反相离子对色谱法测定马来酸噻吗洛尔及其滴眼液中有关物质

= 3)。 5 讨论 511 缓冲液对色谱的影响 随着缓冲液 pH 增大, 泛昔洛韦保留时间延长, 故选用 pH 215。由于本 品极性较大, 易被色谱柱中的活性硅醇基强吸附, 致使色谱峰拖尾, 故加入扫尾剂三乙胺以改善峰 形。 512 甲醇对色谱保留值的影响 随着流动相中甲 醇量增大, 泛昔洛韦的保留时间减小, 但利巴韦林 峰的保留时间变化不大, 故选择甲醇量 35%, 2者 有较好的分离度。 513 稳定性试验 样品溶液稳定性试验表明, 24 h 内测定, 峰面积比的 RSD 未超过 110%。随着 样品溶液放置天数增加, t R 315 min的杂质峰略增 大, 这是由于本品结构中含双酯结构, 样品溶液久 置后样品水解, 杂质峰增大。 参考文献 1 Mart indale. The Ext ra Pharmacopoeia. 31 ed. London Royal Pharm aceut ical Society, 1996. 648 (本文于 1999年 4月 9日收到) Determination of Famiciclovir by HPLC Chen Jue ( Zhe j iang Insti tute f or Drug Cont rol , Hangz hou 310004) Abstract Objective: To establish the determination of the content of Famciclovir by HPLC. Method: T he chromatographic condit ion w ere: Ultrashere C18 5 Lm ( 416 mm @ 250 mm) ; phosphate buffer ( 0102 mol# L- 1 potassium1dihydrogen phosphate solut ion 1000 mL add triethylamin 3 mL, adjusted with 85% phosphoric acid to pH 215) ) methanol ( 65B35) as mobile phase; ribavirin as internal standard; flow rate w as 110 mL# min - 1 , w avelength of the detector w as 220 nm . Results: T he retent ion t ime of Famciclovir and internal stan- dard were 4190 m in and 2177 min respect ively1The linear range of calibrat ion curve w as 0101~ 0108 mg#mL - 1 ( r= 11000 0) . Conclusion: This method is suitable to determine Famciclovir1 Key words HPLC, Famciclovir 反相离子对色谱法测定马来酸噻吗洛尔及其滴眼液中有关物质 霍秀敏 (天津市药品检验所 300070) 摘要 目的: 建立用反相离子对色谱法测定马来酸噻吗洛尔及其滴眼液中有关物质的。方法: 采用国产 YWG- C18柱, 01065%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液- 乙腈 ( 70B30) 为流动相, 检测波长 297 nm。结果: 该方法在 310~ 1112 Lg#mL - 1范围内, 峰面积与浓度呈良好的线性关系 ( r = 01 999 3)。结论: 该方法简便、快速、准确, 优于薄层法。 关键词 反相离子对高效液相色谱法 有关物质 马来酸噻吗洛尔 马来酸噻吗洛尔滴眼液 马来酸噻吗洛尔是一种非选择性 B- 肾上腺能 阻滞剂, 有明显降低眼内压的作用, 其滴眼液治疗 原发性开角型青光眼及无晶状体青光眼在临床上得 到广泛应用。中国药典 1995 年版收载了原料药及 其滴眼液[ 1] , USP ÚÝ也有收载[ 2] , 均采用薄层层 析法, 其有关物质的检查, BP 1993[ 3]是采用高效 液相色谱法, 但使用国产 C18柱按其色谱条件不能 得到理想的色谱图, 本实验经过对多种色谱条件的 筛选, 采用反相离子对高效液相色谱法, 可以快 速、准确地进行样品测定。 1 仪器、药品与试剂 岛津 LC- 10AD泵, SPD- 10A 紫外检测器, #181# 20 ( 3) , 2000 CTO- 10A 柱温箱, C- R6A数据处理机。 马来酸噻吗洛尔 (天津中央制药厂) , 马来酸 噻吗洛尔滴眼液 (天津市售产品) , 辅料及中间产 物 (天津中央制药厂)。 乙腈 (色谱纯) , 磷酸二氢钠 (化学纯) , 辛烷 磺酸钠 (山东禹王实业总公司化学试剂厂)。 2 色谱条件 色谱柱: YWG - C18 ( 10 Lm, 416 mm @ 250 mm) ; 流动相: 01065%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液 [取磷酸二氢钠 1156 g , 加水 1000 mL, 用磷酸 ( 1 y10) 调节 pH 至 3150 ? 0105, 加入辛烷磺酸钠 0165 g 使溶解, 摇匀] - 乙腈 ( 70B30) ; 流速: 017 mL#min- 1; 检测波长: 297 nm ; 积分仪衰减: 0; 纸速: 115 mm#min- 1; 灵敏度: 0105 AUFS; 柱温: 40 e , 理论板数不低于 2 000。 3 实验方法 311 色谱条件的选择 经过对不同磷酸盐、不同 浓度 ( 0102, 0101, 01005 mol#L- 1 ) 缓冲溶液与 甲醇或乙腈以不同配比 ( 65B35, 70B30, 75B25) 筛选, 并对加入不同离子对试剂 (己烷磺酸钠及辛 烷磺酸钠) , 比较其不同浓度 ( 01085% , 01065% , 01045%) , 不同 pH 条件 ( pH= 310, pH= 315)。 最终选择 0101 mol#L - 1磷酸二氢钠缓冲液 [用磷 酸 ( 1y 10) 调 pH= 315] 配制的 01065% 辛烷磺 酸钠溶液与乙腈 ( 70B30) 组成的流动相为最佳条 件 (图 1)。另以流动相溶解原料作紫外扫描, 最 大吸收 297 nm 为检测波长。 图 1 原料药 ( A) 及滴眼液 ( B) 色谱图 11 马来酸 2, 31 杂质峰 41噻吗洛尔 312 线性实验 精密取马来酸噻吗洛尔适量 (约 相当于噻吗洛尔 1215 mg ) 置 200 mL 量瓶中, 加 流动相溶解并稀释至刻度。分别精密取 110, 210, 310, 410, 510 mL 置 25 mL 量瓶中, 用流动相稀 释至刻度, 进样 20 LL, 以浓度 ( Lg#mL- 1 ) 为横 坐标, 以峰面积为纵坐标, 得到噻吗洛尔的回归方 程: Y = 875119X - 137105 r = 01999 3 结果表明浓度在 310~ 1112 Lg#mL - 1范围内, 线性 关系良好。 313 有关影响因素实验 取生产厂提供的马来酸 噻吗洛尔中间体噻二唑、 唑烷进行实验, 均对主 峰无影响 (图 2)。另按滴眼液处方配制空白辅料 溶液, 在规定的色谱条件下, 基本为一直线, 对本 实验也无干扰。 图 2 中间体图谱 A1 噻二唑 B1 唑烷 314 精密度实验 精密称取马来酸噻吗洛尔 ( 980102批) 适量 (约相当于噻吗洛尔 1215 mg) , 置 25 mL 量瓶中, 用流动相溶解并稀释至刻度, 摇匀, 重复进样 6 次, 噻吗洛尔 RSD = 0135%, 马来酸 RSD= 0144% , 有较好的精密度。 315 加速实验 将原料药 980102 批及滴眼液 980502光照 27 d 后, 实验结果见表 1。原料药经 光照后比较稳定, 色谱图无变化, 滴眼液色谱图有 明显改变 (图 3) , 杂质峰增多, 含量下降。本实 验说明, 该方法能够反映出样品的变化, 可以控制 产品质量。 表 1 光照对样品的影响 ( n= 3) 样 品 初始含量/ % 光照后含量/ % 结论 原料药 9912 9912 稳定 滴眼液 9818 8616 不稳定(杂质峰增多) 316 本法与 T LC 法的比较 按照中国药典 1995 年版马来酸噻吗洛尔原料药有关物质 TLC 法对 2 批原料及滴眼液 ( 980502批) , 光照 7 d及 27 d的 样品进行测定, 与本方法比较结果见表 2。结果表 #182# 药物分析杂志 图 3 光照 27 d色谱图 A1 原料药 B1 滴眼液 明HPLC法比 TLC 法分析灵敏度高且能准确定量, T LC 法检出的杂斑数较少且不容易判断结果。 表 2 HPLC法与 TLC法检查有关物质的比较 样品 批号 HPLC法 (杂峰数) TLC法 (杂斑数) 原料药 960302 960401 1 1 未检出 未检出 滴眼液 980502 (光照 7 d) (光照 27 d) 4 8 1 3 4 样品测定 411 原料药 取本品 (约相当于噻吗洛尔 1215 mg) , 精密称定, 置 25 mL 量瓶中, 加流动相使溶 解并稀释至刻度, 作为供试品溶液。精密取供试品 溶液 1 mL, 置 100 mL 量瓶中, 用流动相稀释至 刻度, 摇匀, 作为对照溶液。取对照溶液 20 LL 注 入液相色谱仪, 调节检测灵敏度, 使主成分色谱峰 高约为记录仪满量程的 10% ~ 20% , 再取供试品 溶液 20 LL 注入液相色谱仪, 记录色谱图至主成分 峰保留时间的 3 倍 (主成分保留时间应在 10 min 后) , 除马来酸峰之外, 供试品溶液的色谱图中如 有杂质峰, 量取各杂质峰面积的和不得大于对照溶 液的峰面积。结果见表 3。 412 滴眼液 精密量取本品 1 mL (约相当于噻吗 洛尔 5 mg ) 置 10 mL 量瓶中, 用流动相稀释至刻 度, 摇匀, 作为供试品溶液。精密量取 1 mL 置 100 mL 量瓶中, 用流动相稀释至刻度作为对照溶 液, 照上述方法检查, 应符合规定。结果见表 3。 表 3 样品有关物质测定结果 样品 批号 对照峰面积 ( n= 3) 杂质峰面积之和 杂质量/ % 原 料 药 960401 960402 910302 910401 980102 5082 5332 5120 5120 4584 ) ) 24 24 ) ) ) 01004 01004 ) 滴 眼 液 970601 980501 980502 980306 980504 5146 4807 4862 5554 5014 3092 1672 1922 1422 1560 0160 0135 0140 0126 0131 5 讨论 511 实验中流动相比例的调整, 以主峰保留时间 在 10 min之后为宜, 马来酸峰与相邻杂质峰基线 分离较好。 512 方法中规定记录色谱图为主峰保留时间的 3 倍, 是由于原料药中间体噻二唑的保留时间约为 26 min, 实验中 970601批滴眼液中检出该杂峰。 513 本实验供试液自然放置 24 h后复测, 溶液浓 度不变, 杂质量不增加, 比较稳定。 参考文献 1 中国药典 119951二部: 46 2 USP1 ÚÝ 11553 3 BP1199311132 (本文于 1999年 4月 16日收到) Determination of Related Substances in Timolol Maleate and its Eye Drops by Reversed Phase Ion- pair HPLC Huo Xiumin ( Tianj in I nst itut e for Dr ug Control , 300070) Abstract Objective: A reversed phase ion- pair HPLC method w as developed of the determination of related substances in timolol maleate and its eye drops. Methods: The analysis w as carried on an ODS column1T he mobile phase consisted of 01065% sodium octylsulphonate phosphate buffer- acetonit rile ( 70B30) . Detect ion w as at 297 nm. Result: The good linearity was obtained betw een peak area and concentrat ion rang ing from 310 #183# 20 ( 3) , 2000 ~ 1112 Lg #mL - 1 ( r = 01999 3) . Conclusion: The method w as proved to be simple, rapid, and accu- rate1And better than thin layer chromatog raphy method1 Key words reversed phase ion- pair HPLC, related substances, t imolol maleate, t imolol maleate eye drops 高效毛细管电泳法研究盐酸司来吉兰的手性分离 黄宗玉 金 瓯 韩加怡 (浙江省药品检验所 杭州 310004) 摘要 目的: 采用高效毛细管电泳法分离盐酸司来吉兰的对映体。方法: 对影响分离的手性选择剂、运行缓冲 液等进行了系统的研究。结果: 用含 20 mmol#L - 1羟丙基- B- 环糊精 ( HP- B- CD) , 50 mmol#L- 1磷酸盐缓冲 液 ( pH417) 作运行缓冲液, 使盐酸司来吉兰对映体获得基线分离。结论: 本法可应用于测定盐酸司来吉兰片中 左旋异构体含量。 关键词 盐酸司来吉兰 对映体 手性分离 高效毛细管电泳 羟丙基- B- 环糊精 盐酸司来吉兰 ( Selegiline hydrochloride) 为选 择性B型单胺氧化酶抑制剂, 能抑制多巴胺受体突 触对多巴胺的再吸收, 增加多巴胺的储存, 临床上 用于巴金森氏及其综合症, 其分子结构见图 1, 其 中含有 1个手性中心, 有 ( D ) , ( L ) 2种光学异 构体。大量药效学研究结果表明其右旋异构体有药 效, 而左旋异构体无效[ 1]。英国药典 1998 年版收 载用HPLC 法使盐酸司来吉兰手性分离, 检查左 旋体的含量, 控制药品的质量[ 2]。高效毛细管电 泳法 ( HPCE) 与高效液相色谱法 ( HPLC) 相比 较, 柱效高, 消耗低, 成功应用于药物手性分离已 有报道[ 3, 4] , 但用HPCE 法对 D - L 盐酸司来吉兰 进行手性分离的研究尚未见报道, 本文通过加入 HP- B- CD手性选择剂使其光学异构体得到完全 分离。 图 1 盐酸司来吉兰的分子结构 1 仪器与试剂 仪器: Beckman P/ ACE 5500型全自动毛细管 电泳仪配备二极管阵列检测器和 Gold 软件数据工 作站。中性毛细管柱 50 Lm @ 56 cm (有效长度 49 cm)。 试药: 磷酸氢二钾、磷酸、氢氧化钾均为分析 纯; 重蒸馏水; A- 环糊精 ( A- CD)、B- 环糊精 (B- CD)、羟丙基- B- 环糊精 ( HP - B- CD) ( Sigma 试剂) ; D - L 盐酸司来吉兰 (光学纯) , 法国赛诺菲公司提供。盐酸司来吉兰片 (批号 6651197, 6760298, 6850689) 赛诺菲民生制药公 司。 对照品溶液的配制: 称取 D - L 盐酸司来吉 兰约 8 mg , 用水溶解并稀释至浓度为 014 mg#L - 1 ( 1) 和 0102 mg#L - 1 ( 2)。 磷酸盐缓冲液的配制: 精密称取磷酸氢二钾 1714 g 至 100 mL 量瓶中, 加水溶解并稀释至刻 度, 浓度为 100 mmol#L - 1磷酸氢二钾溶液, 备用。 2 实验条件 工作电压: 30 kV, 检测波长: 200 nm, 柱 温: 15 e , 阳极气压进样 3 s, 每日毛细管依次用 011 mol#L - 1盐酸溶液冲洗 2 min, 水冲洗 2 m in和 运行缓冲液冲洗 5 m in, 每次进样前均用水和运行 缓冲液各冲洗 2 m in。 3 结果 取 D- L 盐酸司来吉兰对照品溶液 ( 2) 在上 述实验条件下, 以 HP- B- CD 浓度为 20 mmol# L - 1的 50 mmol#L- 1磷酸盐缓冲液 ( pH 417) 为运 行液, 进行电泳, 记录电泳图; 另称取盐酸司来吉 兰片细粉适量, 用水溶解并过滤, 滤液稀释至浓度 为 2 mg#L - 1的溶液, 在上述实验条件下电泳, 记 录电泳图, 见图 2, 按外标法以峰面积计算, 结果 3批盐酸司来吉兰片中 L - 盐酸司来吉兰含量均小 #184# 药物分析杂志