病毒抗原和RNA水平

文章连接：http://www.hivzhinan.com/quyu/quyu.html 病毒抗原和RNA水平 病毒抗原和RNA水平 检测病毒的其他方法可以很大程度上增加检测血液和其他体液中HIV的敏感性，然而，这些方法并不能区分传染性和非传染性病毒。这些方法包括病毒p24抗原检测法、直接酸解离法和后酸解离法、用PCR检测HIV的RNA法和定量竞争(QC)PCR技术。早期的定量竞争PCR数据支持观察到急性感染和AIDS检测HIV RNA非常敏感的方法有逆转录PCR和一种基于病毒RNA结合分支脱氧核糖核酸的信号放大系统的方法，这些方法的敏感度通常优于QC PCR，可以检测到约5O拷贝／毫升或以下的病毒RNA水平。最近的病毒RNA检测方法甚至可以检测到低至2个RNA分子／毫升的水平。这些分子生物学方法对于衡量病毒载量和临床症状以及疗效之间的关系非常有价值，已极大地推进了HIV感染的临床检测。上述这些方法在资源贫乏的国家或地区用于测量病毒载量是不可行的，而检测滤纸上干血斑的HIV感染更加有用。 利用这些已有的技术，有两组研究者用抗病毒药物抑制体内的病毒复制，并计算出病毒复制的潜在动力学特征和从外周血去除HIV的时间。有关症状期患者的研究显示，血浆中HIV的半衰期(用RNA测量)大约是6，5小时，症状期患者循环血液中出现高达100亿的病毒颗粒。随后采用血浆去除法的研究估计HIV的半衰期是28～110分钟，丙肝病毒是100-~182分钟。HIV的半衰期太短，以至于整个血浆的一半病毒会在不到30分钟内被替代。 有关感染者不同临床状态的其他研究也显示，高病毒血症与疾病进展有关。已有报道女性排卵期血浆中病毒RNA水平会有略微下降，主要原因可能是激素(如人类慢性促性腺激素)对HIV复制的影响。上面提到的长期存活者血液中游离的传染性病毒和病毒RNA非常低或者检测不到。因此，血浆病毒RNA的缺乏被认为是一种预后良好的迹象。这个发现激起了对感染者在感染早期开始抗病毒治疗的兴趣，目的就是为了把病毒载量长期降至检测不到的水平(即不足5O拷贝病毒RNA／毫升血液)，然而治疗的时限仍然还在争论中，尚无定论。有关这些分子方法测量的RNA水平与传染性颗粒数量(HIV传播的潜在来源)的关系是至关重要的。估计比游离的传染性病毒多1OOOOO(均值6OOOO)的非传染性病毒会出现在血清阳性者的血浆中，上述的量化抗原和RNA分析法检测到的绝大多数都是这些非传染性病毒。因此，在考虑传播过程时，明确血中传染性病毒的数量显然是必要的。对于抗病毒药物的疗效，病毒载量是最好的替代指标。而且，病毒RNA的复制程度反映了整个的临床阶段，可以作为一个颇有价值的预后参数。然而，到目前为止，在评价治疗必要性和临床状态严重程度时，CD4细胞的水平仍然比病毒载量更为重要。 病毒感染的细胞 病毒感染的细胞 尽管注意力集中在血液中游离的病毒颗粒上，但是它们与病毒感染的细胞的关系仍然是个重要的问题。大多数病例的游离病毒水平，甚至在抗病毒治疗中，与PBMC或淋巴结中的病毒水平不相一致。感染HIV的细胞总数估计有几千亿，比通常在血液中的游离病毒数量多得多。而且，有研究显示1个感染的细胞每天可以复制出200～1000个病毒颗粒(平均200个传染病毒)。因此，造成血液中高病毒RNA水平的病毒感染细胞的总数仅能代表被感染细胞的一小部分(1000万～2000万)这个发现对以前的结论提出质疑，即通过目前的抗病毒治疗药物阻断新发病毒感染将会带来长期的利益。许多感染病毒的细胞仍在体内存在，并可成为新传染性病毒的持续来源。 正如游离病毒，感染细胞的数量是随着疾病症状进展而增加的，并与CD4细胞计数下降有关。最初感染病毒的细胞数量是用原位杂交技术检测到的，检测范围在1：10000～1：100000 PBMC。随后的PCR技术把在健康携带者中检测范围提高到平均1：1000～1：10000 PBMC，AIDS患者1：10 PBMC。用原位PCR杂交和流式细胞仪分析发现，一些症状期患者的10个PBMC中可以找到1个感染细胞，绝大多数感染细胞(50％～90％)带有处于潜伏状态(未表达或“静息期")的HIV。已有报道用优化过的显微培养分析法可以测定能产生复制病毒的细胞的数量。在一些感染者的淋巴组织中，有接近50％的病毒感染细胞是含感染性病毒的。 通过这些分子技术检测到的绝大多数感染HIV的细胞是CD4+淋巴细胞，很少发现感染的循环巨噬细胞。对不再生感染细胞中的潜伏病毒特性仍没有很好的认识；它们可能是复制缺陷或者处于潜伏状态；。当感染处在潜伏期和感染细胞中含传染性的病毒，细胞中能激活病毒复制的将是HIV致病机制中的重要因素。 就宿主体内的病毒传播和扩散而言，感染病毒的细胞比血液中传染性病毒载量更重要。无症状患者体内的游离传染性病毒量可能是每毫升血液中有100 IP，而这些人体内平均1000个PBMC中有大约一个是病毒感染细胞。 文章连接：http://www.hivzhinan.com/quyu/quyu.html 文章连接：http://www.hivzhinan.com/quyu/quyu.html