阿奇霉素分散片人体生物等效性评价

28 J Bengbu Med Coll，January 2008，Vo1．33，No．1 [文章编号]1000—2200(2008)01-0028-03 ·大学 生科技 园地 · 阿奇霉素分散片人体生物等效性评价 耿新辉 ，陈方剑 ，陈建国 ，于晶晶 ，马 涛 ，李见春 [摘要]目的：评价阿奇霉素分散片的人体生物等效性。方珐：20名男性健康志愿者随机交叉口服阿奇霉素分散片受试制剂和 参比制剂各 500 mg，采用高效液相色谱 一质谱法(LC—MS)测定血药浓度。以 DAS 2．0软件计算其药动学参数，考察其生物等 效性。结果：阿奇霉素分散片受试制剂和参比制剂的差异均无统计学意义(P>0．05)。以AUC ：卟计算，受试阿奇霉素分散 片相对生物利用度为(119．6±52．9)％。结论：阿奇霉素分散片受试制剂和参比制剂具有生物等效性。 [关键词]生物学效用；阿奇霉素；高效液相色谱 一质谱法 [中国图书资料分类法分类号]R 969．4；R 978．15 [文献标识码]A Pharmacokinetics and bioequivalent of azithromycin dispersible tablets in healthy volunteers GENG Xin—hui ，CHEN Fang—jian ，CHEN Jian—guo ，YU Jing—jing ，MA Tao ，LI Jian—chun (1．2003 Grade，Faculty of Pharmacy，2．Department of Pharmaceutics，Bengbu Medical College，Bengbu Anhui 233030，China) [Abstract]Objective：To evaluate the bioequivalence of two domesti~preparations of azithromycin in healthy volunteers．Methods：A single oral dose of 500 mg test or reference formulations were given to 20 male healthy volunteers in a randomized cross—over desfgn．The serum concentration of azithromycin was determined by liquid chromatography—tandem mass spectrometry method．Pharmacokinetic parameters and relative bioavaflability were calculated by DAS program．Results：Pharmacokinetic parameters of test and reference were not statistically difierent(P>0．05)．The relative bioavailability of test was(1 19．6±52．9)％．Conclusions：The test and reference formulations were bioequfvalent． [Key words]biological availability；azithromycin；liqufd chromatography—tandem mass spectrometry 阿奇霉素是新一代大环内酯类抗生素，其通过 阻碍细菌转肽过程，从而抑制细菌蛋白质的合成，作 用机制与红霉素相同，主要与细菌核糖体的50S亚 单位结合，抑制依赖于 RNA的蛋白合成⋯。临床用 于化脓性链球菌引起的急性咽炎、急性扁桃体炎；敏 感细菌引起的鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性 支气管炎急性发作等。本试验采用高效液相色谱 一 质谱法(LC—MS)对江苏苏中药业集团股份有限公司 研制生产的阿奇霉素进行药代动力学研究，评价其 与市售制剂是否生物等效。 1 材料与方法 1 ．1 药品与试剂 受试制剂：阿奇霉素分散片，每 片250 mg，批号：041123，江苏苏中药业集团股份有 限公司研制；参比制剂：阿奇霉素分散片，每片 250 mg，批号：20050922，江苏黄河药业股份有限公司； 阿奇霉素对照品(每 1 mg含阿奇霉素 964 U)，中国 药品生物制品检定所；内标：红霉素对照品(每 1 mg 含红霉素 946 U)，中国药品生物制品检定所；甲醇、 [收稿日期]2007-06-04 [作者单位]蚌埠医学院 1．药学系2003年级；2．药剂学教研室，安 徽 蚌埠 233030 [作者简介]耿新辉(1985一)，男，学生． [通讯作者]李见春，硕士，讲师． 异丙醇由MERCK公司生产；色谱纯；甲酸由宜兴市 化学试剂三厂生产，分析纯；水：三重蒸馏水，自制。 1．2 仪器 美 国 Finnigan公 司 LCQ Advantage MAX(包括：ESI离子源，Surveyor LC pump，Surveyor Autosample，Xcalibur 1．3软件)；ALC4239R型高速 大容量台式离心机，意大利产。 1．3 研究对象 20名男性健康志愿者均为在校学 生，体重(65．2±5．6)kg，年龄(22．3±1．9)岁，均 无药物过敏史，无肝、肾疾病史，精神状态良好，全面 体格检查均正常(其中包括肺部听诊、肝脾触诊、心 电图、心率、血压、肾功能、肝功能、血常规及尿常规 等)。受试者在被告知所有与药物有关可能的不良 反应后，自愿签署知情同意书。受试者在受试前两 周至整个试验过程未服用别的药物，禁烟酒。 1．4 试验设计 20名受试者根据体重系数随机分 成两组，每组 10名，服药前禁食 10 h以上，于次日 早晨7：30分别空腹服用阿奇霉素分散片 500 mg， 用 200 ml温开水送服。分别在给药前及给药后 0．5、1、1．5、2、3、4、6、8、12、24、48、72、96、120 h从受 试者肘静脉采血约 3 ml。血样经离心取血清，置 一 20℃冰箱中保存待测。测试者服药后在观察室 中停留12 h，服药2 h后方可适量饮水，4 h后统一 进标准餐。在临床医生的监护下，观察受试者不良 反应发生情况以及一般情况。受试者在服药后避免 剧烈活动，亦不得长时间卧床。2周后两组交叉给 维普资讯 http://www.cqvip.com 蚌埠医学院学报 2008年 1月第33卷第 1期 药，方法同前。 1．5 血药浓度测定 1．5．1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Luna CN 柱，2．0 mm x 100 mm，3 m(广州菲罗门科学仪器 有限公司)；流动相：甲醇：异丙醇：水(含0．1％甲 酸)=65：5：30；流速0．2 ml／rain；柱温为20 qC。 1．5．2 质谱条件 离子源为 ESI源；电喷雾电压 4．5 kV；加热毛细管温度270℃；正离子方式检测， 扫描方式为选择反应监测(SRM)，用于定量的离子 为阿奇霉素m／z 749．4和内标红霉素m／z 734．3。 1．5．3 血清样品处理 精确吸取0．1 ml血清加入 带盏5 ml试管中，精密加入1．5 ml红霉素内标 溶液l0 l，涡旋1 min混匀，再加入0．3 ml甲醇，涡 旋3 rain，16 000 r／rain离心10 rain，取上清液l0 l 进样LC-MS测定。 1．6 方法的专属性 将空白血清、空白血清加阿奇 霉素对照品和内标对照品溶液及服药后血清样品按 “血清样品处理”项下处理后，用 LC—MS测定，所得 图谱见图l。阿奇霉素的保留时间为3．98 rain，内 标红霉素的保留时间为2．88 rain，空白血清中内源 性物质不干扰阿奇霉素及内标的测定。 1．7 标准曲线 分别精密吸取不同浓度的阿奇霉 素对照晶溶液20 l于离心管中，氮气吹干后加入 200 l空白血清配成相当于阿奇霉素血清浓度为 4．7、9．4、18．8、37．5、75．0、150．0、300．0和 600．0 g／L的样品，按“血清样品处理”项下依法操作，以 待?贝0物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比 值为纵坐标用加权(W=1／X)最小二乘法进行线形 回归，求得直线 回归方程即为标准曲线： = 0．009 7X+0．0l1 9，r=0．999 8(n=5)，结果表明阿 奇霉素在4．7—600 g／L范围内线性良好。 1．8 精密度与回收率 取空白血清，配制阿奇霉素 低、中、高三个浓度(9，4、37．5和150．0 g／L)的样 品，每一浓度进行5样本分析，连续测定3天，计算 日内、日间变异系数、相对回收率，评价方法的精密 度。血清样品低、中、高三个浓度日内、日间相对标 准差(RSD％)低浓度<20％，中、高浓度<15％，低、 中、高三个浓度 的平均回收率为 70．20％ 一 86．63％ 。 1．9 稳定性实验 按标准曲线配制方法配制阿奇 霉素浓度为高、中、低三个浓度(9．4、37．5和150．0 L)各4份样本，分别立即处理(0 h)、24 h室温 放置、24 h反复冻溶及7天冷冻等不同条件下考查 样品的稳定性。放置不同时间段 RSD％ <15％，表 明血清样品在室温放置和冷冻储存等情况下稳定。 29 l ] sANA：42 0 5n422 、 9 l 5 茎：80 RI： ISN ／＼ ；∞= 7 誊 A 二三二兰 一 ．．： 一!=： 一 RT：2 93 RT 0 00 4 98 SM：15G AA：107 Ⅻ 臻 ～⋯ ～ 耋 ⋯ - ～ 釜 ／l _＼ 0j —— ———— 一 g ! ： ：： ：：；：：； ； 一 一 RT·2 89 RT“ 3l A~： 3 6 10 鬟霉 2 ⋯ ⋯ -ll 一 ⋯ 。。 。 ’。 ’ 2。 2 3 0 3 5 4 0时 (minl 4 5 A：空 白血清 ；B：空白血清加入阿齐霉素 和内标红霉素： C：2号受试者口服 500 mg阿齐霉素分散片 1．5 h后的 样品；1：阿齐霉素；2：内标红霉素 图 1 测定血清中阿齐霉素及内标红霉素的典型SRM色谱图 1．10 统计学方法 血药浓度经 DAS 2．0软件处 理，计算药动学参数及相对生物利用度。T 、C 为实测值，AUC用梯形法计算。受试制剂与参比制 剂的C 、AUC ： AUC。一 经对数转换后采用交叉 试验设计的方差分析，分析药剂间、个体间和周期间 变异的统计学意义。C⋯、AUC ： AUC。一 经对数 转换后进行双向单侧 t检验，受试制剂 AUC在参比 制剂的80％ ～125％作为等效标准，c⋯在参比制剂 的70％ ～143％作为等效标准，对 T⋯采用非参数法 检验进行考察，以此来评价受试制剂与参比制剂是 否生物等效。 2 结果 2．1 血药浓度 一时间曲线 20名健康志愿受试者 交叉口服试验制剂阿奇霉素分散片和参比制剂阿奇 霉素分散片后血药浓度 一时间曲线见图2。 维普资讯 http://www.cqvip.com 30 6OO 5OO 4OO 300 2oo lOO O 图2 20名健康受试者交叉口服阿齐霉素分散片试验制剂和 参比制剂500 mg后的平均血药浓度一时间曲线 2．2 主要药动学参数 受试者口服阿奇霉素分散 片试验制剂和参比制剂 500 mg后的主要药动学参 数见表 1。 表 1 健康受试者曰服阿奇霉素分散片的主要药动学参 数比较(n，=20； ±S) 制剂类型 Cmax m a x： ／2 A．UCo～1．! Oh一。 A．UC～o_p~g／L) h h． 。 ( (h) (h) ( ·～·L )( g·～·L ) 2．3 生物利用度和生物等效性评价 20名完成试 验的男性健康受试者口服试验制剂与参比制剂血药 浓度经时过程，经药代动力学参数计算，阿奇霉素分 散片试验制 剂和参 比制剂之间 In(AUC 如 )、 In(AUC。一 )、In(C 。 )问差异均无统计学意义(F = 1．755、1．355和 0．203，P>0．05，MS组内=0．052、 0．068和 0．203)；经 双 向 单 侧 t检 验，ln (AUC0 nh)、In(AUC。一 )的置信区间在 80％ ～ 125％范围内，ln(C )的置信区问在 70％ ～143％ 范围内，表明两种制剂在吸收程度和达峰浓度上具 J Bengbu Med Coil，January 2008，Vo1．33，No．1 有生物等效性。T 经非参数法检验差异无统计学 意义(P>0．05)。 3 讨论 有关血样中阿奇霉素的测定方法，有文献报道 采用微生物检定法 。J，但是阿奇霉素的原形药物 和代谢物都有活性，所以此法的缺点是专属性差。 阿奇霉素为大环内酯类抗生素，其结构决定了紫外 线吸收较弱，如取其末端吸收210 nm波长处测定， 响应值较低，难以满足药物动力学测定要求 曲J。 本文采用的LC-MS法测定人血清的阿奇霉素含量， 血清中内源性物质不干扰阿奇霉素和内标的测定， 在4．7～600．0 L浓度范围内线形良好，最低检 测浓度为4．7 L，检测方法稳定可靠，适用于阿 奇霉素的药动学和生物等效性研究。 本文结果表明，20名健康受试者口服阿奇霉素 分解片受试制剂和参比制剂各 500 mg，主要药动学 参数 C⋯、AUC 0_l 0h、AUC0一 差异均无统计学意义， 两制剂具有生物等效性。以参比制剂阿奇霉素分散 片为标准对照，受试制剂阿奇霉素分散片的相对生物 利用度为(119．6±52．9)％(n=20，以AUC 0_11nh计)。 [ 参 考 文 献 ] [1] 王 佩，李玉珍．新大环内酯类抗生素 一阿奇霉素[J]．中国新 药杂志，1996，5(3)：18O一183 [2] 石 晶，宋洪杰，李 珍，等．阿奇霉素的人体药物动力学及相 对生物利用度[J]．中国医药工业杂志，2001，32(5)：215— 2l7 [3] 陈 炜，来彩霞，刘党生，等．阿奇霉素分散片的人体相对生物 利用度[J]．沈阳药科大学学报，2000，17(5)：316—318． [4] 刘晓云，公方美．HPLC法测定阿奇霉素分散片的含量[J] 齐 鲁药事，2005，25(11)：668—669 [5] 黄健浩 高效液相色谱法测定阿奇霉索颗粒的含量[J] 海峡 药学，2006，18(2)：73—74 [6] 韩金霞，杨 昆，董伟林 高效液相色谱法测定血液中阿奇霉 素浓度『J]．中国药学杂志．2005，40(8)：632—633． 医学论文中常用标点符号的正确使用(三)：冒号 常用于提示性(如原因、方法、材料、措施等)或诸如“说、想、认为、指出、证明”等词之 后以提示下文，也可用来表示后面的话是前面意思的概括，过去尚用于文内小标题之后。 在医学论文中，冒号的用法有了诸多的改进与引申，比如：(1)文章题名与副题名间应用冒 号(不能再用破折号)，冒号后的副题名，对题名有引申、解释及更加吸引读者的作用；(2)采用 “阿拉伯数字分级编号”法之后，文内各级标题后不再加冒号，而采用空一格的方式转行或接写 有关内容；(3)科技文稿中在诸如发现、指出、证明等动词后多用逗号，而不用冒号。 《蚌埠医学院学报》编辑部 维普资讯 http://www.cqvip.com