刺五加皂苷对血管性痴呆大鼠脑组织微血管密度及VEGF表达的影响_金露

收稿日期:2013 － 01 － 10 基金项目:温州市科技局科技项目(Y20080161) 作者简介:金露(1976 －) ，女，浙江温州人，主治医师，硕士，研究方 向:脑血管病的临床与科研。 通讯作者:林燕(1969 －) ，女，浙江温州人，主任医师，硕士研究生 导师，研究方向:神经科疾病的临床与科研。 进细胞外基质在组织中大量堆积，逐渐被结缔组织取代，最 终导致组织纤维化、粘连［7 － 8］。本实验发现:各用药组均能 不同程度改善慢性炎性大鼠输卵管组织结构，减少输卵管 与周围组织的粘连，保持输卵管的通畅性，且抗炎通络灌肠 方各组疗效较桂枝茯苓丸组、庆大霉素组为好;同时与模型 对照组比较，各用药组输卵管组织 IL － 2、IL － 8、TGF － β1 蛋白的表达明显减少(均 P ＜ 0． 01) ，且抗炎通络灌肠方各 组明显少于桂枝茯苓丸组、庆大霉素组(均 P ＜ 0． 05) ;提示 抗炎通络灌肠方通过下调输卵管组织 IL － 2，IL － 8，TGF － β1的蛋白表达，可控制大鼠慢性输卵管炎症病情的发展，且 疗效好于桂枝茯苓丸组、庆大霉素组。 综上所述，抗炎通络灌肠方对慢性输卵管炎有显著治 疗作用，该作用可能与其改善输卵管周围的血液循环，增加 宫腔局部 SIgA的含量，减少输卵管组织 IL － 2、IL － 8、TGF － β1 的表达有关。 参考文献 ［1］ 程泾．妇科疑难病现代中医诊断与治疗［M］．北京:人民卫生 出版社，2003:864 － 869． ［2］ 赵广兴，王春田，马宝璋，等．大鼠输卵管炎性不孕症模型的 建立［J］．中国比较医学杂志，2004，14(1) :23 － 26． ［3］ Furr PM，Taylor － robinson D． The establishment and persistence of Uroaplasma urealyticum in oestradiol － treated female mice ［J］ ． Med Microbiol，1989，29(2) :111 － 114． ［4］ 徐听，梅乾茵，张明瑛．妇科消炎片对大鼠输卵管炎性阻塞影 响的实验研究［J］． 湖北民族学院学报(医学版) ，2002，19 (4) :26 － 28． ［5］ 汪月华，邹颂海．宫颈分泌型免疫球蛋白 A 对慢性盆腔炎的 诊断价值［J］．中国实用妇科与产科杂志，1998，14(6) :343 － 344． ［6］ 赵广兴，马宝璋，袁家麟．慢性盆腔炎输卵管病理与 IL － 2、IL － 8 的关系［J］．辽宁中医杂志，2003，30(9) :704 － 705． ［7］ 凌艳，李玉芳，李世彤． 输卵管阻塞性不孕 TGF—β1 的表达 与意义［J］．中国妇幼保健，2008，23:2752 － 2753． ［8］ 卢如玲，李莉，操红缨，等．盆炎康合剂对慢性盆腔炎大鼠盆 腔粘连及 TGF － β1 mRNA表达的影响［J］．中国现代药物应 用，2009，3(14) :90 － 91． 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1381 学 刊 刺五加皂苷对血管性痴呆大鼠脑组织 微血管密度及 VEGF表达的影响 金露，邵蒙蒙，杨秀艳，薛晓冬，林燕 (温州医学院附属第二医院神经内科，浙江 温州 325027) 摘 要:目的:探讨刺五加皂苷对血管性痴呆大鼠脑组织微血管密度 ( MVD) 及血管内皮细胞生长因子 ( VEGF) 蛋白及 VEGFmRNA表达的影响。方法:选用 40 只 SD雄性健康大鼠，随机分为 4 组，采用颈内动脉注射 微小栓子方法制作多发梗死性痴呆大鼠动物模型，进行 Morris水迷宫行为学测试和脑组织形态学筛选评估模型， 将造模成功大鼠予以刺五加皂苷干预，免疫组化检测大鼠脑切片 CD34 阳性 MVD 和 VEGF 的表达;实时荧光定 量 PCR法检测 VEGF mRNA的动态变化。结果:免疫组化结果显示模型组和刺五加皂苷组 CD34、VEGF 表达均 较假手术组、对照组增多( P ＜ 0． 01) ;刺五加皂苷组与模型组相比较 CD34 表达增多( P ＜ 0． 01) ，VEGF 表达增多 ( P ＜ 0． 05) ;实时荧光定量 PCR结果显示模型组与刺五加皂苷组的 VEGF mRNA表达均有显著差异，且刺五加皂 苷组比模型组表达明显增多( P ＜ 0． 05) 。结论:刺五加皂苷可促进毛细血管新生，改善血管性痴呆大鼠的记忆能 力，机制可能是刺激 VEGF表达。 关键词:血管性痴呆( VD) ;血管密度( MVD) ;血管内皮细胞生长因子( VEGF) ;刺五加皂苷( ASS) 中图分类号:R285． 5 文献标志码:A 文章编号:1673 － 7717( 2013) 06 － 1381 － 04 Effect of Acanthopanax Senticocous Saponins on Microvessel Density (MVD)and VEGF of Cerebral Tissue of Vascular Dementia in Rats JIN Lu，SHAO Mengmmeng，YANG Xiuyan，Xue Xiaodong，Lin Yan (Neurology Department，The Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Wenzhou 325027，Zhejiang，China) Abstract:Objective:To investigate the effect of acanthopanax senticocous saponins(ASS)on the expressions of mi- 1831 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1382 学 刊 crovessel density(MVD)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in vascular dementia rats． Mehtods:Forty male SD rats were randomly divided into four groups and the multiple infarction animal model of dementia was established by using retrograde intubation in external carotid artery． 7 days later，the Morris water maze behavior was performed to evaluat model test screening，the neurological behavior scores and the HE staining of brain slices were determined in the experi- ment groups． The expressions of VEGF and CD34 by immunohistochemistry(ICH)were semi － quantitatively analyzed by measuring the IOD /Area． The expression of VEGF mRNA was detected by Real － time fluorescence quantitative polymer- ase chain reaction(PCR)method． Results:The average escape latency of model group was significantly longer than those of sham operation group and control group(P ＜ 0． 05)． Compared with model group，the average escape latency enhanced ob- viously after the ASS treatment(P ＜ 0． 05)． The immunohistochemical results showed that the expressions of CD34 and VEGF were significantly higher in model group and ASS group than that in sham operation group and control group(P ＜ 0． 01)． Moreover，the expression of CD34 in ASS group was obviously higher than that in model group(P ＜ 0． 01) ，and the same as VEGF(P ＜ 0． 05)． Conclusion:ASS promotes the expression of VEGF in ischemic brain focal area，improves the process of brain injury and recovers the brain functions in rats． Key words:vascular dementia(VD) ;microvessel density(MVD) ;VEGF;Morris Water maze;acanthopanax sentico- cous saponins(ASS) 血管性痴呆(vascular dementia，VD)是指由脑缺血缺氧 所引起的获得性智能损害综合征，是老年期痴呆的主要类 型之一，目前临床预防和治疗尚无突破性进展。刺五加，味 辛、微苦，性温，归脾、肾、心经，有益气健脾，补肾安神之功 效［1］。现代药理学研究发现，刺五加具有免疫功能及中枢 神经系统、心血管系统的调节作用 ［2］。因此，本实验在建 立多发性梗死性痴呆动物模型的基础上，观察刺五加皂苷 对模型大鼠脑组织微血管密度及 VEGF 表达的影响，探讨 刺五加皂苷对血管性痴呆的治疗作用，从而为临床治疗提 供实验依据。 1 材 料 1． 1 动物及分组 健康雄性 SD大鼠，10 ～ 12 周龄，体重 250 ～ 300 g，由 上海实验动物中心提供(编号:SCXK(沪)2007 － 0005) ，温 州医学院实验动物中心动物房饲养，造模前经过 Morris 水 迷宫测试筛选淘汰行动慢、反应迟钝的大鼠后，留取 40 只 健康大鼠;随机分为对照组、假手术组、模型组及刺五加皂 苷组。 1． 2 主要仪器与试剂 Morris水迷宫及视频软件(上海吉量生物软件有 限公司) ，Trizol reagent 试剂为 Invitrogen 产品 (批号 100315) ，RT － PCR 试剂盒由 Fermantas 提供 (批号 1007820) ; ;引物及内参照均由上海基康公司提供(批号 1007812)。VEGF兔多克隆抗体、CD34 兔多克隆抗体，北 京博奥森生物科技有限公司(批号 2010532)、兔二抗 PV6000，北京中杉金桥生物技术有限公司(批号 100625)。 1． 3 药物 刺五加皂苷，纯度 85%的粉末，由温州市医药公司购 买(批号 20100724) ;试验时以蒸馏水配制浓度为 0． 5%，经 过 0122 μm孔径滤膜过滤除菌后使用。 2 方 法 2． 1 动物模型制作 大鼠适应性喂养 1 周后，采用颈内动脉注射微小栓子 方法造模，建立多发性梗死性痴呆动物模型［3 － 5］。假手术 组采用同样的手术方法，但未进行微栓子注射。 2． 2 给药 刺五加皂苷组:经胃管给予刺五加皂苷悬液，剂量 1 mL /100 g，每日 1 次，疗程 7 d;同时对照组、假手术组及模 型组:给予等体积的生理盐水，每日 1 次，疗程 7 d。 2． 3 动物模型成功的判断 7 d后行 Morris水迷宫实验，连续训练 5 d。取第 5 d 对照组大鼠逃避潜伏期的均值为参考值，同时计算模型组 大鼠第 5 d的平均逃避潜伏期与参考值之差占该鼠的平均 逃避潜伏期时间的比值，该值 ＞ 20%定为痴呆鼠［5］。根据 该方法模型组和刺五加皂苷组各有 2 只因比值 ＜ 20%被淘 汰，模型组、刺五加皂苷组各有 8 只进入后续实验。 2． 4 神经行为学评分 术后各组大鼠分别进行神经功能学评分。参照 Longa 等 5 分法［6］，制评分:0 分，无神经缺损症状;1 分，不能 完全伸展对侧前爪;2 分，行走时转圈;3 分，行走时向对侧 倾倒;4 分，不能自发行走，意识受到抑制;5 分，死亡。其中 0 分和 5 分的大鼠不计入实验。 2． 5 大鼠学习记忆能力测试 Morris水迷宫实验，每日将模型大鼠按 I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ象 限的顺序从各入水点(各象限水池壁中点)靠池壁放入水 中， 60 s内大鼠从水中爬上站台所需时间为逃避潜伏 期，连续训练 5 d，记录第 5 d时间。 2． 6 组织切片的制备 各组大鼠完成学习记忆测定后，以 10%水合氯醛(0． 5 mL /100 g)腹腔注射麻醉，打开胸腔，经心脏灌注 0． 9%的 生理盐水，剥取脑组织，以视交叉到枕叶处两点冠状切片， 取大鼠脑最宽部位(海马冠状位)约 5 mm，常规固定、脱 水、透明、浸蜡、包理、切片 4 μm 厚，进行相应染色，观察组 织学改变。 2． 7 HE染色 将石蜡切片，常规脱蜡、乙醇梯度脱水、苏木素 －伊红 染色，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察。 2． 8 微血管密度测定 免疫组化染色严格按照随试剂所附说明要求操作。任 何被 CD34 抗体染成棕黄色孤立的内皮细胞或内皮细胞簇 2831 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1383 学 刊 团，只要与邻近微血管或其他结缔组织分开，就将其作为一 个微血管;只要结构不相连，，其分支结构也视为一血管。 微血管密度(MVD)测定参照 WEIDNER 的微血管计数方 法［7］:先于低倍镜(40 ×)下观察全部视野，每张切片选择 3 个富含血管组织的“热点”区，再于高倍镜(200 ×)下双盲 法计数微血管。每例标本分别计数 5 个视野，取其平均值， 结果以平均值 ±标准差表示。 2． 9 免疫组化法测定 VEGF蛋白表达 采用 SP二步法进行，简要步骤如下:经过脱蜡→孵育 →PBS→DAB显色等过程。结果判定:VEGF阳性表达细胞 为胞浆呈现棕黄色。每只大鼠任取 3 ～ 4 张免疫组化切片， 在同一放大倍数(40 × 10)下，于脑缺血梗死周围随意选取 5 个视野摄片，用 IPP6． 0 图像分析软件对阳性表达的区域 测定 IOD /Area值。 2． 10 实时荧光定量 PCR法(RT － PCR)检测 VEGF mRNA 2． 10． 1 采集脑组织标本 各组大鼠断头取脑后，取梗死 灶周围组织在 l‰的 DEPC水中稍作漂洗，立即放入细胞冻 存管中，液氮中保存备用。 2． 10． 2 大鼠脑组织总 RNA 的提纯 将冻存大鼠脑组织 称重，100 mg /mL的比例加 Trizol 后进行组织匀浆，室温放 置 5 min后按 1 /5 体积加入氯仿，用力振荡 15 s，室温静置 3 min;4 ℃ 11500 r /min，离心 15 min，取上清液，加等体积 异丙醇上下颠倒数次，室温静置 10 min，4℃ 11500 r /min离 心 10 min，弃去上清液;用 75%乙醇洗涤沉淀 2 次，4 ℃ 9150 r /min离心 5 min，用 DEPC水溶解沉淀，并测 OD值后 分装 － 70 ℃保存。(逆转录反应按照试剂盒说明进行操 作)。 2． 10． 3 RT － PC 分析 大鼠脑不同组间 VEGF 及 p － CREB mRNA的表达，采用 Promega RT － PCR 一步法成套 试剂盒。实验时用 GAPDH作内参。见表 1。 表 1 RT － PC分析 指标 引物 VEGF Left 5’－ GCC CTG AGT CAA GAG GAC AG －3’ (170bp) Right 5’－ CAG GCT CCT GAT TCT TCC AG －3’ GAPDH Left 5’－ TGC CAC TCA GAA GAC TGT GG －3’ (182bp) )Right 5’－ CAA CGG ATA CAT TGG GGG TA －3’ 2． 10． 4 结果观察 取 5 μL PCR 扩增产物加 1 μL DNA 载样缓冲液混匀，在 2%的琼脂糖凝胶电泳，110 V，电泳 30 ～ 40 min，在 SmartView 凝胶成像系统下拍照分析。将 VEGF的扩增条带的灰度值与内参照 GAPDH 电泳条带灰 度值的比值，作为 VEGFmRNA表达水平的指标。 2． 11 统计分析处理 所有计量资料均以(珋x ± s)表示，使用 SPSS 10． 0 统计 软件进行单因素方差分析和最小显著差(LSD)t 检验，取 α = 0． 05 作为检验水准。 3 结 果 3． 1 神经行为学评分 假手术组大鼠均未出现明显的神经功能缺损表现，神 经行为评分 0 分。模型组和刺五加皂苷组均出现不同程度 的神经功能缺损表现，与假手术组比较，术后 2 h 模型组、 刺五加皂苷组比较均有显著差异(P ＜ 0． 05) ，模型组大鼠 神经行为学评分与刺五加皂苷组比较差异不显著，见表 2。 表 2 各组大鼠神经行为学评分(n = 8，珋x ± s ) 组别 n 术后第 2 h 术后第 7 h 假手术组 10 0． 00 0． 00 模型组 8 1． 62 ± 0． 74* 0． 42 ± 0． 52 刺五加皂苷组 8 1． 50 ± 0． 53* 0． 38 ± 0． 52 注:与假手术组比较，* P ＜ 0． 05。 3． 2 VD模型大鼠给药前后 Morris水迷宫平均潜伏期情况 与对照组比较，假手术组、模型组、刺五加皂苷组在 Morris水迷宫中平均逃避潜伏期均有所延长，给药前后模 型组和刺五加皂苷组与假手术组比较有显著差异(P ＜ 0． 05)。给药前后自身比较:模型组、假手术组、对照组均无 差异性，但刺五加皂苷组前后的平均潜伏期差异显著(P ＜ 0． 05)。见表 3。 表 3 给药前后各组间平均潜伏期(珋x ± s) 组别 n 给药前 给药后 对照组 10 26． 36 ± 3． 59 23． 57 ± 2． 95 假手术组 10 29． 09 ± 7． 39 24． 89 ± 2． 21 模型组 8 52． 18 ± 16． 38* 59． 17 ± 10． 02* 刺五加皂苷组 8 54． 57 ± 17． 00* 32． 35 ± 5． 13＊▲ 注:与假手术组比较，* P ＜ 0． 05;给药前后比较，▲P ＜ 0． 05。 3． 3 HE染色光镜观察 假手术组大鼠脑组织结构正常，海马区结构组织结构 完整，神经元排列整齐、规则。模型组大鼠脑组织额叶、纹 状体和海马中神经元脱失明显，结构紊乱，残存细胞多无完 整细胞结构，出现胞体缩小呈三角形，胞浆嗜伊红，细胞核 固缩深染，核仁消失。另见血管内皮细胞肿胀，血管周围间 隙扩大，但缺血周边区皮层未见明显神经元脱失，以固缩神 经元为主。见插页Ⅶ图 1。 3． 4 各组大鼠脑组织微血管密度(MVD)测定 MVD的测定采用 CD34 标记血管内皮细胞，光镜下可 见其被染成棕黄色，另可见少量神经元亦有着色。模型组、 刺五加皂苷组 CD34 在大脑各部位均有表达，与假手术组 及正常组比较有统计学意义(P ＜ 0． 01)。其中，与模型组 比较，刺五加皂苷组 CD34 表达有所增多(P ＜ 0． 01)。见插 页Ⅶ图 2，表 4。 表 4 各组大鼠脑组织中 CD34 表达量(n = 8，珋x ± s ) 组别 CD34(IOD /Area值) 对照组 0． 000516 ± 0． 000372 假手术组 0． 002429 ± 0． 000663* 模型组 0． 004482 ± 0． 001243＊▲ 刺五加皂苷组 0． 006008 ± 0． 001644＊▲◆ 注:与对照组比较，* P ＜ 0． 01;与假手术组比较，▲P ＜ 0． 01; 与模型组比较，◆P ＜ 0． 01。 3． 5 各组大鼠脑组织 VEGF表达水平． 对照组见少量 VEGF阳性细胞表达;假手术组、模型组 和刺五加皂苷组均可见 VEGF 阳性表达，表达细胞主要为 神经胶质细胞，其次为神经细胞及血管内皮细胞;阳性表达 区域主要位于皮层下区、纹状体和海马区的梗死灶周围，胞 浆棕黄色着色，见插页Ⅷ图 3。模型组、刺五加皂苷组和假 3831 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1384 学 刊 手术组相比 VEGF表达量明显增多，差异显著(P ＜ 0． 01)。 模型组和刺五加皂苷组比较，刺五加皂苷组表达增多(P ＜ 0． 05) ，假手术组与对照组比较差异不显著，见表 5。 表 5 各组大鼠脑组织中 VEGF表达量(n = 8，珋x ± s ) 组别 VEGF(IOD /Area值) 对照组 0． 001583 ± 0． 000918 假手术组 0． 001789 ± 0． 000859 模型组 0． 006884 ± 0． 002378＊▲ 刺五加皂苷组 0． 008044 ± 0． 001640＊▲◆ 注:与对照组比较，* P ＜ 0． 01;与假手术组比较，▲P ＜ 0． 01; 与模型组比较，◆P ＜ 0． 05。 3． 6 实时荧光定量 PCR 法测定各组大鼠脑组织 VEGF mRNA的变化 与对照组相比较，刺五加皂苷组、模型组及假手术组 VEGF的表达量分别是它的 2． 28、1． 65、1． 09 倍。 表 6 各组大鼠脑组织 VEGF mRNA的变化(ΔΔCT 算法) 组别 VEGF 平均 CT GAPDH 平均 CT ΔCT ΔΔCT 2 － ΔΔCT 对照组 15． 98 ± 0． 26 11． 33 ± 0． 12 4． 65 ± 0． 25 0． 00 ± 0． 25 1． 00(0． 84 － 1． 19) 假手术组 15． 85 ± 4． 43 11． 32 ± 0． 12 4． 53 ± 0． 45 － 0． 12 ± 0． 45 1． 09(0． 80 － 1． 48) 模型组 15． 14 ± 0． 51 11． 21 ± 0． 12 3． 93 ± 0． 48* － 0． 72 ± 0． 48 1． 65(1． 18 － 2． 30) 刺五加皂苷组 14． 76 ± 0． 74 11． 31 ± 0． 11 3． 46 ± 0． 76＊▲－ 1． 19 ± 0． 76 2． 28(1． 35 － 3． 86) 注:与对照组比较，* P ＜ 0． 05;与模型组比较，▲P ＜ 0． 05。 4 讨 论 VD是与脑血管疾病有关的获得性智能及认知功能障 碍的临床综合征，多发脑梗死性痴呆是血管性痴呆最常见的 类型。随着社会人口老龄化和脑卒中治疗存活率的提高， VD的发病率越来越高，而目前尚缺乏有效地治疗手段。 目前常用的 VD动物模型有血管阻断 VD 模型和血管 内栓塞 VD模型。前者主要包括四血管阻断全脑缺血模型 (4 － V0)、两血管阻断模型(2 － VO)及大脑中动脉阻塞模 型;而本实验采用的颈内动脉注射微小栓子模型则属于后 者。本方法具有不需开颅，缺血效果好等优点，能较好模拟 临床多发性梗死性痴呆的发病过程［7］。本研究通过观察 造模后大鼠的神经行为、学习记忆能力以及脑组织中神经 元的病理改变明确 VD动物模型的成功建立。 脑缺血后脑血流的恢复是至关重要的，血管新生是改 善脑组织血流供应的一种有效的方法，MVD是普遍采用的 能够较直观和有效反应血管新生数目的指标［8］。脑缺血 后血管新生机制复杂，由多种促血管生长因子参与，VEGF 是主要的调控因子，可特异性地作用于血管内皮细胞，诱导 内皮细胞增殖以及毛细血管瓣生成，促进新生血管生成，对 生理性血管生成和病理性血管再生都有很重要的调节作 用，还具有增加毛细血管的通透性以及神经营养保护作用， 组织缺血缺氧是诱导表达的强刺激因素，表达增多对脑缺 血后的神经细胞恢复起重要作用［9 － 10］。刺五加皂苷是从 中药刺五加中经提取纯化制成的，根据国内外的大量研究 表明［11 － 12］，刺五加皂苷能降低血粘度和红细胞压积，降低 纤维蛋白原，抑制血小板凝聚，有效地预防血栓形成;同时 还能扩张血管，促进血液流动增加脑血流量，增加脑组织对 缺氧的耐受性，，改善脑供血，对脑血管疾病具有保护作 用［13］。本实验结果显示，首先，在 Morris 水迷宫中，，与模 型组大鼠及用药前刺五加皂苷组大鼠的逃避潜伏期相比， 用药后的刺五加皂苷组大鼠的逃避潜伏期明显缩短，提示 刺五加皂苷可以明显改善血管性痴呆大鼠的学习记忆和空 间能力;其次，还发现与假手术组及对照组比较，模型组、刺 五加皂苷组 CD34 表达上升，而与模型组比较，刺五加皂苷 组 CD34 表达明显增多，表明缺血缺氧后血管性痴呆大鼠 存在血管新生，而刺五加皂苷能够更好促进血管新生;最 后，本实验还发现，与假手术组相比，模型组、刺五加皂苷组 VEGF表达明显增多，与模型组比较，刺五加皂苷组 VEGF 表达显著性增多，表明缺血缺氧刺激缺血区域的 VEGF 表 达，VEGF参与了缺血区域的微血管形成和血流改善，刺五 加皂苷能明显刺激 VEGF表达。 因此，本实验发现，刺五加皂苷可以明显改善血管性痴 呆大鼠模型的学习记忆和空间能力，促进血管新生，明显刺 激 VEGF 表达，因此，刺五加皂苷改善大鼠的学习记忆能 力，促进血管新生，可能与刺激 VEGF进一步表达有关。 参考文献 ［1］ 金爽，张迎，李月，刺五加的研究进展［J］． 黑龙江中医药， 2011，40(1) :54 － 55 ［2］ 刘起华，朱礼，李文兰，等．刺五加主要活性成分化学与药理 研究［J］．时珍国医国药，1999，10(4) :305 ［3］ Kaneko D，Nakamura N，Ogawa T． Cerebral infarction in rats u- sing homologous blood emboli:Development of a new experimen- tal model［J］． Stroke，1985，16(5) :76 － 84． ［4］ 梅建勋，张云岭，张伯礼，等．多发梗塞性痴呆大鼠模型的改 进与应用［J］． 中国中西医结合杂志，2000，20(2) :113 － 115． ［5］ 孟红旗，齐永乐，血管性痴呆的动物模型［J］． 佛山科学技术 学院学报(自然科学版) ，2009，27(3) :65 － 68 ［6］ Longaez EI，Weinsteinpr PR，Carlson S，et al． Reversible middle cerebral artery occlusion without cranioto myinrat［J］． Stroke， 1989，20(1) :8 － 13． ［7］ 扈荣钟，晓明．血管性痴呆动物模型的研究概况［J］． 浙江中 医药大学学报，2008，32(1) :137 － 138． ［8］ Yang H，Kim C，Kim MJ，et al． Impaired arterogenic response to acute hindlimb ischemia in CD4 － knockout mice［J］． Circula- tion，2003，108(2) :205 － 210． ［9］ Ma Y，Qu Y，Fei Z． Vascular endothelial growth factor in cere- bral ischemia［J］． J Neurosci Res，2011，89(7) :969 － 978． ［10］ 章燕幸，陈怀红，闻树群，等．急性脑梗死患者血清血管内皮 生长因子的变化［J］．中国病理生理杂志，2009，25(6) :1219 － 1221． ［11］ Huang L，Zhao H，Huang B，et al． Acanthopanax senticosus:re- view of botany，chemistry and pharmacology［J］． Pharmazie， 2011，66(2) :83 － 97． ［12］ 陈剑锋，田小武，张烽．银杏内酯、刺五加皂甙对体外培养大 鼠脊髓运动神经元缺血缺氧的作用［J］． 中国脊柱脊髓杂 志，2006，16(9) :704 － 708． ［13］ 谢湘林，邹洪斌，李晔，等．刺五加注射液对血管性痴呆大鼠 的治疗作用［J］． 中国老年学杂志，2010，30(9) :1245 － 1247． 4831 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 Ⅶ 学 刊 刺五加皂苷对血管性痴呆大鼠脑组织微血管密度及 VEGF表达的影响 (正文见 1381 － 1384 页) 图 1 HE染色显示脑组织神经细胞形态及数目(× 400) 图 2 CD34 免疫组化脑组织表达情况(× 400) 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 Ⅷ 学 刊 图 3 VEGF免疫组化脑组织表达情况(× 400)