HPLC 法分离测定枸橼酸托瑞米芬的E-异构体

五、讨论 11 头孢氨苄甲氧苄啶胶囊对细菌生长有强抑 制作用, 药典的三株验证实验用菌株金黄色葡 萄球菌、枯草芽孢杆菌及大肠埃希菌对头孢氨苄甲 氧苄啶胶囊均较为敏感, 所以头孢氨苄甲氧苄啶胶 囊细菌数测定必须采用薄膜过滤法。 头孢氨苄甲氧苄啶胶囊中含有甲氧苄啶, 根据 磺胺类药需要加入钝化剂中和, 我们取1% 对氨基苯 甲酸溶液 015m l 至 100m l pH 710 的无菌氯化钠2蛋 白胨缓冲溶液作为稀释剂。 参照头孢类无菌检查中添加青霉素酶的做法, 我们取2m l 青霉素酶加入100m l 营养琼脂培养基中 制成含青霉素酶营养琼脂平板, 再转膜贴至含青霉 素酶营养琼脂平板培养, 冲洗量仅需 300m lö膜, 三 株验证菌的回收率均符合规定。 21 由于本品对真菌没有抑制作用, 验证实验 中, 采用常规法测定即可满足白色念球菌和黑曲霉的回收率要求, 故进行霉菌及酵母菌计数时无需采用薄膜过滤法。31 对于控制菌检查, 由于本品对大肠埃希菌具有抑菌活性, 取 1∶10 供试液上清液 10m l, 加至100m l pH 710 的无菌氯化钠2蛋白胨缓冲溶液中, 混匀, 全量通过薄膜后, 参照细菌计数测定方法进行薄膜过滤处理, (冲洗量: 每次100m l, 冲洗3 次, 最后一次冲洗量中加入 10～ 100CFU öm l 的大肠埃希菌1m l) , 转膜至含 2m l 青霉素酶的 100m l 胆盐乳糖增菌液, 与不加供试液的阳性对照比较, 生长良好, 故控制菌检查应按薄膜过滤法检验。参考文献[ 1 ] 中华人民共和国药典 2005 年版 (二部) 化学工业出版社, 附录,91, 93[ 2 ] 马越, 特玉香, 杜平华, 苏德模, 胡昌勤. 16 种中成药微生物限度检查法方法验证. 中国药品标准, 2005, 6 (12) : 356 作者简介: 黄巧巧, 女, 药师ö硕士。学科及研究方向: 药物分析。联系电话: 013757119895。 HPLC 法分离测定枸橼酸托瑞米芬的E-异构体 黄巧巧①　左　锋② (①浙江省药品检验所　杭州 310004; ②宁波天衡制药有限公司) 摘要　目的: 建立H PL C 法测定枸橼酸托瑞米芬杂质E2异构体的含量。方法: 采用以三十烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱 柱, 015% 三乙胺溶液 (用磷酸调节pH 值至 310) 2乙腈2四氢呋喃 (55∶40∶5)为流动相, 检测波长为 240nm。结果: E2异构体最 低检出限为 5ng。结论: 方法简便、高效、快速, 为枸橼酸托瑞米芬杂质E2异构体的测定提供了一种新方法。 关键词　H PL C 法; 枸橼酸托瑞来芬; E2异构体 中图分类号: 92112　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 100923656 (2007) 2525422 Separa tion and D eterm ina tion of E- Isom er in Torem ifene C itra te by HPLC H uang Q iao2qiao①, Zuo Feng② (①Z hej iang Institu te f or D rug Con trol, H ang z hou 310004; ②N ing bo T eamp harm Co. , L TD ) Abstract Objective: A n H PL C m ethod fo r determ ination of E2isom er as impurity in To rem ifene C itra te w as estab lished. M ethod:A co lum n w ith C30 as stat ionary phase w as used w ith mob ile phase of 015% triethylam ine (pH 310) 2aceton itrile2 tetrahydrofu ran (55∶40∶5) , a t the detect ion w avelength of 240nm. Results: T he detect ion lim it of E2isom er w as 5nm. Conclusion: T he estab lished m ethod is su itab le to analyse E2isom er of To rem ifene C itra te due to its advan tages of h igh perfo rm ance, h igh speed and easy operat ion. Key words　H PL C; To rem ifene C itra te; E2isom er 　　枸橼酸托瑞米芬是Farm o s 公司开发的抗雌激 素类抗肿瘤药, 用于治疗乳腺癌疗效可靠。其有效成 分为Z2异构体, 因此, 有必要控制其E2异构体的量, 以保证药品的质量。文献报道[ 1 ]及国家标准 (试行) W S2088 (X2075) 22002[ 2 ]采用毛细管电泳法, 按面积 归一化法计算, 含E2异构体不得过015%。本文建立H PL C 法, 用三十烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱拆分枸橼酸托瑞米芬的E、Z 异构体, 方法简便、快捷, 分离效果较好。一、仪器与试药 45 中国药品标准2007 年第8 卷第5 期　 (总374) D rug Standards of Ch ina 2007, vo l. 8 N o. 5 © 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net W aters2695 高效液相色谱仪; 二极管阵列检测 器; w aters 色谱工作站。 枸橼酸托瑞米芬原料、枸橼酸托瑞米芬异构体 混合物、枸橼酸托瑞米芬E2异构体由宁波天衡制药 有限公司提供, 乙腈为色谱纯, 三乙胺和四氢呋喃为 分析纯。 二、色谱条件 色 谱 柱: D evelo sil C302U G25 ( 150mm × 416mm , 5Λm ) ; 流动相: 015% 三乙胺溶液 (用磷酸调 节pH 值至310) 2乙腈2四氢呋喃 (55∶40∶5) ; 流速: 110m l·m in21; 检测波长为240nm。进样量10Λl。 三、方法与结果 11 溶液的配制 系统适用性试验溶液: 取枸橼酸托瑞米芬异构 体混合物适量, 加流动相溶解并稀释制成每 1m l 中 含1m g 的溶液。 E2异构体溶液: 取枸橼酸托瑞米芬E2异构体适 量, 加流动相溶解并稀释制成每 1m l 中含 1m g 的溶 液。 供试品溶液: 精密称取供试品适量, 加流动相溶 解并稀释制成每1m l 中含215m g 的溶液。 21 系统适用性试验 取系统适用性溶液和E2异构体溶液各 10Λl, 注 入液相色谱仪, 记录色谱图(图1) , 其出峰顺序依次为 E2异构体和 Z2异构体, 保留时间分别为 8160 和 9162m in。两者的分离度为216, 理论塔板数按Z2异 构体峰计为7900。 图 1　枸橼酸托瑞米芬E、Z 异构体混合物的色谱图 　　31 重复性试验 取系统适用性试验溶液重复进样6 次, 测得Z、E 异构体的峰面积、保留时间和分离度的相对标准偏 差 分 别 为 1102% , 0197% , 0174% , 0176% 和 1142%。　　　　　　　　 41 最低检测限 取枸橼酸托瑞米芬E2异构体适量, 用流动相溶 解并逐步稀释, 进样测定, 至E2异构体峰高约为基 线噪音的3～ 5 倍, 得最低检测量为5ng。 51 样品测定 分别取三批不同批号的样品, 按上述供试品溶 液制备方法制备。进样10Λl, 记录色谱图, 按面积归 一化法计算, 结果三批样品均未检出E2异构体, 色 谱图见图2。 图 2　枸橼酸托瑞米芬样品的色谱图 四、讨论 高效液相色谱法与国家标准毛细管电泳法相 比, E、Z 异构体的分离度更好, 检测灵敏度更高, 主 峰保留时间的平行性更好。且液相色谱仪作为一种 常规的分离仪器在实验室的使用率较毛细管电泳法 广, 因此用液相色谱法测定枸橼酸托瑞米芬的E2异 构体, 方法简便、实用。 参考文献 [1 ] 祝仕清, 牛长群, 刘全志. 高效毛细管电泳分离测定枸橼酸托瑞 米芬的Z、E 异构体. 药物分析杂志. 1998. 04. 2502252 [ 2 ] 国家药品监督管理局标准 (试行)W S2088 (X2075) 22002 作者简介: 崔春英, 女, 副主任药师。学科及研究方向: 药物分析。联系电话: 0371- 63388110。 浊度法测定硫酸卷曲霉素的效价 崔春英　刘　英　杨淑先(河南省食品药品检验所　郑州 450003) 55D rug Standards of Ch ina 2007, vo l. 8 N o. 5 中国药品标准2007 年第8 卷第5 期　 (总375) © 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net