龟龄集抗衰老作用研究

实验未发现某一有效部分，组合后实验发现正丁醇与水层部分 组合是全方的主要物质基础，可推测发挥补血功效的物质主要 集中在正丁醇与水极性区间，该极性区间的物质可能主要是黄 芪的苷类、苷元及当归的酚性物质等，具体成分有待进一步探 讨。 参考文献 ! 金若敏，陈长勋，张峥嵘，等"内芪毛状根对造血功能的作用"中药 材，!##$；%!（!）&%’!%$ % 张英华，武桂兰，姜廷良"当归补血汤及其含药血清对小鼠红系造血 祖细胞克隆的影响"中国实验方剂学杂志，!###；(（)）&**!*’ 龟龄集抗衰老作用研究 刘亚明 牛 欣 冯前进! 王世民! 曹月英% （北京中医药大学， 北京 !+++%#， !山西中医学院， 太原 +*++%)， % 山西省中医药研究院， 太原 +*++!%） 提 要 本文对老年小鼠灌服龟龄集+,!%(-／.-、+,%(-／.-和党参+,(-／.-(+天，测定/01，213、4/5678、93和13，结果 显示，龟龄集能明显提高老年小鼠/01和4/567:的含量，减少213含量，龟龄集还能明显增加老年小鼠单胺类神经递质的含量， 明龟龄集有抗衰老作用。 关键词 龟龄集；抗氧化；9;；13 龟龄集有增强小鼠免疫功能，促进性激素、肾上腺皮质激 素合成，促进小鼠<93、蛋白质合成，增加心血排出量，抗疲劳、 抗缺氧和保肝等作用［!，%］。我们发现龟龄集有显著的抗脂质过 氧化作用［*］，为了进一步观察龟龄集的抗衰老作用及机理，本 文对老年小鼠中枢神经递质去甲肾上腺素（9;）、多巴胺（13） 及/01、4/567:、213含量进行了测定，现将结果报道如下。 ! 材料 !,! 试验药物 龟龄集散剂，山西中药厂产，批号##+=!*。 !,% 动物 昆明种小鼠，体重**>%-，雌雄各半，由山西省中 医药研究院实验动物中心提供。 !,* 试剂 去甲肾上腺素（9?）重酒石酸盐（中国药品生物制 品检定所，批号#)+%）；多巴胺（13）盐酸盐（中国药品生物制品 检定所，批号#)+)）；/01试剂盒、213试剂盒、4/567:试剂盒 （均购自南京建成生物工程研究所，批号##+$%$）。 !,) 仪器 高效液相色谱仪@A6!+3BC系列（日本岛津），@6 ;A16’3电化学检测器。 !,( !,(,! 液配制 取去甲肾上腺素（9;）、多巴胺（13）标准 液分别配成浓度为!-／@的标准液，贮存于D%+E冰箱内，分析 时配成浓度为+,!F-／@的应试液。 !,(,% 色谱测定条件 荧光检测激发波长设置为%$+GF，发射 波长设置为*!(GF，室温保持在%(E左右，以峰面积定量计算。 并建立标准品的分离色谱图及9;、13工作曲线及线性方程 式。 !,(,* 分组与测定 将老年小鼠（*月龄）(+只，随机分(组： 即老龄组，龟龄集小、中剂量组和党参组。另取!+只（!,(月 龄）小鼠为对照组。小鼠每日灌服蒸溜水或药物饲养(+H。处 死小鼠取血分离血清参照文献［*］方法分别进行小鼠213、/01 及4/567:含量测定。另将动物断头置于冰台上，迅速取出脑 组织并快速保存于液氮中备测。另将小鼠全脑（除去小脑）称 重后，放入含+,(FIJ／@;1K3、+,+!L半胱氨酸的+,)FFIJ／@ 5AJ0)冷溶液中匀浆，于)E!++++-离心!+FFMG。取上清液与 !／%体积的钾盐溶液混合，冰溶液中静置!+FMG。进样前用+, )("F的滤膜过滤，!++++-高速离心!+FMG，取上清液%+"J测定 9;、13含量。 % 结果 龟龄集对老年小鼠血清中213、/01及4/567:含量的影 响见表!。 表! 龟龄集对老年小鼠血清中213、/01及4/567:含量的影响 （!!>"，GN!+） 组别 剂量 （-／.-） /01 （9O／FJ） 213 （GFIJ／FJ） 4/567: （F-／J） 青年 — )#$>(#"" ’,*+>!,+*"" )(,#’>),(+ 老龄对照 — %#=>*’ !*,+!>*,%= %$,*%>(,+’ 龟龄集 +,!%( *(!>*(" !+,=+>%,’#" **,#$>’,$+" 龟龄集 +,%( )!#>)("" =,=*>!,+$"" )(,$+>*,+%"" 党参 +,* *’$>)*" $,+)>*,*’" *+,=+>$,+’ 与老龄对照组比 "7#+,+(，""7#+,+!（下同） 龟龄集对小鼠脑单胺类神经递质含量的影响见表%。 表% 龟龄集对小鼠脑单胺类神经递质含量的影响（!!>"） 组别 动物数 （只） 剂量 （-／.-） 9; （"-／-） 13 （"-／-） 青年对照 !+ — +,’%=>+,+))"" +,$#(>+,+=="" 老龄对照 !+ — +,))#>+,+*# +,’%!>+,+=’ 龟龄集 !+ +,!%( +,(+(>+,+(*" +,=(*>+,+’$" 龟龄集 !+ +,%( +,($’>+,+)#"" +,$)#>+,+#+"" 党参 !+ +,* +,)$)>+,++$ +,=)!>+,+#%" * 讨论 脂质过氧化是指机体代谢产生的自由基诱导生物膜中不 饱和脂肪酸发生氧化反应，形成过氧化产物213。衰老可使细 胞膜磷脂分子产生脂质过氧化。213能使膜蛋白、酶发生交联 反应，使膜通透性增加，导致细胞膜结构、功能和代谢发生改变， 对机体造成损害。血清213含量多少能反映细胞膜脂质过氧 化的强弱，龟龄集能明显抑制衰老动物血清 213生成和明显 +! 中药药理与临床%++*；!#（%） 万方数据 降低衰老小鼠血清 !"#含量，表明具有抗脂质过氧化作用。 另外已知自由基（超氧离子自由基和羟自由基）是启动脂质过 氧化的关键因素，$%&’()作为一种抗氧化与抗自由基物质 ，其 含量越下降细胞衰老程度就越严重。%*"是超氧阴离子自由 基的清除剂，可抑制自由基启动的脂质过氧化反应。龟龄集可 明显提高衰老小鼠血清%*"含量及$%&’()含量，这一结果与 我们以往的相似［+］，表明龟龄集具有显著的抗脂质过氧化 作用。 一般认为,-和"#的合成是肾上腺素能神经元摄取血中 的酪氨酸为原料，在胞浆内首先羟化成多巴，再脱羟生成多巴 胺，然后进入囊泡，经!’羟化而生成,-。当脑内,-、"#含量 下降时则表明脑功能衰退［.］。同时由于衰老动物的消化功能 减退而使"#、,-的前体物质摄入减少，则往往伴随有酪氨酸 羟化酶活性或多巴胺脱羟酸活性降低［/］，表现为老龄小鼠脑内 的,-、"#含量下降。本实验结果表明龟龄集有明显提高,-、 "#含量，提示其有显著的抗衰老作用。有报道［0］龟龄集有防 止大鼠小脑皮质突触素丢失的作用，这与我们的研究结果基本 一致。至于其作用机致是增加,-、"#单胺递质的重摄取，还 是影响递质合成酶或分解酶的活性，则有待进一步研究。 参考文献 1 刘亚明2龟龄集研究概况2中成药，1343；（/）5.6".1 7 刘亚明2龟龄集抗889.肝损伤实验研究2中成药，1337；（7）5+1" +7 + 刘亚明，冯前进，牛 欣，等2龟龄集防治大鼠急性肝损伤的实验研 究及机理探讨2中国医药学报，7667；（/）5746"747 . 周隆武2中枢神经递质及其受体与老年2中国老年学杂志，1340；. （7）5+/"+: / 徐厚谦，刘 雄，刘永琦，等2扶元补脑冲剂对小鼠中枢神经递质含 量影响的实验研究2中国中医药科技，7667；3（1）5+0 0 任占川，魏建宏，侯迎潮，等2龟龄集对大鼠小脑皮质内突触素年龄 变化的影响2中医药研究，7666；10（7）5./".: 三子养亲汤镇咳、祛痰、平喘作用的药理研究 梁文波 赵 红 张学梅 （大连大学医学院 大连 110077） 邢福有 张巍峨 乌 兰 王永奇 （大连大学生物工程学院 大连 110077） 付子栋 吴丽霞 （日本·金泽大学药学部·天然医药分子化学研究室） 提 要 分别用浓氨水喷雾法、毛细玻管法和氯化乙酰胆碱喷雾致喘法研究了三子养亲汤不同溶媒提取物的镇咳、祛痰和平 喘作用。结果显示三子养亲汤醚提取物有明显的镇咳作用；三子养亲汤水提取物的祛痰作用显著；三子养亲汤醇、醚提取物的平喘 作用明显。 关键词 三子养亲汤；镇咳；祛痰；平喘 三子养亲汤方源《韩氏医通》，其味药有紫苏子、白芥子、莱 菔子，具有降气行痰、止咳平喘、消食导滞之功，临床主要用于 治疗老年慢性支气管炎、咳嗽、小儿喘息性肺炎。本文报道了 三子养亲汤的不同溶媒提取物的止咳、祛痰及平喘作用，以图 寻找三子养亲汤的有效化学成分及其药理作用。 1 材料 1;1 试验药物 紫苏子、白芥子、莱菔子采用河北产，由大连大 学中药教研室鉴定，其水煎液、3/<乙醇提取物及石油醚提取 物均由生物工程学院植化室提供。咳必清片剂：丹东制药厂 产，批号6616163。氨茶碱：山西省曙光制药厂产，批号336473。 氯化铵：大连无机化工厂产。 1;7 动物 昆明种小鼠，体重14"77=，雌雄兼用，购自大连大 学动物中心。%"大鼠146"776=，雌雄兼用；幼年豚鼠体重1/6 "766=，雌雄兼用，购自大连医科大学动物中心。 1;+ 方法 12+21 镇咳作用（浓氨水喷雾法） 小鼠浓氨水定量恒压（压力 为14;:>(?，即6;7个大气压）喷雾，/@AB后立即取出，记录小鼠 从接受喷雾开始到出现咳嗽的潜伏期，以及7CDE内的咳嗽次 数。喷雾后7分钟内不咳嗽者舍弃。合格小鼠两天后随机分 组，三子养亲汤水提物以生理盐水为阴性对照组，醇、醚提物以 精制植物油为阴性对照组，每组按6;7C9／16=灌胃给予相应的 药物。给药后1F分别接受14;+<氨水定量喷雾，/@AB后立即 取出，记录小鼠从接受喷雾开始到出现咳嗽的潜伏期，以及 7CDE内的咳嗽次数，分别观察三子养亲汤不同提取物的镇咳作 用。 12+27 祛痰作用（毛细玻管法 ） 大鼠随机分组同前，以氯化 铵为阳性药组，给药方法同镇咳试验。给药后1小时腹腔注射 乌拉坦1=／>=，大鼠麻醉后仰卧位固定，煎开颈中皮肤，分离气 管，并插入毛细管，以吸取气管内痰液。以毛细管吸取痰液的长 度作为评价药物的祛痰效果，记录大鼠7小时的痰液分泌量，分 别观察三子养亲汤不同提取物的祛痰作用。 12+2+ 平喘作用（喷雾致喘法） 将豚鼠放入喷雾装置内，以 .<氯化乙酰胆碱定量恒压（/+;+"00;0>(?）喷雾，每只豚鼠接 受喷雾/@后立即取出，记录豚鼠从接受喷雾开始到出现喘息性 抽搐跌倒的潜伏期。引喘潜伏期大于176@的舍弃。合格豚鼠 随机分组同前，以安茶碱为阳性药组，给药方法同镇咳实验，给 药后1F，将豚鼠放入喷雾装置内，以.<氯化乙酰胆碱定量恒压 喷雾/@，记录每只豚鼠的引喘潜伏期。分别观察三子养亲汤不 同提取物的平喘作用。 7 结果 三子养亲汤的镇咳、祛痰、平喘试验结果分别见表1"+、. "0、:"3。 11中药药理与临床766+；13（7） 万方数据