大肠菌群测定

【GB/T 4789.3—1994】 食品卫生微生物学检验　大肠菌群测定 　　1　主题内容与适用范围 　　本了食品中大肠菌群的测定方法。 　　本标准适用于食品中大肠菌群的测定。 　　2　术语 　　大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 　　食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 　　3　引用标准 　　GB 4789.28　食品卫生微生物学检验　染色法、培养基和试剂 　　4　设备和材料 　　4.1　温箱：36±1℃。 　　4.2　冰箱：0～4℃。 　　4.3　恒温水浴：44.5±0.5℃。 　　4.4　天平。 　　4.5　显微镜。 　　4.6　均质器或乳钵。 　　4.7　平皿：直径为90mm。 　　4.8　试管。 　　4.9　吸管。　　 　　4.10　广口瓶或三角烧瓶：容量为500mL。 　　4.11　玻璃珠：直径约5mm。 　　4.12　载玻片。 　　4.13　酒精灯。 　　4.14　试管架。 　　5　培养基和试剂 　　5.1　乳糖胆盐发酵管：按GB 4789.28中4.9规定。 　　5.2　伊红美蓝琼脂平板：按GB 4789.28中4.25沥规定。 　　5.3　乳糖发酵管：按GB 4789.28中4.10规定。 　　5.4　EC肉汤：按GB 4789.28中4.11规定。 　　5.5　磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。 　　5.6　生理盐水。 　　5.7　革兰氏染色液：按GB 4789.28中2.2规定。 　　6　检验程序 　　大肠菌群检验程序如下： 　　（图略） 　　7　操作步骤 　　7.1　检样稀释 　　7.1.1　以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8 000～10000r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。 　　7.1.2　用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液。 　　7.1.3　另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。 　　7.1.4　根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。 　　7.2　乳糖发酵试验 　　将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。 　　7.3　分离培养 　　将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。 　　7.4　证实试验 　　在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。 　　7.5　报告 　　根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。 　　8　粪大肠菌群(faecal coliform) 　　8.1　用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见7.2条)转种于EC肉汤管内，置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24±2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。 　　8.2　结果报告 　　根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。 　　大肠菌群最可能数(MPN)检索表