毛细管电泳法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液的含量

毛细管电泳法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液的含量 赵 莲 (贵阳医学院理化实验中心,贵州 贵阳 550004 ) [关键词 ] 马来酸噻吗洛尔; 电泳, 毛细管; 眼药水 [中图分类号 ] R9- 39; R77 [文献标识码 ] B [文章编号 ] 1000-2707( 2008) 02-0202-02 马来酸噻吗洛尔是非选择性 B-肾上腺素受体 阻滞剂,由于其无选择性及膜稳定作用, 无直接抑 制心脏作用及局部麻醉作用,但有明显的降低眼压 的作用, 临床上用于治疗高血压、心绞痛、心力衰 竭、心动过速及青光眼 [ 1]。马来酸噻吗洛尔含量 测定方法多采用高效液相色谱法 [ 2~ 4]、反相离子对 色谱法 [ 5]和紫外可见分光光度法 [ 6] , 而毛细管电 泳法 ( CE )未见报道。 2007年 4~ 9月用毛细管电 泳法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液含量。 1 材料与方法 1. 1 仪器及材料 Beckman P /ACE MDQ毛细管电泳仪 (二极管 阵列检测器及 32Karat软件系统 ), 熔融石英毛细 管柱 ( 46 cm @ 75 Lm,有效长度 37 cm ) (河北永年 光导纤维厂 ) , M illipore超纯水器 (美国 ), 雷磁 pHS-3C精密 pH 计 (上海精密科学仪器有限公 司 ) , BP211D 1 /10万天平 (德国 Sarto rius公司 ), P roline系列单通道可变容量手动移液器。马来酸 噻吗洛尔对照品 (苏州医药集团有限公司,纯度 > 99. 0% ), 内标富马酸比索洛尔对照品 (北京丰德 医药科技有限公司提供, 纯度 > 99. 0% ), 马来酸 噻吗洛尔滴眼液 ( 5 m ,l 12. 5 mg,湖北潜江制药股 份有限公司 ) ,水为超纯水,其它试剂均为分析纯。 1. 2 溶液的制备 1. 2. 1 对照品溶液 量取马来酸噻吗洛尔对照品 适量, 置于 100 m l容量瓶中,加水溶解并定容至刻 度,摇匀,得浓度为 1. 0 g /L对照品贮备液。 1. 2. 2 内标溶液 称取富马酸比索洛尔适量, 置 于 250m l容量瓶中, 加水溶解并定容至刻度摇匀, 得浓度为 1. 0 mg /m l内标溶液。 1. 2. 3 样品溶液 取同一批号的马来酸噻吗洛尔 滴眼液 20瓶, 充分混匀。量取约 10mg于 100 m l 容量瓶中, 以水稀释至刻度并摇匀, 用 0. 45 Lm滤 膜过滤,弃去初滤液,取续滤液,得 0. 1 g /L的样品 溶液。 1. 3 实验条件 压力进样 0. 5 Pa @ 5 s,工作电压 25 kV,柱温 25 e ,检测波长 273 nm;运行缓冲液, 50mmol /L Tris-H 3PO 4缓冲液 ( pH 4. 85) ; 每次运 行前毛细管用 0. 1 mo l/L 氢氧化钠溶液冲洗 5m in,超纯水冲洗 3 m in,运行缓冲液冲洗 3 m in, 两次运行之间用缓冲液冲洗 3m in。 2 结果 2. 1 马来酸噻吗洛尔对照品及内标 ( A )和样品中 马来酸噻吗洛尔及内标的 CE图 ( B ), 见图 1。 1. 马来酸噻吗洛尔 2. 富马酸比索洛尔 (内标 ) 图 1 对照品 (A )及样品 ( B)毛细管电泳 Fig. 1 CE of samples of A and B 1. T imo lolma leate 2. B isoprolo l Fum arate( internal standard) 2. 2 线性关系 精密量取 / 1. 20项下对照品溶液 0. 25、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5m ,l分别置 10m l容量 瓶中,各加入 1. 0 m l内标溶液,用水稀释至刻度, 摇匀,得到含内标物浓度为 0. 1 g /m ,l对照品浓度 202 第 33卷 第 2期 2008年 4月 贵 阳 医 学 院 学 报 JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE Vo.l 33 No. 2 200814 分别为 0. 025、0. 05、0. 10、0. 15、0. 20、0. 25 g /L的 溶液; 进样, 记录峰面积值。以对照品浓度X ( g /L ) 为横坐标,对照品与内标物峰面积的比值 Y为纵 坐标, 进行线性回归, 得回归方程: Y = 8. 45X + 01235 9, r= 0. 999 4。由此可知, 在内标浓度为 0110 g /L时, 噻吗洛尔含量在 0. 025~ 0. 25 g /L时 线性关系良好。 2. 3 最低检测限与最低定量限 分别以信噪比 3B1和 10B1时马来酸噻吗洛尔溶液的进样浓度代 表最低检测限和最低定量限, 在 0. 5 Pa @ 5 s进样 条件下,马来酸噻吗洛尔的最低检测限为 1. 5 mg / L,最低定量限为 5. 0 g /L。 2. 4 精密度试验 取 0. 10 g /L对照品溶液 (内标 浓度 0. 1 g /L ) , 连续进样 6次, 峰面积比 RSD为 1189%, 迁移时间 RSD为 1. 15%。 2. 5 加样回收率试验 取已知含量同一批号的马 来酸噻吗洛尔滴眼液 20瓶,充分混匀,精密量取相 当于马来酸噻吗洛尔 10 mg的溶液 9份,分别加入 马来酸噻吗洛尔对照品适量,内标溶液 10m ,l置于 100m l容量瓶中,加入适量水充分溶解后以水稀释 至刻度并混匀, 用 0. 45 Lm滤膜过滤, 弃去初滤 液,取续滤液,按 / 1. 30项下实验条件进样, 结果见 表 1。 表 1 加样回收率试验结果 Tab. 1 The results of recovery test 样品含量 ( m g) 加入量 ( mg ) 测得量 ( m g) 回收率 (% ) 平均回 收率 (% ) RSD% 10. 03 3. 50 13. 47 98. 29 10. 25 3. 50 13. 63 96. 57 9. 98 3. 50 13. 41 98. 00 9. 94 7. 00 16. 92 99. 71 10. 35 7. 00 17. 18 97. 57 98. 23 1. 003 10. 15 7. 00 17. 04 98. 43 10. 24 10. 50 20. 60 98. 67 9. 99 10. 50 20. 42 99. 33 10. 16 10. 50 20. 39 97. 43 2. 6 样品含量测定 精密量取内标溶液 1. 0 m ,l 置 10m l容量瓶中, 以样品溶液稀释至刻度。按 / 1. 30项下实验条件进样, 样品相对含量为 99. 64%。 3 讨论 3. 1 内标的选择 分别选择贝凡洛尔、倍他洛尔、 索他洛尔和比索洛尔作为内标, 通过改变电压、温 度、缓冲液种类及 pH值, 不能达到基线分离。比 索洛尔在本实验条件下, 与马来酸噻吗洛尔迁移时 间相差不到 1m in且能完全分离, 故本文选择比索 洛尔为内标。 3. 2 缓冲体系的选择 缓冲液的 pH值既影响溶 质的解离状态, 又影响电渗流的大小。通过考察多 种 pH值对分离的影响, 最后选用 pH 4. 85的 Tris- H 3PO4盐缓冲液, 分析时间短,分离度较好。 3. 3 电压的选择 选择分离电压 15 kV、20 kV、 25 kV,结果显示电压为 20 kV时迁移时间较为适 宜,而 15 kV时迁移时间较长, 25 kV时迁移时间 太短,使马来酸噻吗洛尔和比索洛尔不能较好分 离。 3. 4 温度的选择 通过改变温度, 表明柱温降低 分离度变好, 但柱效降低, 分析时间变长, 温度为 25 e 时分离度和分析时间均较适合。 4 参考文献 [ 1] 刘俊田.药理学 [M ]. 郑州:郑州大学出版社, 2004: 8. [ 2] 钱厚海,梁贵键, 朱莉, 等. 马来酸噻吗洛尔滴眼液的 H PLC测定 [ J] . 中国医药工业杂志, 1995 ( 5) : 209 - 212. [ 3] 左明,段更利, 曹志娟. 高效液相色谱法测定右旋噻吗 洛尔及其对映体含量 [ J]. 中国新药与临床杂志, 2003 ( 9): 539- 542. [ 4] 税庆华,李志明, 于盛茂. HPLC法测定马来酸噻吗洛 尔滴眼液中的有关物质 [ J]. 食品与药品, 2005 ( 12): 41- 42. [ 5] 藿香敏.反相离子对色谱法测定马来酸噻吗洛尔及其 滴眼液中有关物质 [ J]. 药物分析杂志, 2000( 3) : 181 - 184. [ 6] 陈伟,林新华. 紫外 -可见分光光度法新技术在药物分 析中应用的进展 [ J] . 福建医科大学学报, 2001 ( 3): 299- 302. ( 2007-11-02收稿, 2007-12-26修回 ) 203 2期 赵 莲 毛细管电泳法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液的含量