畸形精子症研究进展

第27卷第4期Vo1．27，No．4 2007年4月Apr．2007 生 殖 与 避 孕 Reproduction＆Contraception http：／／www．RandC．cn randc@sippr．stc．sh．cn 畸形精子症研究进展 王瑞雪 孙卉芳 刘睿智 f吉林大学基础医学院细胞生物学教研室，吉林省生殖医学研究所，长春，130021) 【摘要】 正常的精子形态和结构是保证精子完成受精的基础。因此，精子形态和结构异常成为导 致体内或体外受精失败的重要原因。本综述回顾近五年文献，对精子形态、结构上的异常进行分 类描述，并探讨导致精子形态、结构异常的机制。 关键词：男性不育；精子形态；结构 中图分类号：R698．2，R32 1．6 文献标识码：A 文章编号：0253．357X(2007)04-0292-05 国内外资料显示不孕不育症约占已婚夫妇的 10％，男方因素约占40％，其中约50％不育男性 精子形态异常。目前，精子形态异常的机制尚未 明晰，这使部分畸形精子症患者得不到有效治疗。 本文对近 5年的文献进行回顾，探讨精子形态异常 的机制 。 1 病理性精子形态 1．1 精子头部异常 ． 1．1．1圆头精子综合征 圆头精子综合征是一种少 见的精子头部畸形。表现为精子头部外观呈圆形， 顶体缺无、过小或脱离，无顶体后致密带。免疫 组织化学研究显示缺乏顶体蛋白，如：顶体酶、顶 体外膜抗原、顶体酶抑制剂。不育男性精液中圆 头精子比例显著增高，且不育男性精液中出现圆头 精子的儿率也显著增高。圆头精子形成与染色质凝 缩异常、组蛋白．精核蛋白转型异常以及DNA断裂 有关。Ditzel等也发现圆头精子综合征患者精子染 色体异常率显著增高【，】。 圆头精子综合征发生可呈现家族性，提示该 基金项目：吉林省科技厅资助项目(200505 140) 通讯作者：刘睿智：Tel：+86431-8883399； E-mail：lrz420@126．com — —292—— 疾病的发生可能与遗传因素有关。通过对各种基 因剔除小鼠模型的研究发现，GOPC、Csnk2a2、 Hrb基因与圆头精子形成有关。GOPC基因编码小 鼠的GOPC(Golgi-associated PDZ-and coiled-coil motif-containing protein1，该基因缺失可导致圆头 精子形成。这类圆头精子无顶体同时呈现尾部缺 陷[21，这一结果在 Ito和 Suzuki．Toyota等研究中也 得到印 t4]。研究发现，Csnk2a2在精子发生晚 期优先表达，Csnk2a2缺失的雄性小鼠因患有少精子 症和圆头精子综合征而不育【 。然而在Pirrello等研 究中，未发现圆头精子征患者有Csnk2a2突变【 】。 Kang．Decker等研究发现，Hrb基因无效突变的雄 性小鼠不育且呈现圆头精子综合，征【，】。正常小鼠精 子细胞中，Hrb与前顶体运输囊泡细胞质表面相结 合，前顶体囊泡在精子分化的第 3步融合成一个大 的顶体囊泡。尽管Hrb缺失的精子细胞可形成前顶 体囊泡，但是不能融合，并在精子分化第 2步阻 断顶体的形成。因此认为Hrb是顶体生物发生过程 中前顶体囊泡融合所必需。 1．1．2精子核异常 研究发现，染色质成熟过程异 常可导致精子核空泡样缺陷，即致密的染色质被颗 粒原纤维或空区域取代，约占精子核的20％一50％。 这些缺陷经常伴随颗粒状未成熟染色质出现，且 被视为精子染色质成熟度和凝缩异常。染色质异 维普资讯 http://www.cqvip.com 常精子经常表现为头部形态异常，这可导致精子 致孕力下降或引发流产。目前，不同的方法可从 不同角度检测精子染色质。苯胺蓝染色能检测精 子核 内过多组蛋白，吖啶橙染色能检测精子核 DNA状态，CMA3染色能检测精核蛋白缺陷程度。 已有研究表明精子核蛋白组型转换异常、染色质 结构异常、精核蛋白缺陷、DNA断裂与精子形态 异常有关【s】。而精子核异常与精子染色体非整倍体 率有关，减数分裂异常可导致精子核异 1。 1．2 精子颈部和中段异常 1．2．1胞质小滴 胞质小滴(cytoplasmic droplets)是 生殖细胞胞浆残余物，大部分被睾丸支持细胞吞噬， 其余附着在伸长精子的颈部，在精子排放过程中脱 落。一些研究认为，过多残余胞质可导致精子功能 下降，引起男性不育。吸烟和患有精索静脉曲张的 不育男性，精液中带有胞质小滴的精子比例显著增 高。精子胞质小滴可能与DNA变性有关，胞质小 滴的存在可提高精子DNA对变性的易感性。研究 认为，胞质小滴可产生大量活性氧(reactive oxygen spcies，ROS)，进而导致精子功能降低【 1。然而， 另有研究认为，胞质小滴是哺乳动物精子的正常 组份，存在于不成熟精子颈部和成熟精子中段、末 端。在通过附睾头移行期间，胞质小滴沿中段运 动被视为精子成熟的重要特征。储存于附睾尾的 大多数哺乳动物精子含有胞质小滴【“1。研究发现 大部分活动精子存在胞质小滴，固定且空气干燥 后，涂片上带有胞质小滴的精子数降低了一半[121。 研究发现，胞质小滴可能与内分泌激素有关[131。 精液中睾酮浓度与带有胞质小滴精子的百分率呈显 著正相关。P450芳香酶定位于人类射出的不成熟 精子的胞质小滴上，提示胞质小滴可能是精子分 化过程中雌激素的生物合成位点[131。 1．2．2 断头精子 头尾分离是常见的精子连接段畸 形，这种畸形也被称为断头精子。最初Perotti等将 此类精子命名为 “decapitated spermatozoa”[141， Chemes等研究中则称为 “acephalic spermatozoa’ 1。 电子显微镜下断头精子呈现不同类型。Perotti等研 究显示，大多数断头精子尾部结构正常，最前端 有近侧中心粒，被连续的质膜包绕；小部分这类精 子，尾部有残留的连接段并被胞质团包绕，或呈 现中段缺失；另有部分精子，尾部有规则的连接段 和中段，或者残留的连接段与主段相连，并被较大 的胞质团包绕[141。Chemes等研究发现，大部分断 头精子的头部缺失，中段被质膜包绕；如果有精子头， 则精子中段以异常角度植入[is1。此类患者睾丸组织 活检显示，精子发生异常，植入窝缺失，鞭毛始基 与精子核分离，导致精子头 ．中段连接异常【”1。这 些结果表明，精子发生过程中，颈部发育异常可 导致断头精子形成。Kan'~l等报道了一种新的精子 畸形，命名为易断头的精子缺陷(easily decapitated spermatozoa defect)，并将其归入断头精子症中【 1。 电子显微镜下可见精子基板退化或缺失，近侧中心粒 异常且中段退化并带有大量胞质小滴。断头精子症 呈家系内发病且有典型的表现型，这些均提示这种疾 病是一类遗传因素导致的综合征。 1．3 精子鞭毛异常 1_3．1原发性纤毛运动障碍 原发性纤毛运动障碍 (primary ciliary dyskinesia，PCD)是一种常染色体隐 性遗传疾病。这类患者常表现为支气管扩张、慢 性鼻窦炎、内脏逆位和男性不育。纤毛或鞭毛结 构不能有力地摆动是其主要致病原因。光镜下PCD 患者的不活动精子在形态上可以正常，但是尾部僵 直；电子显微镜下可见大多数精子轴丝缺陷。最初 发现，精子轴丝缺陷表现为外侧双联微管2个动力蛋 白臂缺失。之后的研究中又发现精子轴丝存在其他 缺陷，如：外侧或内侧动力蛋白臂缺失，1个或2个中 央微管缺失，放射轴缺失，过度微管缺失等。目前， 已经发现了一些与PCD相关的基因，如：DNAH5、 DNAI1、DNAH9、DNAH1 1编码的外侧动力蛋白 组件：TCTE3基因编码的动力蛋白轻链【”1。但是，这 些基因是否与男性不育有关还尚存争论。MDHC7 是小鼠动力蛋白重链7基因，编码内侧动力蛋白臂 组件，与MDHC7(+／-)d,鼠和正常小鼠相比，MDHC7 (-／。)小鼠精子直线和前向运动速度严重降低【 1。 Sptrx。2在精子的特异性表达及其在染色体的定位和 鞭毛异常与PCD所致的男性不育有关，提示其可能 是人类精子轴丝组织结构新的组成部分【 1。相对于 呼吸道纤毛而言，DNAH5突变的PCD患者精子尾 部有正常的外侧动力蛋白臂重链分布，暗示不同细 胞外侧动力蛋白臂形成的模式不同[2o1。 1．3．2 纤维鞘发育不良 纤维鞘发育不~(dysplasia of the fibrous sheath，DFS)常见于严重弱精症患 者。光学显微镜 下可见大部分精子尾部短、僵 直、粗或不规则，电子显微镜下可见轴丝和轴丝 周围结构严重变形。纤维鞘严重畸变是DFS患者的 普遍特征，主要表现为纤维鞘显著肥大或增生， - 293- 维普资讯 http://www.cqvip.com 形成致密环或宽的网孔，无序地排布在纵柱和肋柱 上。部分病例可见轴丝的中央微管缺失和 ／或双联 微管的动力蛋白臂缺失。正常情况下，第3和第 8根外周致密纤维仅在精子中段出现。但是，在 DFS患者中，他们可延长至主段。这导致终环不 能向尾侧移动而停留在头侧，精子中段不能形成， 以及线粒体缺失或异常。研究发现，部分 DFS患 者9+2轴丝结构完全变形；而另一部分DFS患者， 增生的纤维鞘形成的致密环中央可见完好的9+2轴 丝结构[2”。Rawe等通过不同方法观察了DFS患者 精子的纤维鞘、双联微管和线粒体，发现纤维鞘 全部畸变，轴丝的微管严重变形，线粒体排列紊 乱或缺失。研究也发现 DFS患者精子表面和线粒 体表面遍在蛋白化作用增强[22J。 由于精子纤维鞘严重畸变是DFS的主要特征， 因此对DFS研究已经延伸到精子纤维鞘的蛋白定位 和表达上。目前已知与纤维鞘相关的蛋白主要有 AKAP家族的3个成员：AKAP4、AKAP3、TAKAP． 80[231；和 3一磷酸甘油醛脱氢酶 一S(GAPDS)、 GSTM5、FS39t24]；但是尚无研究表明这些蛋白的缺 失与DFS有关。 2 精子形态影响因素 2．1 微生物因素 男性生殖道和射出精液中均可见白细胞。生 理上，白细胞来 自附睾，在免疫防御和异常精子 清除过程中发挥重要作用。精液中白细胞类型主要 是中性粒细胞，其次为巨噬细胞、T淋巴细胞。 根据WHO，精液中白细胞浓度≥1×106／ml 即为白细胞精子症【zs】。精液中白细胞浓度增高可 导致精液质量下降。Aziz等研究表明精液白细胞浓 度与畸形精子率有显著正相关关系[26】。白细胞释放 的活性产物可能是导致精子形态缺陷的一个重要因 素。精液白细胞浓度增高可导致分泌多形核粒细胞 弹性蛋白酶浓度增高。研究表明，精液中弹性蛋 白酶浓度与形态正常精子率呈显著负相关[26】。 Kocak等研究表明，肿瘤坏死因子亦可对精子形态 产生负面影响【27】。另一方面，白细胞产生的大量 活性氧(ROS)可能是导致精子形态异常的又一重要 原因。精液中产生 ROS的白细胞类型主要是中性 粒细胞和巨噬细胞。ROS可介导精子膜脂质过氧 化，破坏精子内部结构。精液中ROS水平增高可 - 294- 导致形态异常精子率、DNA缺陷精子率显著增 高。精液中ROS水平与无定形头精子率、项体缺 陷精子率、中段缺陷精子率、胞浆小滴、尾部缺 陷、精子缺陷指数(sperm deformity index，SDI)有 显著负相关关系。 导致感染的因素很多，常见为细菌、支原 体、衣原体、病毒等。Metha研究发现，49％的 男性不育患者有1种或2种细菌感染。主要致病菌 为：表皮葡萄球菌、链球菌(0L、p溶血)、大肠杆 菌。这些细菌感染可导致精液质量(活力、pH、形 态)改变。精液粪链球菌培养阳性男性，精液中形态 正常精子比例显著降低【 】。 2．2 理化因素 近年来，男性精液质量和生育力显著降低。 提示环境变化，包括空气污染、职业接触、生活 习惯等，可影响精液质量。研究显示，空气污染对 形态正常精子率及活动精子率可产生负面影响【 】。 体外实验亦表明，垃圾浸出液对实验大鼠精子形态 产生影响，可导致形态异常精子率显著增高。这 可能是因为在精子发生过程中，垃圾浸出液中的一 些成分可与细胞的遗传物质发生相互作用，产生致 突变效应【 。】。 流行病学研究发现，工作环境对精液质量也有 显著影响。各种毒性物质接触史是导致男性生育力 降低的重要因素。研究表明，焊接工人精液中形态 正常精子率显著降低，尾部卷曲精子率显著增 ，·】。 Heemandez—Ochoa等研究表明，精子中铅(Pb)浓度与 精子形态呈显著负相关【 。这可能是由于铅浓度增 高改变精子中锌(zn)的利用率，从而使精子染色质 发生改变。长期接触农药(如杀虫剂)对精子形态也 有显著影响，导致形态正常精子率显著降低[29]。动 物实验结果显示，氯氰菊酯可致试验大鼠头部形态 异常精子率显著增高【，，】。此外，一些药物(如：抗 生素、抗癌、抗躁狂药)也可导致男性精液中形态 异常精子率增高[34】。 2-3 内分泌因素 Luboshitzky等研究表明，血清或精浆中的激 素水平与精子形态无明显相关性，且血清激素水平 与精浆激素水平间亦无显著相关性[35】。正常男性精 浆中，雌激素水平显著高于血清雌激素水平。这 既表明雌激素的局部产生，也暗示雌激素和／或睾 酮 ／雌激素的平衡对正常男性精子发生起重要作 用。研究中也发现，精浆睾酮／雌激素比值与形态 维普资讯 http://www.cqvip.com 正常精子率有显著正相关关系，进一步印证了睾 酮／雌激素比例平衡对精子发生的重要调节作用。 抑制素B在睾丸中生成，负反馈调节FSH合成和分 泌。研究表明，抑制素B水平与FSH水平呈显著 负相关关系，与精子形态呈显著正相关关系。随 着年龄增长，FSH水平逐渐增高，形态正常精子 率则逐渐下降， 】。但是，FSH通过与睾丸中支持 细胞上的同源受体相互作用，在维持精子发生上发 挥重要作用。雄性FSH．R剔除小鼠表现为极少的 支持细胞以及结构异常的精子【，，】。 参考文献 [1]1 DitzelN，E1-Danasouri I，JustW，eta1．Higheraneuploidyrates of chromosomes 1 3，16，and 21 in a patient with globozoospermia．Fertil Steril，2005，84(1)：217-8． [2]2 YaoR，ItoC，NatsumeY，eta1．Lackofacrosomeformation in mice lacking a Golgi protein，GOPC．Proc Natl Acad Sci USA，2002，99(17)：1 1 2l 1-6． [3]3 ItoC，Suzuki-Toyota F，MaekawaM，eta1．Failureto assemble the peri-nuclear structures in GOPC deficient spermatids as found in round—headed spermatozoa．Arch Histol Cytol， 2004，67(4)：349-60． [4]Suzuki-Toyota F，Ito C，Toyama Y，et a1．The coiled tail of the round—headed spermatozoa appears during epididymal passage in GOPC-deficient mice．Arch Histol Cytol，2004，67 (4)：361—71． [5]Xu X，Toselli PA，Russell LD，et a1．Globozoospermia in mice lacking the casein kinase II alpha’catalytic subunit．Nat Genet，1999，23(1)：1 18-21． 【6]Pirrello O，Machev N，Schimdt F，et a1．Search for mutations involved in human globozoospermia．Hum Reprod，2005，20 (5)：1 314—8． [7]Kang-Decker N，Mantchev GT，Juneja SC，et a1．Lack of acrosome form ation in Hrb-deficient mice．Science，200 1， 294(5 54 ：1 531_3． [8]8 SiddighiS，PattonWC，Jacobson JD，eta1．Correlationofsperm parameters with apoptosis assessed by dual fluorescence DNA integrity assay．Arch Androl，2004，50(4)：3 1 1-4． [9]9 Morel F，Mercier S，Roux C，et a1．Interindividual variations in the disomy frequencies of human sperm atozoa and their correlation with nuclear maturity as evaluated by aniline blue staining．Fertil Steril，1998，69(6)：1 122—7． 【1 0]Novotny J，Oboma I I，Brezinova J，et a1．The occurrence of reactive oxygen species in the sem en ofmales from infertile couples．Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub，2003，147(2)：173-6． [1 1]Cooper TG，Yeung CH．Acquisition of volume regulatory responseofsperm uponmaturationin the epididymis andthe role of the cytoplasmic droplet．Microsc Res Tech，2003，61 (1)：28—38． [1 2]Cooper TG，Yeung CH，Fetic S，et a1．Cytoplasmic droplets are normal structures of human sperm but are not well preserved by routine procedures for assessing sperm morphology．Hum Reprod，2004，19(1 o)：2 283—8． [1 3]Rago V，Bilinska B，Palma A，et a1．Evidence of aromatase localization in cytoplasmic droplet ofhuman immature ejaeu— lated spermatozoa．Folia Histochem C。ytobiol，2003，4l(1)： 23 7． [14]Perotti ME，Giarola A，Giofia M．Ultrastruetural study ofthe decapitated sperm defect in an infertile man ．J Reprod Fertil， 198l，63(2)：543-9． [15]Chemes HE，Puigdomenech ET，Cafizza C，et a1．Acephalic spermatozoa and abnorm al development of the head—neck attachment：a human syndrome of genetic origin．Hum Reprod，l999，l4(7)：l 8l1—8． [1 6]Kamal A，Mansour R，Fahmy I， a1．Easily decapitated spermatozoa defect：a possible cause of unexplained infertility．Hum Reprod，l999，14(1 1)：2 791-5． [1 7】Geremek M，Witt M．Primary ciliary dyskinesia：genes， candidate genes and chromosomal regions．J Appl Genet， 2004，45(3)：347-61． [18]Neesen J，KirschnerR，Ochs-M，eta1．Disruption ofan inner am1 dynein heavy chain gene results in asthenozoospermia and reduced ciliarybeat frequency．Hum Mol Genet，2001，10 (11)：l1 l7—28． [1 9]Sadek CM，Damdimopoulos AE，Pelto—Huikko M，et a1． Sptrx-2，a fusion protein composed ofone thioredoxin and three tandemLy repeated NDP-kinase domains is expressed in human testis germ cells．Genes Cells，200 l，6(1 2)： l 077．90． [20]Fliegauf M，Olbrich H，Horvath J， a1．Mislocalization of DNAH5 and DNAH9 in respiratory cells from patients with primary ciliary dyskinesia．Am J Respir Crit Care Med， 2005，171(1 2)：l 343-9． [21]Chemes HE，Olmedo SB，Carrere C，et a1．Ultrastructural pathology of the sperm flagellum：association between flagellar pathology and fertility prognosis in severely asthenozoospermic men．Hum Reprod，l998，l3(9)： 2 521．6． [22]Rawe VY，Galavema GD，Acosta AA，et a1．Incidence oftail structure distortions associated with dysplasia of the fibrous sheath in human sperm atozoa．Hum Reprod，2001，l6(5)： 879．86． [23]BaccettiB，CollodelG，EstenozM，eta1．Genedeletionsinan infertile man with sperm fibrous sheath dysplasia．Hum Reprod，2005，20(1 o)：2 790-4． (下转第303页) - 295- 维普资讯 http://www.cqvip.com 激素样作用随剂量的增大而增强；另一方面，高剂量 米非司酮对子宫内膜有一定的破坏作用，并抑制内源 性前列腺素的产生，致使子宫收缩减弱，出血量因而 增多[2]，且单方米非司酮服药方法较烦琐，患者自己 服用易因晚服、漏服而导致不完全流产或流产失 败。另外，米非司酮同时具有抗糖皮质激素活性和 肝肾脏毒性，因而易产生与之相关的副反应。 复方米非司酮是米非司酮和双炔失碳酯的复合 制剂。双炔失碳酯是一种具有弱雌激素活性和较强 抗雌、孕激素活性的甾体类激素，在 7O年代，它 作为探亲避孕药使用。现在研究发现，双炔失碳 酯和米非司酮有协同抗早孕作用，可有效地降低孕 激素受体浓度，升高雌激素受体浓度[3]，降低孕激 素水平，促进流产发生。在这一组配伍中，双炔 失碳酯可能表现出弱的雌激素活性，使游离的、处 于储备状态的胞浆雌激素受体增加，将有可能利于流 产后雌激素尽快结合于受体上，发挥雌激素作用，促 进内膜增殖，减少阴道出血，促进月经恢复[3I钔。 本研究将复方米非司酮与米非司酮的流产过程 及结果进行比较，发现复方组的完全流产率高于单 方组，米索前列醇用量少、出血量少，且流产后出 血天数和转经时间均少于单方组，并有统计学意 义，服药方便，副作用程度 小于米非司酮组。 结论：复方米非司酮片配伍米索前列醇终止高危 因素的早期妊娠，具有服用方便、剂量小、流产后 出血时间短、出血量少、不增加胃肠道副反应的优 点，有较好的疗效和安全性，具有临床推广价值。 参考文献 [1]卢巧云，何肖莲，张丽红．米非司酮联合米索前列醇在高危 人流术前的应用．医药论坛杂志，2005，26f7)：43．4． [21袁耀萼，盛丹菁(主编)．妇产科学新理论与新技术．上海：上 海科技教育出版社，l996：l7． [3]金 力，沈维维，孙志达，等．复方米非司酮对人早孕蜕膜组 织雌孕激素受体的影响．生殖与避孕，2000，20(4)：202．8． [41刘 丹，苟文丽，冯 骏．复方米非司酮片配伍喜克馈终止 早孕的临床研究．生殖与避孕，2006，26(1)：624． 术木术术术水术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术术木术术术术术术术术术术术术术术术术术 (上接第295页) [24]Miki K，Qu W，Goulding EH，et a1．Glyceraldehyde 3- phosphate dehydrogenase—S，a sperm-specific glycolytic enzyme，is required for sperm motility and male fertility． Proc Natl Acad Sci USA，2004，101(47)：l 6 50 l-6． [25]WHO(编)．谷翊群，陈振文，于和呜，等(译)．人类精液及 精子与宫颈黏液相互作用实验室检验手册．第4版．北 京：人民卫生出版社，2001． [26]Aziz N，Agarwal A，Lewis-Jones I， a1．Novel associations between specific sperm morphological defects and leukocytospermia．Fertil Steril，2004，82(3)：62l-7． [27】Kocak I，Yenisey C，Dundar M，et a1．Relationship between seminal plasma interleukin-6 and tumor necrosis factor alpha levels with semen parameters in fertile and infertile men ． Urol Res，2002，30(4)：263—7． [28]Mehta RH，Sridhar H，Vijay Kumar BR，et a1．High incidence of oligozoosperm ia and teratozoosperm ia in human semen infected with the aerobic bacterium Streptococcus faecalis． ReprodBiomedOnline，2002，5(1)：l7-21． 【29]Rubes J，Zudova Z，Vozdova M，et a1．Air pollution and sperm quality．Cas Lek Cesk，2000，139(6)：1 74-6． [30]Bakare AA，Mosuro AA，Osiba~o O．An in vivo evaluation ofinduction ofabnorm al sperm morphologyinmicebylandfill leachates．Fertil Steril，2004，82(2)：374-7． [3 1]Bigelow PL，Jarrell J，Young MR，et a1．Association ofsemen quality and occupational factors：comparison of case- control analysis and analysis of continuous variables．Fertil Steril，1998，69(1)：1 1-8． [3 2]Hernandez-Ochoa I，Garcia-Vargas G，Lopez-Carrillo L，et a1．Low lead environmental exposure alters semen quality and sperm chromatin condensation in northern Mexico．Reprod Toxicol，2005，20(2)：22 1-8． [33]Kumar S，Gautam AK，Agarwal KR，et a1．Demonstration of sperm head shape abnormality and clastogenic potential of cypermethrin．J Environ Biol，2004，25(2)：1 87-90． [34]Thakur SC，Thakur SS，Chaube SK，et a1．Subchronic supplementation of lithium carbonate induces reproduc- tive system toxicity in male rat．Reprod Toxicol，2003，17(6)： 683．90． [35]Luboshitzky R，Shen-Orr Z，Herer P．Seminal plasma mela- tonin and gonadal steroids concentrations in normal men． Arch Androl，2002，48(3)：225-32． [36]Pasqualotto FF，Sobreiro BP，HaUak J，et a1．Sperm concen— tr~ion and norm al sperm morphology decrease an d follicle- stimulating horm one level increases with age．BJU Int，2005， 96f7)：1 087．91． [37]Grover A，Smith CE，Gregory M，et a1．Effects of FSH receptor deletion on epididymal tubules and sperm morphology，numbers，and motility．Mol Reprod Dev，2005， 72(2)：1 35-44． (2006年8月 14日 收稿) - 303—— 维普资讯 http://www.cqvip.com