正交试验优选气血双补口服液的澄清工艺_汤淏

第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 药 研 究 扫 描 中 华 中 医 药 1400 学 刊 正交试验优选气血双补口服液的澄清工艺 汤淏，唐安福，崔恩忠，王曙东 (南京军区南京总医院制剂科，江苏 南京 210002) 摘 要:目的:采用 ZTC1 + 1 －Ⅲ型天然澄清剂优选气血双补口服液的澄清工艺。方法:采用正交试验设计 法对影响澄清工艺的因素进行优选，并与醇沉法进行对比。结果: 以芍药苷保留率作为指标，确定气血双补口服 液的最佳澄清工艺条件为:药液浓度比为 1 ∶ 10，ZTC两组分用量分别为 B组分 0． 8 mL /g、A组分 0． 4 mL /g，作用 温度 B组分为 80 ℃、A组分为 60 ℃时，澄清效果最好。结论: ZTC1 + 1 －Ⅲ型天然澄清剂可用于气血双补口服液 的澄清工艺。 关键词:气血双补口服液; ZTC1 + 1 －Ⅲ型澄清剂;芍药苷;正交试验 中图分类号:R284． 2 文献标志码:A 文章编号:1673 － 7717( 2013) 06 － 1400 － 02 Clarification Technology Optimization of Qixue Shuangbu Oral Liquid by Orthogonal Experiment TANG Hao，TANG Anfu，CUI Enzhong，WANG Shudong (Department of Pharmaceutical Preparation，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，PLA，Nanjing 210002，Jiangsu，China) Abstract:Objective:To optimize the clarification technology of Qixue Shuangbu Oral Liquid by ZTC1 + 1 －Ⅲ． Meth- od:The orthogonal experiment was applied to optimize the influencing factors，compared with alcohol sedimentation． Re- sult:According to the retention rate of peoniflorin，the optimum conditions were as follows:the density of decotion was 1 ∶ 10，0． 8 g·mL －1B was added into solution at 80 ℃，then 0． 4 g·mL －1 A was added at 60 ℃ ． Conclusion:ZTC1 + 1 － Ⅲ clarification technology can be used in the extracting solution of Qixue Shuangbu Oral Liquid． Key words:Qixue Shuangbu Oral Liquid;ZTC1 + 1 －Ⅲ;peoniflorin;orthogonal experiment 收稿日期:2013 － 01 － 10 作者简介:汤淏(1980 －) ，男，江苏淮安人，主管药师，学士，研究方 向:中药制剂。 通讯作者:王曙东(1965 －) ，男，安徽合肥人，主任药师，博士，研究 方向:中药学。E-mail:wangshudong163@ sina． com。 气血双补口服液由黄芪、当归、白芍、党参、熟地等 10 味中药制成的复方制剂，功能益气养血，温肾填精，主要用 于气血两虚证。目前该制剂在生产中仅用水提醇沉法进行 澄清，需要大量的乙醇，且易造成有效成分的流失，尤其如 多糖、有机酸等成分损失较大，不利于制剂疗效的充分发 挥［1］。本实验在气血双补口服液澄清工艺中引入 ZTC1 + 1 －Ⅲ型澄清剂，结合 HPLC 法以芍药苷含量的保留率为指 标，与醇沉法进行比较，并采用正交设计试验优选气血双补 口服液的澄清工艺。 1 实验材料 Waters高效液相色谱仪、2487 紫外检测器;数显恒温 水浴锅 HH －6(国华电器有限公司) ;DF － 101B 集热式恒 温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限公司) ;旋转蒸发 仪 RE － 52A(上海安亭电子仪器厂)。芍药苷对照品(中国 药品生物制品检定所，批号:110736 － 200934) ;ZTC1 + 1 －Ⅲ型天然澄清剂(天津振天成科技有限公司) ;正丁醇、 甲醇、乙醚、冰醋酸等试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2． 1 ZTC1 + 1 －Ⅲ澄清剂的配制 A 组分:先用少量蒸馏 水搅成糊状，后加入需要量的蒸馏水，溶胀 24 h，搅拌，双层 纱布过滤，配制成 1%的黏胶液，即得。B 组分:先配制 1% 醋酸，然后用少量 1%醋酸溶解 B组分并搅成糊状，再加入 足够量的 1%醋酸，溶胀 24h，搅拌，双层纱布过滤，配制成 1%的黏胶液，即得。 2． 2 样品溶液的制备 按处方比例称取 60 ℃恒温干燥的 处方药材共 200 g，加 10 倍量水回流提取 2 次，每次 1 h，合 并提取液，抽滤，上清液减压浓缩至 2000 mL，即得。 2． 3 样品溶液中芍药苷含量的测定 ①色谱条件:色谱柱 为 Hanbon ODS － C18(5 μm，250 mm × 4． 6 mm) ，流动相为 0． 1%磷酸水溶液 －甲醇(70 ∶ 30) ，检测波长为 230 nm，流 速为 1 mL·min －1，柱温为室温，进样量为 10 μL。②对照 品溶液与曲线的制备:精密称取减压干燥后的芍药苷 对照品适量，加甲醇制成 100 μg /mL 对照品溶液，稀释成 一系列浓度。精密吸取对照品溶液，注入液相色谱仪，测定 其峰面积积分值。以峰面积积分值(μV· s)为纵坐标，对 0041 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1401 学 刊 照品浓度(μg / mL)为横坐标绘制标准曲线，计算线性回 归方程为 y = 13846x － 32907，r = 0． 9996。结果明芍药苷 进样量在 20 ～ 100 μg /mL范围内与峰面积积分值呈良好线 性关系。③供试品溶液的制备与测定:精密量取样品溶液 适量，经 0． 45 μm 的微孔滤膜过滤，取续滤液得供试品溶 液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量，注入液 相色谱仪，测定芍药苷含量，并计算其保留率。 芍药苷保留率 =澄清后药液中芍药苷的含量 白芍提取液中芍药苷的含量 × 100% 2． 4 正交试验优 ZTC1 + 1 －Ⅲ澄清的最佳工艺条件 影 响 ZTC1 + 1 澄清工艺的因素较多［2］，在前期预实验及单因 素实验的基础上，本文选择药液浓度、ZTC用量和温度 3 个 因素作为正交试验的考察因素，并以芍药苷保留率作为评 价指标，用 L9(3 4)正交表设计实验。正交设计因素水 平及实验结果见表 1 ～ 2，方差分析结果见表 3。 表 1 正交试验因素与水平 因素水平 药液浓度比 A (g ∶ mL) ZTC用量 B (mL /g) 温度 C (℃) 1 1 ∶ 8 0． 6 ∶ 0． 3 60 /40 2 1 ∶ 10 0． 8 ∶ 0． 4 70 /50 3 1 ∶ 12 1． 0 ∶ 0． 5 80 /60 注:因素 B用量比中前者为 ZTC澄清剂 B组分加入量，后者为 A组分加入量;C因素中前者为 ZTC澄清剂 B 组分加入的温度，后 者为 A组分加入的温度。 表 2 正交试验及结果 编号 因素 A B C 空白 结果 芍药苷保留率(%) 1 1 1 1 1 57． 52 2 1 2 2 2 65． 60 3 1 3 3 3 62． 96 4 2 1 2 3 71． 02 5 2 2 3 1 77． 56 6 2 3 1 2 75． 60 7 3 1 3 2 72． 77 8 3 2 1 3 71． 46 9 3 3 2 1 72． 55 芍保药 留苷率 K1 186． 081 201． 309 204． 579 207． 630 C芍药苷 =(ΣY) 2 /N K2 224． 181 214． 620 209． 169 213． 969 Qj =(K1)2 +(K2)2 +(K3)2 K3 216． 780 211． 11 213． 291 205． 440 SSj = Qj /3 － C芍药苷 R 38． 100 13． 311 8． 712 8． 529 SSj 272． 373 31． 593 12． 526 12． 944 表 2 芍药苷保留率方差分析表 误差来源 偏差平方和 自由度 方差 F值 P值 A 272． 096 2 136． 048 20． 797 ＜ 0． 05 B 31． 724 2 15． 862 2． 425 ＞ 0． 05 C 12． 656 2 6． 328 0． 967 ＞ 0． 05 误差 E 13． 084 2 6． 542 注:F0． 01(2，2)= 99． 00;F0． 05(2，2)= 19． 00 由表 1 ～ 3 可知，以芍药苷保留率为评价指标，直观分 析表明 3 因素作用大小为 A ＞ B ＞ C，最佳提取方案为 A2B2 C3;方差分析表明 A 因素影响有显著意义，B、C 因素无显 著意义。即白芍提取液的最佳澄清工艺条件为:药液浓度 比为 1 ∶ 10(生药 g ∶药液 mL) ，在 80 ℃恒温水浴及一定搅 拌速度下先加入 B组分 0． 8 mL /g，每 30 min搅拌 1 次，2 h 后在 60 ℃恒温水浴及一定搅拌速度下加入 A 组分 0． 4 mL /g，搅拌 10 min 后再升高温度至 80 ℃，保温静置 30 min，再搅拌 1 次。取出静置，离心，即得。 2． 5 与醇沉法澄清的比较 取“2． 2 项下”制备的样品溶 液 50 mL，边搅拌边加入乙醇使溶液中含醇量达到 80%，充 分搅匀，静置 24 h，抽滤，上清液回收乙醇后，加水补至 50 mL，取适量按“2． 3 项下”样品溶液中测定芍药苷含量的方 法进行含量测定，结果水提醇沉后溶液中芍药苷保留率为 63． 50%。 3 讨 论 影响 ZTC1 + 1 澄清剂作用的因素很多［2］，本文在前期 预实验和单因素考察的基础上，筛选了药液浓度、ZTC 用 量、温度作为正交设计的考察因素，结果表明药液浓度对 ZTC1 + 1 澄清效果有显著影响。 气血双补口服液原澄清工艺采取水提醇沉法进行 除杂，此法在去除杂质的同时也会导致部分有效成分的 流失，且操作繁琐，工时长，醇沉需要大量的乙醇，成本 价格也较高［3］。本实验结果表明，采用 ZTC1 + 1 澄清 剂处理后，与醇沉相比，其中药效成分芍药苷的保留率 显著提高。 大量的研究表明［3 － 4］，ZTC1 + 1 天然澄清剂可以有效 去除鞣质、蛋白质等亲水性杂质，对有效成分苷类、生物碱、 多糖等不影响。而气血双补口服液由黄芪、枸杞、茯苓、熟 地等 10 味中药组成，其中含有大量的多糖类等药效成分， 如黄芪多糖、枸杞多糖、茯苓多糖等，采用醇沉法进行澄清， 会导致大量的多糖类成分损失［5］。本实验分别对醇沉和 ZTC1 + 1 澄清后的沉淀进行多糖检测，结果表明醇沉后沉 淀法中含大量多糖类成分，而 ZTC1 + 1 澄清后的沉淀中几 乎不含多糖类成分，表明 ZTC1 + 1 澄清剂可以保留药液中 的多糖类成分。 本文中气血双补口服液处方药有 10 味中药，所含成分 非常复杂，经预实验考察，方中主药之一白芍所含芍药苷的 检测［6］较为方便操作，故选其作为指标进行评价，其他有 效组分的含量检测在以后工作中将进一步研究。 参考文献 ［1］ 傅建邦． ZTC1 + 1 澄清剂在复方板蓝根颗粒生产工艺中的 应用［J］．中国医药科学，2011，1(19) :142 － 147． ［2］ 汤淏，唐安福，崔恩忠，等． ZTC1 + 1 天然澄清剂在中药制剂 工艺应用中的影响因素分析［J］． 医学研究生学报，2012，25 (3) :324 － 326． ［3］ 祝志贤，梁秋文，程婉玲． ZTC1 + 1 天然澄清剂在清开灵口 服液制备工艺中的应用［J］．药学实践杂志，2009，27(4) :274 － 275． ［4］ 张咏梅，赵振彪，解淑阁，等． ZTC － III 型天然澄清剂在中风 安口服液制备中的应用［J］．中成药，2004，26(4) :338． ［5］ 湛琦，刘友平，王继森，等． 益肾通络颗粒澄清工艺研究［J］． 时珍国医国药，2007，18(5) :1159 － 1160． ［6］ 汤淏，崔恩忠，唐安福，等． HPLC 法测定气血双补口服液中 芍药苷的含量［J］．中国医药导报，2012，9(14) :127 － 128． 1041