复方北虫草胶囊质量标准的研究

复方北虫草胶囊质量的研究 刘汉清!，王健!，程建明!，马文娜!，韩继永!，刘为民"，陈克敏" （!南京中医药大学药学院，江苏 南京 "!##"$；"江苏省海安县中医院，江苏 海安 ""%%##） 摘要：目的 制定复方北虫草胶囊质量标准。方法 采用薄层色谱法，分别以化学对照品、阳性与阴性液为对照，鉴别供 试品中北虫草等主要组成药物，并采用 &’()法测定其中腺苷和丹皮酚的含量。结果 供试品薄层色谱分别与化学对 照品（腺苷、齐墩果酸、丹皮酚）及阳性对照药物（北虫草、槲寄生、牡丹皮）薄层色谱在相应位置上显相同的斑点。&’() 法测定供试品中腺苷和丹皮酚含量在 #* #!+,和 #* !-$,以上。结论 定性鉴别和定量分析方法先进，重现性、可行性 好，为供试品的质量控制提供了可靠的保证。 关键词：复方北虫草胶囊；薄层色谱鉴别；&’()法；腺苷；丹皮酚；齐墩果酸；高血压病 中图号：."+/*! 文献标识码：0 文章编号：!### 1 2##2（"##"）#2 1 #"$2 1 #3 复方北虫草胶囊是以滋补肝肾，平肝潜阳为 治则，由北虫草、槲寄生等药物研制而成的治疗高 血压病的临床有效药物。为稳定其质量，对其组 方主要药物进行薄层色谱定性鉴别和 &’()定量 研究。 ! 实验 ! *! 仪器 ’45 1 6 型自动铺板器（重庆南岸动力仪器 厂），&&/数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公 司），紫外透射反射仪（北京六一仪器厂），数码相 机（英国），75 1 2##超声波清洗器（上海超声波仪 器厂），89:;<= 1 2!2高效液相色谱仪，() 1 !#0高 效液相色谱仪（日本岛津）等。 ! *" 试剂 无水乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、硫酸、环己 烷、乙醚、氯仿、异丙醇等，均为分析纯；甲醇为色 谱纯；水为新鲜重蒸水。 ! *3 药品与对照品 北虫草、牡丹皮、槲寄生（购自江苏省药材公 司，经本校刘训红副教授鉴定）；复方北虫草胶囊 （海安县中医院，批号 ##!!"#，##!"#"，##!""2）； 腺苷、丹皮酚、齐墩果酸（供定性鉴别或含量测定 用），均购自中国药品生物制品检定所。 ! */ 薄层板的制备 ! */ *! 硅胶 >板的制备 取硅胶 > %# ?，加蒸馏水 !2# @(，调成糊状， 用自动铺板器铺成 / @@厚薄板，晾干后，!!#A活 化 3# @BC，备用。 ! */ *" 硅胶 > )D) 1 E9板的制备 取硅胶 > -2 ?，加 # * /, )D) 1 E9 溶液 !+# @(，调成糊状，用自动铺板器铺成 / @@厚薄板， 阴干后，!!#A活化 3# @BC，备用。 ! */ *3 硅胶 >F"2/板的制备 取硅胶 >F"2/2# ?，加 # * /,)D) 1 E9 溶液和 # *! @GH I ( E9"&’J/溶液各 -2 @(，混合搅拌调匀， 用自动铺板器铺成 # * / @@厚薄板，晾干（必要时 烘干）备用。 " 方法与结果 " *! 薄层色谱鉴别［!］ " *! *! 北虫草薄层色谱鉴别 " *! *! *! 对照品溶液的配制 取腺苷对照品 " @?，加 2#,乙醇溶液 " @(， 溶解即得。 " *! *! *" 供试液及阳性、阴性对照液的制备 取北虫草胶囊内容物 % ?、北虫草药材粉末 3 ?以及不含北虫草的处方药粉 3 ?，分别加 2#,乙 收稿日期："##" 1 #3 1 "!；修稿日期："##" 1 #/ 1 !2 作者简介：刘汉清（!$/- 1），男，江苏靖江人，南京中医药大学教授。 —2$"— 南京中医药大学学报（自然科学版）"##"年 $月第 !+卷第 2期 !"#$%&’ "( %&%!)%* +,- #%)./$0)+1（%&+#$&’ 0,)/%,/）.23 4!+ %2 42 056 4 !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! "##" 万方数据 醇 !" #$，索氏回流提取 ! %& ’。提取液适当浓缩， 滤取药液，即得。 ! %( %( %) 点样、展开 取对照品溶液、供试品溶液、阳性对照液及阴 性对照液，分别点样于硅胶 *+!&,板上，以氯仿 -醋 酸乙酯 -异丙醇 -水（& -! -. -" % .）为展开剂（展开槽 内先以氨蒸气饱和），上行展开，取出晾干。 ! %( %( %, 结果 置 !&, /#紫外灯下检视，供试品色谱与化学 对照品及阳性对照品色谱在相同位置均显暗紫色 斑点。 ! %( %! 槲寄生的薄层色谱鉴别 ! %( %! %( 对照品溶液的配制 取齐墩果酸 " % ! #0，加无水乙醇 ! #$，溶解 即得。 ! %( %! %! 供试液阴性对照液的配制 取胶囊内药物 . 0、槲寄生药粉 ( % & 0及不含 槲寄生的处方药粉 , % & 0，分别加入 1&2乙醇 )" #$，回流提取 )" #3/，滤取药液，浓缩至干。加无 水乙醇适量溶解，滤过即得供试液、阳性对照液及 阴性对照液。 ! %( %! %) 点样、展开 取上述对照品液、供试液、阳性对照液及阴性 对照液，分别点样于硅胶 454 6 78板上，以甲苯 - 乙酸乙酯 -甲酸（!" -, -" %&）为展开剂上行展开，取 出晾干。 ! %( %! %, 显色与结果 喷雾 ("2硫酸乙醇液适量，热风干燥。于 ).& /#紫外灯下检视，供试品与化学对照品及阳 性对照品色谱在相同位置显亮绿色荧光斑点。 ! %( %) 牡丹皮的薄层色谱鉴别 ! %( %) %( 对照品溶液的配制 取丹皮酚对照品 ! #0，加丙酮 ! #$，使之溶 解，即得。 ! %( %) %! 供试液及阳性、阴性对照液的配制 取胶囊内容物 9 0，丹皮药粉 ( 0及不含牡丹 皮的处方药粉 : 0，分别加乙醚 ," #$，(" #$，)" #$，浸泡 (" #3/，超声处理 )" #3/，滤取药液，蒸 干，分别加丙酮 ! #$，使溶解，即得供试液、阳性 对照液及阴性对照液。 ! %( %) %) 点样、展开 取上述对照品溶液、供试液、阳性对照液及阴 性对照液各 ("!$，分别点样于硅胶 *板上，以环 己烷 -乙酸乙酯（) - (）为展开剂，上行展开，取出， 晾干。 ! %( %) %, 显色与结果 喷以盐酸酸性 ("2三氯化铁乙醇液，热风吹 至斑点显色清晰。供试品色谱与化学对照品及阳 性对照品色谱在相应位置上显相同的蓝褐色斑 点。 ! %! 含量测定 ! %! %( 腺苷的含量测定 ! %! %( %( 色谱条件 色谱柱：;<=#8>3? 4(9（, % . ## @ !&" ##，& !$）；流动相：(2四氢呋喃A磷酸盐缓冲液（BC D .%9）；流速：( %! #$ E #3/；检测波长：!." /#；柱温： )"F；灵敏度：" %&"" " GH+I；进样量：&!$；在此条 件下腺苷的保留时间为 (: %&. #3/。 ! %! %( %! 空白试验 按处方比例及工艺制备不含北虫草的空白样 品，按样品液制备方法制备、测定。结果明，处 方中其它药材和辅料对腺苷的测定无干扰。 ! %! %( %) 标准曲线制备 精密称取腺苷对照品 " % ((& #0，置 (" #$容 量瓶中，加 1"2甲醇溶解并定容。再稀释，使腺 苷浓度分别为 ( %,): &，! % 9:&，& % :&，(( % &"，!) % ""， ,. %""!0 E #$，在拟定色谱条件下进样 &!$，测定 峰面积，以峰面积A浓度作图，腺苷在 ( % ,):& J ,.%""!0 E #$范围内呈良好的线性关系，回归方 程为 !" D ). .)"# K (& :9! % !&1，相关系数 $ D "%111 1。 ! %! %( %, 供试液的制备 精密称取样品 ! % ,(.: 0于索氏提取器中，加 甲醇 )" #$，回流提取 ! ’，提取液另存。药渣同 法回流 !次，时间均 ( % & ’。合并 )次提取液，水 浴蒸干，以 &"2乙醇定容至 !" #$，经 " % ,& L#微 孔滤膜过滤，即得供试液。 ! %! %( %& 精密度试验 取供试液在拟定色谱条件下连续进样 . 次， 得峰面积，结果经数理统计处理，%&’ D "%!):2。 ! %! %( %. 重现性试验 以拟定的提取方法平行提取 . 份样品，在拟 定的色谱条件下，分别测定峰面积，结果经数理统 计处理，%&’ D "%)&,2。 ! %! %( %: 样品含量测定 以拟定的方法，进样 &!$，测定峰面积。并按 —.1!— 南京中医药大学学报（自然科学版）!""!年 1月第 (9卷第 &期 万方数据 外标法以峰面积计算腺苷含量，结果见表 !。 表 ! 样品含量测定结果 批号 峰面积 含量（"） 均值（"） ##!!$# %&’ (!$)# #)#!% *# #)#!%’* %&$ &%()# #)#!% ’* %&# !(%)# #)#!% ’# %$% $(()# #)#!% &( ##!$#$ %$% #&+)# #)#!% &* #)#!% &( %$% !%()# #)#!% &( %$* ,(%)# #)#!% &! ##!$$* %$+ &’’)# #)#!% &’ #)#!% &$ %$* ,*()# #)#!% &! $ )$ )! )% 加样回收率试验 精密称定已知含量的样品 # ) %$! ’ -，# ) ++, ’ -，# ),$! % -，# ) ,#, ! -，! ) #!’ * -，! ) #$& * -，置索 氏提取器中，分别精密量取 ’( ) ##!- . /0腺苷对 照品 * ) #，* ) #，’ ) #，’ ) #，& ) #，& ) # /0 及甲醇 !# /0，按样品含量测定项下方法操作，结果样品平 均回收率为 ,, )("，!"# 1 !)#!"。 $ )$ )$ 丹皮酚的含量测定 $ )$ )$ )! 色谱条件［$］ 色谱柱：234/ 5 67 5 892（’ )( // : $*# //，!# !0）；流动相：甲醇 ;水（*# ; *#）；流速：! ) # /0 . /4<； 检测波长：$+’ ! $%# ,&, ) $&!，相关系 数为 ’ 1 #),,% (。 $ )$ )$ )’ 供试液的制备 精密称取样品 # ) $(# * -，置 $# /0具塞试管 中，加甲醇 % /0，混匀，超声提取 &# /4<，离心 * /4<，上清液倾入 $* /0容量瓶中，残渣再加甲醇 % /0，混匀，超声 &# /4<，离心 * /4<，上清液并入 $* /0容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，微孔滤膜（# ) ’* !/）滤过，即为供试液。 $ )$ )$ )* 精密度试验 取供试液在拟定色谱条件下连续进样 * 次， 得峰面积，结果经数理统计处理，!"# 1 #),&+"。 $ )$ )$ )( 重现性试验 以拟定的提取方法平行提取 * 份样品，在拟 定的色谱条件下，分别测定峰面积，结果经数理统 计处理，!"# 1 !),&"。 $ )$ )$ )+ 含量测定 以拟定的方法，进样 !#!0，测定峰面积。按 外标法以峰面积计算丹皮酚含量。结果见表 $。 表 $ 含量测定试验结果 批号 峰面积 含量（"） 均值（"） ##!!$# !& $$’ $(’ #)!%$ $ #)!%& & !& &## *+$ #)!%& & !& &+( %+, #)!%’ & !$ %+% ,%& #)!++ ’ ##!$#$ !& #*! ($’ #)!+, % #)!+, $ !& #%, ++% #)!%# & !& !$+ ,&! #)!%# , ##!$$* !& $&& &$, #)!%$ & #)!%$ # !& $($ ’!% #)!%$ + $ )$ )$ )% 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品 # ) !,’ & -，# ) !,+ $ -，# )!,, & -，# ) $#$ ! -，# ) $#, + -，分别准确加入 # )#’( ’ /- . /0丹皮酚标准液 $ ) *，& ) #，& ) *，’ ) #， ’ )* /0及甲醇 * /0，按样品含量测定项下的方法 操作，结果样品平均回收率为 ,, ) &+"，!"# 1 !)&("。 & 讨论 本实验对复方北虫草胶囊中的主要组成药物 北虫草、槲寄生、牡丹皮进行薄层色谱鉴定，文中 展开剂经实验选定，分离效果与重现性好。 在方法学考察和空白试验的基础上，采用 ?@0A法测定制剂中主成分腺苷和指标成分丹皮 酚的含量，方法先进，可行性强。结果表明本品中 $成分的含量分别在 # ) #!%"和 # ) !+,"以上，为 其质量控制提供了保证。 参考文献： ［!］中华人民共和国药典委员会 ) 中国药典 )一部［B］)北 京：化学工业出版社，$###)!%，(*，!’+) ［$］范宋玲，梁武，孙冬梅，等 )牡丹皮浓缩颗粒中丹皮酚的 含量测定［C］)中药材，$###，$&（*）：$,!) —+,$—刘汉清，等：复方北虫草胶囊质量标准的研究 第 *期 万方数据