水貂肺炎链球菌病的诊断与防治措施

第13卷第3期 2009年9月 经济动物学报 JoumalofEconomicAnimal V01．13No．3 Sep．2009 水貂肺炎链球菌病的诊断与防治措施 刘吉山r，沈志强1，林初文1，王艳·，王西耀2 (1．山东省滨州畜牧兽医研究院，滨州256600；2．山东省沂南县畜牧局；临沂276300) 摘要：在发生急性死亡的水貂脑中分离到9株细菌，经细菌培养、染色镜检、生化试验、动物试验证实分离 菌株均为肺炎链球菌。药敏试验结果：分离菌株大部分对氟苯尼考、阿米卡星、头孢噻肟、氨苄西林、呋喃妥因 敏感，应用敏感抗菌素与疫苗紧急免疫的方式，对该病的综合防治措施做了一系列探索式研究，并取得了理想 的防治效果。 关键词：水貂；肺炎链球菌；药敏试验；综合防治 中图分类号：$858．92 文献标识码：A 文章编号：1007—7448(2009)03．0178．05 DiagnoseofMinkStreptococcusPneumonia andItsControlMeasures LIUJi—shanl，SHENZhi—qian91，LINChu—wenl，WANGYanl，WANGXi—ya02 (1．InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryinBinzhouCityofShandongProvince，Binzhou 256600，China；2．BureauofAnimalHusbandryi凡YinanCountyofShandongProvince，Linyi276300， China) Abstract：9strainsofbacteriawereisolatedfromthebrainofmink．Theisolatedstrainwasconfirmedto bestreptococcuspneumoniaebybacterialculture，stainingandmicroscopyobservation，biochemicaltests andanimalexperiment．Theresultsofdrugsensitivitytestshowedthatflorfenicol，amikacin，cefotaxime， ampicillinandnitrofurantoinwereeffectivedrugstotheisolatedbacteria．Thenacomprehensivepreven- tionandcontrolforthediseasewasdoneandthedesiredresultsweregot． Keywords：mink；streptococcus；drugsensitivitytest；generalcombat 近年来随着水貂的规模化养殖水平不断提 高，水貂疾病也在不断地变化，极大地影响了毛皮 动物的养殖。本文介绍的是2006—2008年夏秋 之交从临床有神经症状并发生急性死亡的水貂中 分离到9株细菌，通过一系列试验鉴定病原为肺 炎链球菌。肺炎链球菌是多种动物的正常菌群之 一，为条件致病菌，在许多正常动物的内脏中都可 分离到，目前，有关水貂肺炎链球菌病的报道【l之J 较少，但该病的危害却不容忽视。它能引发水貂 的急性死亡及零星伤亡，具体病变为脑部、肺部、 脾脏、肾脏广泛性出血。每年进入夏秋季由于免 疫刺激和天气炎热潮湿，而引发水貂肺炎链球菌 病并导致其大规模伤亡。现将从发病水貂的脑中 分离到的链球菌报道如下。 1材料与方法 1．1 材料 1．1．1 菌株来源2006．2008年夏秋之交于山 东省的荣成、沾化、小营、邹平、临沂、13照和河北 省的肃宁、衡水八县(市)的养貂场病死貂的脑中 分离出9个菌株。分离菌株编号依次为：临沂 (BZSS．1)、日照(BZSS一2)、肃宁(BZSS一3)、荣成 (BzSS_4)、衡水(1)(BZSS．5)、滨城(BZSS．6)、邹平 (BZSS．7)、沾化(BZSS-8)、衡水(2)(BZSS．9)。 1．1．2培养基微量糖发酵管(上海市医学化 验所试剂厂)。鲜血琼脂平板、明胶、6．5％NaCI肉 ·作者简介：刘吉山(19r75一)，男，硕士，副研究员．主要从事预防兽医生物制品的研究与开发及临床兽医诊断与治疗工作。 收稿日期：2009-07-06 万方数据 第13卷第3期 刘吉山等：水貂肺炎链球菌病的诊断与防治措施 179 汤、pH9．6肉汤、0．1％美兰牛乳、40％胆汁、马尿 酸钠等生化培养基和血清肉汤按常规方法配 制c3I。 1．1．3试验动物小白鼠、水貂由山东绿都生 物科技有限公司动物实验中心提供。 1．1．4药敏纸片由北京天坛药物生物技术开 发公司生产。 1．2方法 1．2．1细茵分离与镜检观察[4-s]①培养：无菌 采取病料中的脑，用接种环接种于鲜血琼脂平板 上，37℃培养24h。②分离纯化：挑取平板上单 个典型菌落接种鲜血琼脂平板上，37℃培养24h。 ③扩大培养：将纯化后的细菌接种血清缓冲肉汤， 37℃培养24h，放置4℃冷藏备用。 1．2．2生化鉴定【4巧J将血清缓冲肉汤纯培养 物接种于微量糖发酵管(包括蔗糖、葡萄糖、麦芽 糖、果糖、乳糖、半乳糖、水杨苷、山梨醇、肌醇、菊 醇、鼠李糖、甘露醇、棉籽糖、阿拉伯糖、棉糖、卫矛 醇)和马尿酸钠、明胶、6．5％NaCI、pH9．6肉汤、 40％胆汁、甘油产酸、0．1％美兰牛乳等生化培养 基中，37℃培养48—72h后各株生化试验结 果。 1．2．3动物致病性试验①小白鼠致病性试 验：将分离的待检菌血液琼脂24h培养物分别用 生理盐水做适当稀释，并作活菌计数，配置悬浊 液。取体重为20一22g健康小白鼠36只，随机分 成9组，每组4只，1—8试验组小白鼠腹腔接种上 述悬浊液0．2mL／只(约109cfu／mL)【l-2，6l，对照组 4只小白鼠腹腔注射同剂量的生理盐水，观察发 病和死亡情况。②水貂致病性试验【7J：取临床发 病死亡最严重BZSS．2株细菌纯培养物第3代接 种2只4月龄水貂，分别接种浓度为2X 109cfu／mL的纯培养物1．0mL，后腿部内侧皮下注 射，观察发病和死亡情况。 1．2。4药敏试验采用纸片扩散法，用无菌棉 签蘸取分离菌的血清缓冲肉汤培养物，均匀涂布 于9cm鲜血平板。待稍干后，用无菌镊子取庆大 霉素(GM)、磷霉素(FOS)、硫酸新霉素(N)、氯霉 素(C)、红霉素(E)、四环素(TE)、氟苯尼考(F)、环 丙沙星(CIP)、头孢噻肟(CTX)、阿米卡星(AN)、 氨苄西林(AM)、克林霉素(CM)、呋喃妥因(n)、 头孢曲松(CRO)、左旋氧氟沙星(LvF)、头孢他啶 (CAZ)、萘啶酸(NAL)、甲氧苄啶(SXT)18种常用 药敏纸片(纸片直径6．3～6．4mm)平贴在培养基 表面，4℃2h使药物扩散，然后置37℃培养 20—24h后观察测量抑菌圈的大小并记录结果。 判定为：抑菌圈直径小于10nlffn为耐药，直径 在14—16nlnl之间为中度敏感，直径大于16lllnl 为敏感。 1．2．5综合防治试验应用BZSS．2株(13照株) 分离培养灭活后，参照文献[8]制备成蜂胶灭活疫 苗，给其发病群邻居家刚刚发病1d的貂群(刚死 亡20只)600只注射2mL／只并投喂敏感抗生素 磷霉素钠和阿莫西林，同时留30只只投喂敏感抗 生素，作为对照组，观察貂群的状态。 2 结 果 2．1 分离培养与镜检观察 在鲜血琼脂平板上37℃培养24h后，菌落 呈现细小、圆形、微凸、表面光滑、湿润、边缘整齐、 半透明，直径约l一2nllll。挑取单个菌落，革兰氏 染色镜检，为革兰氏阳性球菌，单个或成对存在， 或者3—5个呈短链排列。将上述血液平板上的 单个菌落接种到血清肉汤中，37℃培养24h，液 体培养基均匀浑浊，管底有白色的絮状沉淀。 2．2生化鉴定 9株分离菌经生化试验鉴定，其结果见表l。 表1生化试验结果 Table1．ResuItsofbiochemic．aItests 万方数据 180 经济动物学报 2009年 水杨苷 一 一 一 一 山梨醇 一 一 一 一 肌醇 一 一 一 一 菊醇 一 一 一 一 鼠李糖 一 一 一 一 甘露醇 一 一 一 一 棉子糖 一 一 一 一 阿拉伯糖 一 一 一 一 木糖 + 一 一 一 卫矛醇 一 一 一 一 马尿酸钠 一 一 一 一 明胶 一 一 一 一 6．5％氯化钠 一 一 一 一 pH9．6肉汤 一 一 一 一 40％胆汁 一 一 一 一 甘油产酸 一 一 + + 0．1％美兰牛乳 一 一 一 一 一 往：。+”严酸；“o”产酸严气；“一”阴性。不发酵糖 2．3动物致病性试验 2．3．1 小白鼠致病性试验 感染后3d对照组 小白鼠也健康存活，腹腔接种分离株培养物的小 白鼠均精神较差，不愿吃食，活动量小，3d后逐步 恢复正常，至10d仍健活。 2．3．24月龄水貂致病性试验 试验组水貂于 接种后表现精神沉郁，排稀便，有时呈现黑色，减 食，消瘦，7d后，死亡1只，对其剖检发现，肺部严 重出血、肝脏肿大，脾脏肿大、出血，肾脏出血，胃 肠道出血，脑膜出血并有积水与临床发病基本相 同，从攻毒病死动物的脑中分离到纯粹的攻毒菌， 说明该菌有一定的致病性。另1只逐渐恢复，饲 养至14d后，处死，剖检发现：肺部有出血症状并 且有恢复迹象，其他无可见病变。 可见，根据细菌培养、染色镜检、生化试验、动 物试验证实，分离菌株均为肺炎链球菌。 2．4药敏试验 9株待检菌经药敏试验鉴定，其结果见表2。 表2药敏试验结果 Table2．Resultsofdrugsensitivitytest mm 万方数据 第13卷第3期 刘吉山等：水貂肺炎链球菌病的诊断与防治措施 181 注：药敏试验判定标准由北京天坛药物生物技术开发公司提供 2．5综合防治试验 续，死亡率达到了33．3％，至14d后还有死亡的， 由表3可见，同时应用兽药和疫苗组水貂在 据以后观察还有死亡的，最后死亡率约达到 免疫后5d病死数逐渐减少，至第8d未再出现死 50％，病程很长，难以痊愈。 亡，死亡率9．8％，而单纯兽药对照组死亡一直持 表3综合防治试验结果 Table3．Resultsofcomprehensivepreventionandcontrolforthedisease 3分析与讨论 1)从分离菌的培养特性来看：该分离菌为革 兰氏阳性球菌，成对或单个存在，也有呈短链形式 存在的，最多的可达到12—14个链状排列，但普 遍的排列链较短并且在鲜血平皿上溶血性差，糖 发酵反应基本符合肺炎链球菌的生化特性，因此 综合判断该菌为水貂的肺炎链球菌。 ．2)从药敏试验结果来看，分离菌2／3菌株以 上对新霉素、氟苯尼考、阿米卡星、头孢噻肟、氨苄 西林、呋喃妥因敏感，有1／3。2／3菌株对庆大霉 素、磷霉素钠、氯霉素、红霉素、环丙沙星、克林霉 素、左旋氧氟沙星、头孢他啶敏感，在用药时尽量 选择敏感药物并且还要注意其给药途径，口服时 一定要选择吸收效果好的药物，如氟苯尼考，剂量 一定要足够大，疗程足够长，建议联合用药以防止 细菌产生耐药性，严重时可肌肉注射，以争取治疗 时机。分离菌对四环素、强力霉素、甲氧苄啶和萘 啶酸等耐药，在临床上，在发病治疗时应避免首选 此类药物，防止造成不必要的损失。 3)分离菌株培养物对小白鼠致病性比较差 且无规律可循，通过对其攻毒仅发现一时性沉郁， 并没有造成死亡或发病，与报道的有一定差 距[卜2，6|，资料介绍1X107cfu／只即可令至少半数 小鼠死亡，这也可能与不同分离株有关。通过 BZSS．2株对3—4月龄水貂的致病性试验，发现攻 毒2只，仅有1只到1周后才死亡，另外1只逐渐 康复，而在临床上该株引发了貂群的大批量死亡 (急性死亡50％)，这也可能与攻毒剂量小有一定 关系【7J。经过流行病学调查发现，典型的病例，如 BZSS．1，BZSS．2株，其急性死亡在3d内病死率达 到50％以上。还有其他几株都是病程长、治疗效 果差的病例，死亡率也几乎达到了50％。笔者对 其流行病学调查发现，在每年的7～9月份为该病 高发期，笔者推测细菌在炎热、潮湿的环境下很容 易大量滋生并污染食物，水貂等动物对夏季气候 不适应很容易形成热应激，致使抵抗力下降，为疾 病的发生创造了条件。为防止水貂大规模发病， 在13常饲喂中要定时投喂抗菌素，免疫前后提高 食物的蛋白含量并加入维生素矿物质等，注意加 万方数据 182 经济动物学报 2009年 强日常卫生、消毒，包括笼具、食具、环境等，以控 2006，38(8)：61·62· 制潜在细菌感染，防止导致严重经济损失。 [2]李和平，窦守强·赵洪杰·‘一例水貂链球菌病的诊疗⋯·今 4)从防制效果来看，本病在I临床上通过单独 [3]星妻萋篇嚣淼与删呲耕国农业出 投喂或肌注兽药都难以达到良好的治疗效果，只 版社，1995：425．451． 有通过蜂胶疫苗预防或紧急预防和使用敏感抗生 [4]蔡宝祥．家畜传染病学[M]．3版．北京：中国农业出版社， 素相结合的办法，才能达到良好的治疗效果。兽 2001：235-241． 药治疗仅能够减少死亡，使疾病病程延长，最终由 Is]陆承平·兽医微生物学【M]-3版·北京：中国农业出版社， 于细菌获得的耐药性及长期投药对动物的伤害， [6]2赵00海1忠(9，)篓麓链球菌分离鉴定与药敏试验[J]．中国畜 而致动物发病死亡，达不到良好的控制效果。但 牧兽医，2006,33(11)：85埘． 是药物联合蜂胶疫苗应用能够在动物疾病发生期 ET]卫广森，徐春厚，陈跃东。等．实验性水貂链球菌病的研究 很快获得抗体，而致病兽逐渐恢复。所以，在治疗 [J]．中国兽医学报，1994，14(4)：402—405． 过程中，仅用蜂胶疫苗可能使疾病前期损失较大， [8]沈志强，杨永福·禽霍乱蜂胶菌苗的研究⋯．中国畜禽传染 疫苗和兽药联用能够很快彻底控制该病。 病J,1989(5)：1& 参考文献： [1]吴忆春，苗立中．水貂链球菌病的诊治[J]．畜牧与兽医， (上接第164页) 其他各指标均有显著差异；内地藏獒与高原藏獒 相比，除了白细胞数和血小板数外，其他指标均有 显著差异。因此，可以认为藏獒是通过血液学方 面的改变来适应环境的变化。 参考文献： [1]文建军．健康藏獒血液学参数测定分析[J]．青海医学院学 (上接第167页) [24]董娜，吴东滨，方小文，等．日粮能量水平对蓝孔雀生产性 能、能量代谢及氮代谢的影响[J]．黑龙江畜牧兽医，2006 (6)：89—91． [25]董娜，方小文，黄胜平，等．日粮能量水平对种用蓝孔雀产 蛋和受精率的影响[J]．中国农业大学学报，2003，8(3)：95- 98． [26]邹琦．成年蓝孔雀日粮代谢能的研究【J]．东北林业大学学 报，2002，30(1)：57．59． (上接第170页) [16]柯佳颖，陈寅山．许友勤．泥蚶体液和肌肉提取液凝集素的 初步研究[J]．泉州师范学院学报：自然科学版，2005，23 (2)：81．90． [17]陈寅山．柯佳颖，饶小珍．泥蚶(TegiUarcagranosaLinnaeul$) 淋巴液凝集素的分离纯化及其性质研究[J]．分子细胞生 物学报，2006，39(5)：453-461． [18]柯佳颖．陈寅山，黄素华．泥蚶体液凝集素性能的初步研究 [J]．漳州师范学院学报：自然科学版，2005。47(I)：65-68． 报，1999，20(1)：7-9． [2】晁生玉，陈加英．德令哈藏葵15项血液生化指标测定[J]．青 海畜牧兽医杂志，1998，28(1)：6-7． [3】卢宗藩．家畜及实验动物生理生化参数[M]．北京：农业出版 社．1983． [4]黄孝龙，王忠东，范薇。等．藏獒的饲养繁殖及其生物学特征 [J]．实验动物科学与管理，1996，13(1)：13—14． 【27] [28] [29] [19] [20] [21] 郭万红．13粮营养水平对鄱阳湖绿头野鸭生产性能的影响 [J]．中国饲料．2000(10)：11-12． 郭洪杞，罗杰．珍珠鸡产蛋期日粮适宜蛋氨酸含量的研究 [J]．中国家禽，2005(增刊)：105·107． CandiniGCM．BurroughBREJ。EbedesH．Preliminaryinvesti· o雄lionintothenutritionofostrich(Stuthiocamelus)underinten- 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