸沙丁胺醇与杂质对照品混合溶液色谱图 A．按2．1项下色谱条件的色谱图；B．按中国药典201O年版硫酸沙 丁胺醇原料有关物质项下色谱条件 的色谱 图 (1．硫酸沙丁胺醇 2．沙丁胺醇杂质B 3．沙丁胺醇杂质D 4．沙丁胺醇杂质F 5．沙丁胺 醇杂质G) 取硫酸特布他林对照品与硫酸沙丁胺醇对照品适量， 加流动相溶解并稀释制成每1 mL中各含约0．1 mg的溶液 ， 作为系统适用性试验溶液。取上述溶液2O 注入液相色谱 仪，照2．1项下的色谱条件测定。色谱图见图2。 硫酸沙丁胺醇峰理论板数为11057，硫酸沙丁胺醇峰与 硫酸特布他林峰的分离度为1．9。 2 t／1"1"1112 图2系统适用性试验色谱图 (1．硫酸沙丁胺醇 2．硫酸特布他林) 2．5专属性试验 2．5．1 酸破坏试验 取硫酸沙丁胺醇0．10 g，置入50 mL量 瓶，加l mol／L盐酸溶液2mL，振摇，90℃水浴加热2h，用1 mol／L氢氧化钠溶液中和，用流动相稀释至刻度，摇匀，作 为酸破坏溶液。 2．5．2 碱破坏试验 取硫酸沙丁胺醇0．10 g，置入50 mL量 瓶，加l mol／L氢氧化钠溶液2 mL，振摇，90℃水浴加热2 h， 用1 mol／L盐酸溶液中和，用流动相稀释至刻度，摇匀，作 为碱破坏溶液。 2．5．3 氧化破坏试验 取硫酸沙丁胺醇0．10 g，置入5O mL 量瓶，加l0％过氧化氢溶液1 mL，振摇 ，90℃水浴加热 1 h，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为氧化破坏溶液。 2．5．4 热破坏试验 取硫酸沙丁胺醇适量，130℃加热3 h，取50 mg，置入25 mL量瓶，用流动相溶解并稀释至刻 度，摇匀，作为热破坏溶液。 2．5．5 光破坏试验 取硫酸沙丁胺醇适量，置于4500 Lx光照 度下照射3 d，取50 mg，置入25 mL量瓶，用流动相溶解并 稀释至刻度，摇匀，作为光破坏溶液。 取上述各专属性试验溶液分析色谱。结果表明，在此 41 8 食品与药品 Food and Drug 2012年第l4卷第1 1期 色谱条件下不但能检出其他杂质，而且能检出降解产物， 专属性强。 2．6 检 出限 取硫酸沙丁胺醇适量，用流动相溶解并稀释成每1 mL 含20 g的溶液，逐次稀释制成每1 mL含0．05 的溶液，按 选定的色谱条件，取20 L注入液相色谱仪测定。按S／N=IO 计算，检出限为1．0 ng。 2．7 精 密度 ． 取硫酸沙丁胺醇与杂质对照品混合溶液，按选定的色 谱条件 ，取2O 注入液相色谱仪测定，连续进样5次，沙 丁胺醇峰面积的RSD为0．23％，杂质B、杂质D、杂质F和杂 质G峰面积的RSD分别为0．50％，O．32％，0．38％，0．73％。 2．8 溶液的稳定性 取硫酸沙丁胺醇原料约l2．5 mg，置入50 mL量瓶，用 流动相稀释至刻度，作为供试品溶液，取供试品溶液按2．1 项的色谱条件，分别于0，1，2，3，5，8 h，注入液相色 谱仪测定，计算硫酸沙丁胺醇峰面积的RSD为0．1％。 2．9 线性 关 系试验 取硫酸沙丁胺醇溶液 (100 gg／mL)，用流动相分别 稀释成含硫酸沙丁胺醇l0，l5，20，25~[130 t．tg／mL溶液， 按选定的色谱条件，取2O此 注入液相色谱仪测定，以峰面 积 (J，)为纵坐标 ，浓度( )为横坐标，绘制标准曲线，回 归方程为：Y=20．38lx+20．834， ：O．9999。结果表明：在 10~30 pg／mL范围内线性关系良好。 3样品测定 取2．2．1项方法配制样品溶液，按2．1项色谱条件，检 测样品，结果见表1。 表1有关物质测定结果 4讨论 4．1本文制定的HPLC方法能准确地测定硫酸沙丁胺醇雾化 吸入溶液中的有关物质，方法简便，快捷，重现性好，为 该制剂的质量可控性提供了科学的检验方法。 4．2 中国药典2010年版硫酸沙丁胺醇原料项下有关物质的 检验方法不能使主成分峰和各杂质峰很好分离，因此本方 法更适于硫酸沙丁胺醇雾化溶液有关物质的检验。 4．3 参考英国药典2009版原料有关物质 的相关要求制定了 有关物质的限度。 参考文献 [1】国家食品药品监督管理局标准[s】．WS1-(x一292)一2003Z)~WS一 162(X-145)-2000． 【2】BP 2009【S】：1918·1920． 《食品与药品》2013年征订启事 《食品与药品》系面向国内外发行的科学技术期刊，是中国科技论文统计源期刊 (中国科技核心期刊)，收录于中国 核心期刊 (遴选)数据库，美国CA、英国CABI和波兰Ic等。刊号：ISSN1672．979X／CN37．1438／R。 《食品与药品》杂志分为科技版和科普版，全年各6期，共l2期。从2013年起不再通过邮局发行，读者可直接向 《食品 与药品》编辑部订阅。科技版和科普版可分开订阅，亦可～并订阅，每本定价l5元 (含邮费)，一次订阅全年12期可享受八 折优惠 。 邮局汇款： 地址：山东省济南市高新区新泺大街989号 《食品与药品》编辑部 联系方式： 邮政编码：250101 Tel：0531—88779125 银行汇款： E—mail：food_drug@sina．corn 户 名： 《食 品与药品》杂志社 开户行：招商银行济南分行营业部 账 号：6320 8231 4910 001 《食品与药品》 (2013年度)订阅回执 订购人 收件人 l 电话 I 详细地址 订购数量 册 I 金额 I I 邮编 I 注：订阅人名称、地址、收件人姓名请用正楷填写，字迹清楚，请将此联同汇款回执复印件一并寄至编辑部。 此表复印有效