猪伪狂犬病

null猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR) 猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR) null概述 病原学 流行病学 临床症状 病理变化 诊断 防治null概述 是PRV引起的多种家畜和野生动物以发热、奇痒（猪除外）繁殖障碍及脑脊髓炎为主要症状的一种高度接触性传染疾病。 最早于1813年发生于美国的牛群中。 1902年匈牙利学者Aujeszky首次发现。 我国自1948年首次报道。我国已有24个省市报道。 null病原学 PRV属于疱疹病毒科 α-疱疹病毒亚科， 猪疱疹病毒Ⅰ型。 PRV粒子呈椭圆或圆形，至少含30种病毒编码的结构蛋白质，聚集成4种形态不同的病毒成分： null最里面的核蛋白核心 具有二十面体结构的衣壳 包含病毒糖蛋白的脂质囊膜 间质蛋白质null猪伪狂犬病毒透射电镜照片null磷钨酸复染电镜观察到典型病毒粒子nullPRV的基因组 为线状双链DNA分子，大小为150Kb,G+C含量高达74%，分子量为99×106 Da. 由独特长区（UL）、独特短区（US）、及位于US两侧的末端重复序列（TR）和内部重复序列（IR）构成。 nullRepeatRepeatULUSgBgCgHtkgGgIgDgEIRTRnull抗原性 迄今为止，PRV毒株都呈现一致的血清学反应，没有发现抗原性不同的毒株，但毒力有强弱之分。 null培养特性 PRV病毒具有嗜酸性，在兔肾和猪肾细胞（原代细胞或传代细胞系）最适于病毒增殖。引起细胞病变和空斑。 在鸡胚尿囊膜上也很容易生长，接种后3~4天形成大小不一的隆起的白色痘泡。nullnull流行病学 1.传染源 病猪和隐性感染猪是本病的主要传染源。 鼠类粪便中含大量病毒，也能传播本病。 null2.传播途径 经消化道、呼吸道、损伤的皮肤以及生 殖道均可感染。仔猪常因吃了感染母猪的乳而发病。怀孕母猪感染本病后，病毒可经胎盘而使胎儿感染，以致引起流 产和死产。一般呈地方流行性发生，多发生于冬、春两季。 null3.易感动物 对伪狂犬病毒有易感性的动物甚多，有猪 、牛、羊、犬、猫及某些野生动物等。而发病最多的是哺乳仔猪，且病死率极高，成猪多为隐性感染。null临床症状 1.引起死胎、流产、木乃伊，其中临床以产死胎为主。 2.引起新生仔猪大量死亡，15日龄内仔猪死亡率为100%。 3.引起断奶仔猪发病猪死亡。以上新生仔猪和断奶仔猪都不同程度表现为拉稀、神经症状、作划水样或转圈运动，口吐白沫，阵挛性和强直性痉挛及瘙痒等症状。 null 4.引起种猪不育、公猪发生睾丸肿胀、萎缩，失去种用能力。母猪表现为不发情、返情、屡配不孕等。 5.育肥猪表现为慢性呼吸道症状、增重迟缓、饲料报酬低、推迟上市时间，少数病例出现神经症状死亡情况。null流产、死胎null仔猪出现神经症状null仔猪腹泻，死亡前游泳状，鸣叫，声音嘶哑null仔猪奇痒和顶墙null仔猪的瘙痒null病理变化 病理剖检：猪表现为肺水肿、淋巴结、脾脏和肾脏出血，子宫内感染后可发展为溶解坏死性胎盘炎，其它无肉眼可见变化。 null 组织病理学变化：在猪可检出扁桃体和咽喉隐窝上皮等部位的核内包涵体以及规则地见到非化脓性脑炎和神经节炎。血管周围浸润和扩散或神经质增生及神经胶质坏死病灶，同时也可观察到神经节内包涵体。 null大脑神经元肿胀变性，胞核可见核内包涵体null淋巴结呈卡他性出血性炎症null肝脏小叶周边区出现凝固性坏死，（HE染色，× 40）null诊断 1.病毒分离鉴定 无菌采集病猪或死亡猪脑组织，用无菌生理盐水按1：5作匀浆，-70℃反复冻融2~3次后，3000r/min离心10min，去掉组织块，加入青链霉素100μ /mL，4 ℃作用12h，用上清液接种已长成单层的BHK-21细胞或其它敏感细胞，置37 ℃温箱中培养，逐日观察，直至7天，如含有PRV，则细胞应出现圆缩变性。null 2.血清学诊断 可通过ELISA、乳胶凝集试验或琼脂扩散沉淀反应来判断。nullnull 3.动物接种试验 可证明病料中有无PRV，但有的毒株对家兔敏感，有的则对小鼠敏感。nullnullBalb/c小白鼠症状null 4.分子生物学诊断 4.1核酸杂交技术 基本原理：当带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混合在一起时，其相应的区段会退火形成双链的结构。 null 4.2聚合酶链式反应（PCR） 基本原理：双链DNA分子在临近沸点的温度下加热时会分离成单链的DNA分子，然后DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷酸（dNTP）合成新生的互补链。 最重要原因：在数小时内对仅有的几个拷贝基因放大数百万倍，使其在凝胶电泳后形成明显可见的DNA带。null 应用改进的PCR可将PRV强弱毒区分开来。 在gG基因上游1个通用引物A，再分别根据gG基因和Lac基因设计一个下游引物B和C，对野毒株和疫苗株（其基因gG被LAC基因取代）DNA进行扩增。结果A、B只能从野毒DNA中扩增出特异性片段，引物A、C仅能从疫苗毒中扩增出特异性片段。 null 4.3酶切图谱 基本原理：300Kb以下的病毒DNA经内切酶水解，进行琼脂凝胶电泳后，可观察到清晰的DNA带。 将分离的病毒的酶切图谱与准确的内切酶图谱比较，从而对病毒核酸进行鉴定及诊断。null 4.4 DNA核苷酸序列分析 是在核酸酶学和生物化学的基础上创立并发展起来的一门重要DNA技术。现在测序反应已经标准化，许多生化公司均有测序试剂盒销售。null 4.5 分子生物学技术和常规免疫学方法的结合在PRV检测中的应用 Fang LR,Chen HC等利用基因重组技术得到伪狂犬病毒gE糖蛋白，将纯化的糖蛋白用作乳胶凝集试验抗原，使该乳胶凝集试验更加敏感、简便，并能进行强弱毒的鉴别诊断。 随着PRV基因工程疫苗的出现，相应鉴别ELISA也问世了。有gE-ELISA、gC-ELISA、gG-ELISA等。 null防治 1.免疫疫苗 控制伪狂犬病的根本是免疫预防。 疫苗种类有： 1.1 灭活苗 对妊娠母猪安全、不存在毒 力返强和散毒危险，但要求抗原含量高， 免疫效果不理想null 1.2 弱毒苗 用鸡胚或细胞传代至弱的弱毒苗存在毒力返强、基因重组以及PRV的神经潜伏而不安全。 现在广泛应用基因缺失弱毒疫苗。null 基因缺失弱毒疫苗：缺失至少一种必需基因，使病毒毒力降低，同时这个基因又是高毒保守的，编码的蛋白能用于鉴别诊断，即这种蛋白可刺激机体产生可以检测到的抗体，可以区分疫苗还是野毒感染。 gE基因缺失疫苗免疫猪不产生gE抗体 野毒感染产生gE抗体 PRV疫苗有gC、gE、UL21以及TK缺失。null 1.3 活病毒载体疫苗：把一个或多个可以编码保护性抗原的基因扦入到另一种病毒基因组中，并提取表达。 对PRV目前报道的活病毒载体有腺病毒、杆状病毒、痘病毒等。 优点：避免了PRV疫苗株与野毒株同时感染动物或用两种不同疫苗免疫发生遗传重组的可能，同时可以把多种病原的保护性基因同时插入至一个载体制成多价苗。 null PRV本身基因组庞大，含有许多非必需基因，外源基因可以插入而不影响其表达，将与PRV毒性相关的糖蛋白和胸苷激酶（TK）基因灭活，使PRV弱毒化，从而成为发展亚单位疫苗的一个较理想载体。例如将CSFV E2基因克隆到该病毒活载体上，即可获得对PR和CSF的双重保护。 null 1.4 DNA疫苗 把携带病毒基因的质粒DNA直接导入肌肉内组织，在真核启动子控制下肌细胞表达病毒蛋白，诱导机体产生体液免疫、细胞介导免疫而产生保护，而且抗原表达维持时间长。可以免受抗体的干扰。null 2. 免疫方法 种公猪用灭活疫苗每年免疫2次。种母猪用灭活苗在配种前和产前各免疫1次。商品猪可在抗体阴性时用基因缺失弱毒疫苗免疫1次（一般在50~70日龄）；具有母源抗体时，如用弱毒苗免疫，应在4周后再免疫1次。null 此外，猪场必须定期灭鼠 ,将其减少到最低数量。犬、猫、家禽及鸟类均可携带和传播本病 ,都应禁止进入猪场。还应加强饲养管理 ,全进全出 ,彻底消毒。null　　THANK YOU！