HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中有关物质

2． 3． 7 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于 0，1，2，4，8，12 h时依法进样测定，氯己定峰面积的 RSD为1． 5%。结果明，供试品溶液能在 12 h 内 保持稳定。 2． 4 样品的测定 取对照品溶液和供试品溶液各 20 μl，进样测 定，按外标法以峰面积计算含量，结果见表 1。 表 1 样品含量测定结果(%，w /v，n =3) 批号 含量 A126 0． 00234 A127 0． 00238 A128 0． 00238 3 讨论 文献报道中，多用三乙胺作为扫尾剂［3，4］，本文 采用高氯酸钠改善峰形，并用乙腈作为有机相，色谱 峰对称性更好，柱效更高。 学考察结果表明，本文所建立的方法操作 简便、结果准确，可用于玻璃酸钠滴眼液中葡萄糖酸 氯己定的定量测定，从而确保药品的安全性。 参 考 文 献 1 梁光江，王延东，叶成添，等． 滴眼液中几种常用抑菌剂的兔眼刺 激性实验［J］． 中国药房，2010，21(21) :1964-1966 2 中国药典［S］． 2010 年版．二部．附录 215 3 会书钧． 高效液相法测定复方樟脑乳膏中葡萄糖酸氯己定含量 ［J］． 中国医药导报，2008，5(28) :29-30 4 张晓栋，丁建． RP-HPLC法测定创口贴吸水垫中葡萄糖酸氯己定 的含量［J］． 海峡药学，2009，21(12) :75-76 (2012-03-04 收稿 2012-05-03 修回) 通讯作者:胡兵 Tel:(027)82937069 E-mail:hbydycf@ yeah． net HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中有关物质 胡兵 单晓芸 (武汉市食品药品检验所 武汉 430012 ) 摘 要 目的:建立 HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中的有关物质。方法:色谱柱为 Venusil MP-C18色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，流动相:磷酸酸盐缓冲液(0． 05 mol·L －1磷酸二氢钠，每 1 000 ml加0． 5 ml三乙胺，以磷酸调节 pH至3． 0)-乙 腈 (85∶ 15) ;检测波长 295 nm;流速1． 0 ml·min －1，柱温为 25℃。结果:马来酸噻吗洛尔与其降解产物分离良好，其最低检出 限2． 0 ng。结论:所建立的方法稳定性可靠、灵敏、结果准确，可用于马来酸噻吗洛尔滴眼液有关物质检查。 关键词 HPLC法;马来酸噻吗洛尔滴眼液;有关物质 中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2012)08-1138-03 Determination of Related Substances in Timolol Maleate Eye Drops by HPLC Hu Bing，Shan Xiaoyun(Wuhan Institute for Food and Drug Control，Wuhan 430012，China) ABSTRACT Objective:To establish an HPLC method for the determination of the related substances in timolol maleate eye drops． Method:A Venusil MP-C18 column(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)was used with phosphate buffer solution(0． 05 mol·L －1 NaH2PO4， adding 0． 5 ml triethylamine per 1 000 ml，adjusting pH to 3． 0 with phosphoric acid)-acetonitrile (85∶ 15)as the mobile phase，the flow rate was 1． 0 ml·min －1，the detection wavelength was 210 nm，and the column temperature was 25℃ ． Result:The LOD of the impurities was 2． 0 ng． Conclusion:The method is reliable，stability and sensitivity，and can be used in the quality control of timolol maleate eye drops． KEY WORDS HPLC;Timolol maleate eye drops;Related substances 马来酸噻吗洛尔(timolol maleate)是一种非选 择性 β -受体阻断药，具有较好的降眼压作用，不良 反应小，近年来被广泛应用于开角型、闭角型青光眼 以及继发性青光眼和其他高眼压症的临床治疗。为 了控制药品质量，确保临床用药安全有效，本文参照 已发表文献［1］，建立了 HPLC法，可用于测定马来酸 噻吗洛尔滴眼液的有关物质。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪:安捷伦 HP1100。试剂:磷酸 二氢钠为纯，乙腈为色谱纯，水为纯化水。马来 酸噻吗洛尔滴眼液由武汉市远大天天明制药有限公 司提供(批号:111201、111102)。《欧洲药典》系统 适用性对照品，购自百灵威科技有限公司，批号: 1． 0［2］。 2 方法与结果 2． 1 色谱条件 色谱柱:Venusil MP-C18 色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，流动相:磷酸盐缓冲液(0． 05 mol· 8311 www． zgys． org 研究 L －1磷酸二氢钠，每 1 000 ml 加0． 5 ml三乙胺，以磷 酸调节 pH 至3． 0)-乙腈 (85 ∶ 15) ，检测波长 295 nm，流速为1． 0 ml·min －1，柱温为 25℃。 2． 2 系统适用性试验 精密称取马来酸噻吗洛尔对照品约 25 mg，置 50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为对照品 储备液。量取4． 0 ml，置 10 ml 量瓶中，加 10 mol· L －1氢氧化钠溶液1． 0 ml，在 105℃加热 30 min，放 冷，加 1 mol·L －1盐酸1． 0 ml，用水稀释至刻度，摇 匀，作为系统适用性试验溶液。量取 20 μl，按上述 色谱条件进样，马来酸噻吗洛尔峰与相邻峰的分离 度符合要求，各杂质峰之间的分离度符合要求。经 与《欧洲药典》系统适用性试验对照品比较，并用 LC-MS确定相对分子质量。确定了破坏杂质分别为 杂质 B、G、D。见图 1。 1．《欧洲药典》杂质 G(5． 955 min) 2．杂质 B(9． 3 min ) 3．马来酸噻吗洛尔(18． 9 min) 4．杂质 D(20． 99 min) 图 1 系统适用性试验色谱图 2． 3 专属性试验 2． 3． 1 未破坏样品 取马来酸噻吗洛尔原料，加水 制成每 1 ml中约含0． 5 mg的溶液，作为储备液。量 取 4 ml，置 10 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，量 取 20 μl，按上述色谱条件进样。 2． 3． 2 酸破坏 量取储备液 4 ml，置 10 ml 量瓶 中，加盐酸0． 2 ml，放置 2 h，加入 50%氢氧化钠溶液 0． 2 ml中和，用水稀释至刻度，摇匀，量取 20 μl，按 上述色谱条件进样。 2． 3． 3 碱破坏 量取储备液 4 ml，置 10 ml 量瓶 中，加 50%氢氧化钠溶液0． 2 ml，放置 3 h，加入盐酸 0． 2 ml中和，用水稀释至刻度，摇匀，量取 20 μl，按 上述色谱条件进样。 2． 3． 4 氧化破坏 量取储备液 4 ml，置 10 ml量瓶 中，加双氧水 1 ml，放置 1 h，用水稀释至刻度，摇匀， 量取 20 μl，按上述色谱条件进样。 2． 3． 5 高温破坏 量取储备液 4 ml，置 10 ml量瓶 中，水浴加热 2 h，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，量取 10 μl，按上述色谱条件进样。 2． 3． 6 光照破坏 量取储备液 4 ml，置 10 ml量瓶 中，用水稀释至刻度，摇匀，在日光下照射 3 h，量取 20 μl，按上述色谱条件进样。 2． 3． 7 空白辅料 取空白辅料，进样，未见有明显 干扰。 由图 2 可见，与未经破坏的样品色谱图比较，在 酸、碱、高热及氧化条件下杂质峰的个数、杂质峰的 总面积都有明显增加，但是降解产物与主峰在选定 的色谱条件下都得到较好分离，经二级管检测器检 测，主峰的纯度较高，说明该色谱条件能满足有关物 质检查的需要。 A．酸破坏 B．碱破坏 C．氧化破坏 D．加热破坏 E．未破坏样品 图 2 专属性试验 HPLC色谱图 2． 4 最低检测限试验 取对照品贮备液，以不同比例稀释后测定(以 信号为噪声的 2 ～ 4 倍为最低检出) ，得马来酸噻吗 洛尔最低检测限为2． 0 ng。 2． 5 耐用性试验 采用 phenomenxe luna C18色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)进行专属性试验，主峰与其他破坏产 物均能达到良好分离，见图 3。 1．《欧洲药典》杂质 G(4． 65 min) 2．杂质 B(6． 77 min) 3．马来酸噻吗洛尔(12． 86 min) 4．杂质 D(14． 94 min) 图 3 耐用性色谱图 2． 6 线性关系考察 精密称取马来酸噻吗洛尔对照品适量，加水溶 9311 中国药师 2012 年第 15 卷第 8 期 China Pharmacist 2012，Vol． 15 No． 8 解并稀释制成每 1 ml 中含 100 μg 的溶液，分别精 密量取 1，2，5，10，20 ml，置 100 ml 量瓶中，用水稀 释至刻度，摇匀，照“2． 1”项下的色谱条件测定，以 浓度(C)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标进行线 性回归，得回归方程为 A = 1． 1 × 104C + 94。 2． 7 精密度试验 取线性项下的 2 μg·ml －1的溶液，连续进样 6 次，峰面积的 RSD = 0． 54%。 2． 8 重复性试验 取同一批供试品 6 份，照“2． 9”项下方法测定， 结果每批只检出一个杂质，分别为0． 03%，0． 04%， 0． 03%，0． 04%，0． 04%，0． 03%。 2． 9 有关物质检查 精密称取马来酸噻吗洛尔滴眼液适量，用水稀 释制成每 1 ml 中含0． 2 mg的溶液，作为供试品溶 液。精密量取适量，用水稀释制成每 1 ml中含 2 μg 表 1 马来酸噻吗洛尔滴眼液有关物质测定结果(n =3) 批号 杂 质(%) 杂质 B 杂质 D 杂质 G 未知杂质 总杂质 111102 未检出 未检出 未检出 0． 02 0． 02 111201 未检出 未检出 未检出 0． 03 0． 03 的溶液，作为对照溶液。分别精密量取对照溶液和 供试品溶液各 20 μl，照上述液相色谱条件测定。3 批样品的测定结果见表 1。 3 讨论 3． 1 流动相的选择 采用乙腈-水系统，对乙腈和水的比例进行了优 化，使碱加热破坏产物与主峰达到完全分离，加入三 乙胺防止拖尾，通过破坏试验进行验证，此条件下马 来酸噻吗洛尔出峰时间适中，马来酸噻吗洛尔峰与 各杂质峰能够有效分离;结果表明此方法可用于马 来酸噻吗洛尔滴眼液有关物质检查。 3． 2 有关物质测定波长的选择 经二级管阵列检测器检测，主峰和破坏产物的 最大吸收波长在 295 nm。故选用 295 nm 波长进行 检查。 参 考 文 献 1 税庆华，李志明，于茂盛． HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中 的有关物质［J］．食品与药品，2005，7(12A) :41-42 2 EP［S］． 7． 0 ed． 2010． vol 2． 3095 (2012-04-08 收稿 2012-06-01 修回) 通讯作者:任海祥 Tel:(025)80860166 E-mail:suhuash@ sina． com． cn HPLC法测定益利康软胶囊中红景天苷的含量 王曙东 苏华 陈翠 任海祥 (南京军区总医院制剂科 南京 210002) 摘 要 目的:建立高效液相色谱法方法测定益利康软胶囊中红景天苷的含量。方法:采用 Lichrospher-C18色谱柱(150 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，甲醇-水(12∶ 88)为流动相，检测波长:275 nm，柱温为室温。结果:红景天苷在0． 030 1 ～ 0． 602 0 mg·ml －1 的范围内呈良好的线性关系，r = 1． 000 0，平均回收率为99． 45%，RSD为0． 65%(n = 6)。结论:本法简便、准确，可作为该制剂 的定量分析方法。 关键词 红景天苷;高效液相色谱法;含量测定 中图分类号:R927． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2012)08-1140-03 Determination of Salidroside in Yilikang Soft Capsules by HPLC Wang Shudong，Su Hua，Chen Cui，Ren Haixiang(Department of Preparation Division，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，Nanjing 210002，China) ABSTRACT Objective:To establish an HPLC method for the determination of salidroside in Yilikang soft capsules． Method:Sali- droside was determined by HPLC with a Lichrospher-C18 column(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)as the chromatographic column and metha- nol-water (12∶ 88)as the mobile phase ． The flow rate was 1． 0 ml·min －1 and the detection wavelength was set at 275 nm． Result: The linearity of the salidroside concentration and the peak area were both promising within the range of 0． 030 1-0． 602 0 mg·ml －1(r = 1． 000 0)． The average recovery was 99． 45% with RSD of 0． 65%(n = 6)． Conclusion:The method is simple and accurate，and can be used in the analysis of salidroside in Yilikang soft capsules． KEY WORDS Salidroside;HPLC;Determination 益利康软胶囊主要成分为红景天、刺五加、人 参、黄芪、灵芝孢子，具有益气固本、补脾益肺、镇痛 0411 www． zgys． org