网络抗氧化剂对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的防治作用

肝脏2008年4月第13卷第2期 网络抗氧化剂对大鼠非酒精性脂肪性 肝炎的防治作用 · 125· ·论著· 张晓兰1 张志钢1 王恽立 王旭霞 刘美媛 冯国华 赵保民 赵曙光 王伟 闻勤生 【摘要】目的观察网络抗氧化剂对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的预防与治疗效果。方法雄性SD大鼠40只随 机分为4组：正常对照组、模型组、网络抗氧化剂预防组、网络抗氧化剂治疗组(各10只)，空白对照组喂以正常饲料，其 余3组均喂以高脂饮食。网络抗氧化剂预防组在高脂饮食同时给予维生素E(100mg／kg)、硫辛酸(40mg／kg)、辅酶 Q10(100mg／kg)、维生素C(100mg／kg)、还原型谷胱甘肽(100mg／kg)联合灌胃治疗，每日1次。网络抗氧化剂治疗组 在高脂饮食12周(造模成功)后开始给予上述网络抗氧化剂联合灌胃治疗。16周时处死各组大鼠，观察肝功能和血脂 变化，检测血清及肝组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果网络抗氧化剂预防组及治疗组体重、肝 湿重、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、MDA、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及肝组织 MDA均显著低于模型组，血清及肝组织SOD活性显著高于模型组。网络抗氧化剂预防组体重、肝湿重、ALT、TG和血 清MDA与网络抗氧化剂治疗组比较差异无统计学意义，血清AST、TC和肝组织MDA均显著低于治疗组，血清及肝组 织SOD活性显著高于治疗组。结论网络抗氧化剂对大鼠非酒精性脂肪性肝炎有较好的防治作用。 【关键词】 网络抗氧化剂；非酒精性脂肪性肝炎；抗氧化剂 EmpodisticandtherapeuticeffectsofnetworkantioxidantsontheratswithnonalcoholicsteatohepatitisZHANG Xiao-lanl，ZHANGZhi—gan91，WANGYun—li，WANGXu-xia，LIUMei—yuan，FENGGuo-hua，ZHAOBao-min， ZHAOShu—guang，WANGWei，WENQin—sheng．DepartmentofGastroenterology．TangduHospital。FouthMili— taryMedicalUniversity，Xi7an710032，China；DepartmentofCardiology，FuzhouGeneralHospitalofNanjing MilitaryRegion，Fuzhou350025，China Gorrespondingauthor：WENQin—sheng [Abstract]ObjectiveToinvestigatewhetherthenetworkantioxidantshasempodistieandtherapeuticeffectson nonalcoholicsteatohepatitis．Methods40maleratswererandomlydividedintocontrolgroup(ordinarydiet)。model group(high—fatdiet)，networkantioxidantsempodisticgroup(high-fatdietplusintragastricadministrationwith40mg／ kglipoicacid，100mg／kgcoenzymeQ10，100mg／kgvitaminC，100mg／kgvitaminEand100mg／kgglutathionedaily) andnetworkantioxidantstherapeuticgroup(intragastricadministrationwithabove-mentionedantioxidantsafterfeeding high-fatdiet12weeks)．Weightgain，liverindex，serumalanineaminotransferase(ALT)，aspartateaminotransferase (AST)，totalcholesterol(TC)，triglyeride(TG)，serumandhepaticmalondialdehyde(MDA)andsuperoxidedismutase (SOD)wereexaminedattheendof16weeks．ResultsBodyweight，liverhumidweight，serumALT，AST，TC， MDAandhepaticMDAofnetworkantioxidants—empodisticandtreatedratsweresignificantlylowerthanthoseofmodel group，whileserumandhepaticSODactivitiesweresignificantlyhigherthanthoseofmodelgroup．SerumAST，TCand hepaticMDAofnetworkantioxidants—empodisticratsweresignificantlylowerthanthoseoftreatedgroup．Serumand liverSODactivitiesofnetworkantioxidants-empodisticratsweresignificantlyhigherthanthoseoftreatedgroupbutthe bodyweight·liverhumidweight，serumALT，TGandMDAhavenodifferencebetweenthesetwogroups．Conclusion Networkantioxidantshaveanempodisticandtherapeuticefficacyontheratswithnonalcoholicsteatohepatitis． [KeyWords]Networkantioxidants；Nonalcoholicsteatohepatitis；Antioxidant 近年来非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发病率呈明显上升趋势，El益受到人们的关注。但关于NASH 作者单位：710032西安第四军医大学唐都医院消化内科(张晓兰、王旭霞、刘美媛、冯国华、赵保民、赵曙光，王伟、闻勤生)；南京军区福州总医 院心血管内科(张志钢)；陕西省军区门诊部(王恽立) 1：并列第一作者 通讯作者：闻勤生 万方数据 · 126· 的发病机制仍未明确，最佳治疗也未确定。“二次 打击”学说认为氧应激和脂质过氧化损伤是从单纯性 脂肪肝发展到NASH阶段的关键因素。抗氧化剂的 使用可能阻遏NASH的发生和发展。Hasegawa 等L1]研究发现，NASH患者每日口服300mg维生素 E持续1年可降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水 平，但患者体重指数(BMI)未见明显改变。我们设想 联合使用抗氧化剂，即网络抗氧化剂，由还原型谷胱 甘肽、维生素E、维生素C、硫辛酸、辅酶Q10组成，脂 溶性抗氧化剂与水溶性抗氧化剂联合，其共同特点是 可将网络抗氧化剂中除自身以外的至少一种抗氧化 剂还原再生，重新拥有抗氧化能力，具有协同作用，增 强抗氧化效果，从而减少氧应激、脂质过氧化的发生， 延缓NASH向肝硬化的发展，同时缩短治疗周期。 材料与方法 一、实验动物 雄性SD大鼠4()只，体重(178．4±11．2)g，清洁 级，购自第四军医大学动物中心。 二、试剂及仪器 胆固醇购自上海康捷生物科技发展有限公司，批 号061030。牛胆盐由北京奥博星生物技术责任有限 公司提供，批号20050423。维生素E购自Sigma公 司，批号T一4389；维生素C购自Sigma公司，批号A一 7506。还原型谷胱甘肽购自Amresco公司，批号 0399。辅酶Q10购自西安皓天生物有限公司，批号 C0061017。硫辛酸购自浙江万兴化工公司，批号 060415。猪油自制。日立全自动生化分析仪7600，荧 光分光光度计，可见光分光光度计。 三、方法 (一)动物模型的制备及分组适应性喂养1周 后随机分为正常对照组、模型组、网络抗氧化剂预防 组和网络抗氧化剂治疗组，每组10只。正常对照组 喂以正常饲料，其余3组喂以高脂饮食(t0％猪油+ 2％胆固醇+0．5％胆盐+87．5％普通粉料)，实验动 物均自由进食及饮水。网络抗氧化剂预防组在高脂 饮食同时给予脂溶性抗氧化剂：维生素E (100mg／kg)、硫辛酸(40mg／kg)、辅酶Q10(100mg／ kg)和水溶性抗氧化剂：维生素C(100mg／kg)、还原 型谷胱甘肽(100mg／kg)混合灌胃治疗，每日1次。 网络抗氧化剂治疗组在高脂饮食12周(造模成功)开 始给予上述网络抗氧化剂联合灌胃治疗，用法、用量 均与网络抗氧化剂预防组相同。空白对照组每天用 等量生理盐水灌胃。于第16周末各组大鼠分别以 2％戊巴比妥钠40mg／kg腹腔注射麻醉，自腹主静脉 采集8～10ml血液后，常规制备血清标本，迅速取出 肝脏，称取肝湿重，用PBS冲洗，吸除水分，取肝右叶 固定部位冻存于液氮中备用，以脱颈法处死动物。 (二)肝功能、血脂测定 将自腹主静脉留取血液 静置4℃冰箱过夜，次日清晨2000×g离心10rain， 取500tA血清用全自动生化分析仪测定丙氨酸基转 移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇 (TC)和甘油三酯(TG)。 (三)血清及肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化 酶(SOD)活性测定分别用血清及肝组织匀浆测定 MDA和SOD活性，取50弘l血清及200／11组织匀浆 液上清测定，使用荧光法测定MDA含量，改良的盐酸 羟胺法检测S()D活性。 四、统计学分析 计量资料均用均数±标准差(孟±s)示，多样本 均数间比较采用SPSS14．0系统One-WayANOVA， Pd0．05为差异有统计学意义。 结 果 一、一般情况 模型组大鼠毛色较正常对照组黄腻，网络抗氧化 剂预防组及治疗组毛色与正常对照组相似。网络抗 氧化剂治疗及预防组大鼠较模型组喜动，与对照组无 明显差异。模型组体重与其余3组比较差异均有统 计学意义(P0。05)；模型组肝湿重与其余3组比较差异均 有统计学意义(P<0．01)，网络抗氧化剂预防组及治 疗组肝湿重与正常对照组比较差异有统计学意义 (P0．05)。详见表1。 表1各组大鼠体重、肝湿重比较@±s) 与正常对照组比较，△P<0．05，△△P<0．01；与模型组比较，▲P< 0．05，▲▲P 0．05)；模型组与其余3组AST比较差异均有统计学意义 (P<0．05或P<0．01)，网络抗氧化剂预防组AST与正 常对照组差异无统计学意义(P>0．05)，网络抗氧化剂预 防组AST与治疗组比较差异有统计学意义(P<0．05)。 模型组TC和TG与其余3组比较差异均有统计 ·127· 学意义(P<0．01)；网络抗氧化剂预防组及治疗组TC 与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0．01)，TG 与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0．05)；网 络抗氧化剂预防组TC与治疗组比较差异有统计学意 义(P<0．01)，TG与治疗组比较差异无统计学意义 (P>0．05)。详见表2。 表2各组肝功能和血脂比较妇±5) 与正常对照组比较，AP 0．05)，网络抗氧化剂预防组血清MDA与治疗组比较 无显著差异(P>0．05)；模型组血清及肝组织SOD活 性与其余3组比较差异有统计学意义(P％0．01)，网 络抗氧化剂预防组血清及肝组织SOD与正常对照组 比较无显著差异(P>0．05)，网络抗氧化剂治疗组血 清及肝组织SOD活性与正常对照组、网络抗氧化剂预 防组差异均有统计学意义(P