乙型肝炎抗病毒治疗药物研究进展

承 德 医 学 院 学 报 J0URNAL 0F CHENGDE MEDICAL COLLEGE 乙型肝炎抗病毒治疗药物研究进展 赵桂琴，王宏伟，李 平 (承德医学院中药系，河北承德 067000) 【关键词】乙型肝炎；抗病毒药物；研究进展 【中图分类号1R512．6 【文献标识码】A 【文章编号】l004—6879(2009)03—0318—03 乙型病毒性肝炎(viral hepatitis type B)简称乙型肝 炎，是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)引起，通过 血液传播的疾病，是肝硬化和肝细胞癌的最常见致病因 素，给人类生命和健康带来严重威胁⋯。全世界大约有3． 5亿人为HBV慢性感染者，每年死亡人数约为20万，位于 死亡原因的第九位，远列艾滋病之前[2I3】。乙型肝炎发病 机制复杂，许多致病环节至今仍未阐明，但病毒持续复 制和机体免疫清除反应是发病的两个基本因素，抗病毒 治疗是清除HBV、减少并发症、防止肝纤维化和肝癌的 根本措施【41。本文综述了抗HBV药物的研究进展。 1 O【一干扰素(interferon--o【，IFN-0【) 长期以来，IFN一仅是国内外公认的治疗慢性乙型 肝炎的首选药物，rlFN G【-2a和rlFN 0【-2b于1986年6月 被美国FDA批准上市。IFN对病毒无直接灭活作用，而是 通过作用于细胞面IFN特异受体 ，诱导抗病毒蛋白 (AVP)产生，从而起到抑制病毒复制与繁殖的作用。IFN 治疗乙型肝炎与对照组比较，对HBeAg和HBV DNA的 清除率提高20％，对H BsAg的清除率提高7％[41，但对 HBeAg阴转率仅有50％f5】，其持久完全应答率(停药一周 后，HBeAg和HBV DNA转阴，ALT恢复正常)较低，为 20％-40％，有产生抗体、停药后易复发等副作用[21。 2 核苷类药物(nucleoside analogues) 2．1 拉米夫定(1amivudine，3TC) 化学名称为二脱氧硫 代胞苷 ，l995年被美国FDA批准治疗HIV／AIDS患者， l998年被我国SFDA及美国FDA批准治疗乙型肝炎。其 活性形式为拉米夫定三磷酸，通过抑制HBV逆转录酶及 HBV多聚酶活性，终止DNA链延长而抑制病毒DNA复 制【61，能有效减少星状细胞激活及胶原纤维合成，从而阻 止肝纤维化发生 。拉米夫定耐受性好 ，不良反应较小， 但长期用药可引起HBV变异，产生耐药突变 ，突变株对 其敏感性降低，病情出现反复，甚至失效【8】。 2．2 阿德福韦(adiefovir，ADV) 为无环腺苷衍生物， 2002年9月被美国FDA批准治疗慢性HBV感染。ADV在 细胞内由细胞激酶逐步催化为其活性代谢物阿德福韦 二磷酸，后者为HBV聚合酶正常底物dATP竞争性抑制 剂及DNA链终止剂。ADV治疗组与对照组比较，HBV DNA的对数值分别下降3．57-3．65及0．98-1．32[910ADV 治疗48周、96周和l 44周的耐药变异率分别为0，2％和 7％，其耐药变异的频率远低于拉米夫定ll⋯。 · 3l8· V01．26 No．3 2009 2．3 恩替卡 韦(entecavir) 为环氧羟碳脱氧鸟苷，具有 较强的抗病毒活性【l l，体外对野生株的抑制能力比拉米 夫定和阿德福韦强l00多倍。研究表明，恩替卡韦的耐药 变异位点伴有拉米夫定的耐药变异，在体外药敏实验中 均表现为对恩替卡韦的敏感性下降和复制能力的减弱 【l21 。 3 双环醇(bicyclo1) 为联苯双酯结构类似物，由中国医学科学院药物研 究所研制，2004年4月，我国SFDA批准为国家一类新药。 双环醇已在15个国家和地区获得了药品专利保护，具有 明显的肝细胞保护作用和一定的抗肝炎病毒作用，已广 泛用于治疗病毒性肝炎和其它慢性肝病[1 l。药理研究表 明，双环醇可以呈浓度依赖性地抑制HepG2 2．2．15细 胞分泌HBeAg和HBsAg，并对细胞内HBV DNA复制具 有明显抑制作用，口服给药对DHBV DNA复制有抑制 作用 。 4 中草药 4．1 提取物显示抗HBV活性的中草药 4．1．1 叶下珠：为大戟科叶下珠属植物叶下珠(Phorb— iceace urinaria L．)的干燥全草，已广泛用于抗乙肝病毒 的治疗。研究表明，叶下珠水提取物可有效抑制HepG2 2．2．1 5细胞分泌HBeAg，并可抑制血清中的DHBV DNA的水平，具有一定的抗HBV作用。用重庆麻鸭乙型 肝炎动物模型观察叶下珠体内抗DHBV的作用，一月后 各剂量组血清DHBV DNA滴度总体水平均有降低，且 停药后DHBV DNA回升现象不明显，提示叶下珠可能 具有远期的抗HBV作用 ¨。 4．1．2 台湾细叶油柑：为大戟科叶下珠属植物台湾细 叶油柑(Phyllanthus Simplex Retz．)的干燥全草。研究表 明，台湾细叶油柑水提取物对HepG2 2．2．1 5细胞分泌 HBeAg和HBsAg均有一定的抑制作用，对DHBV DNA 亦有一定抑制作用【l引。 4．1．3 扯根莱：为虎耳草科扯根莱属植物扯根莱(Pent— horum Chinese Pursh)的干燥全草，是肝苏颗粒的主要成 分之一。扯根莱水提取物对HepG2 2．2．1 5细胞分泌 HBeAg的抑制率为54．09％，具有一定的体外抗HBV作 用。肝苏颗粒浸膏粉体内抗DHBV作用明显，用药后能 使血清中DHBV DNA滴度总体水平显著降低或极显著 降低，大剂量组DHBV DNA无明显回升，说明该药在体 重 堡 匡 堂 堂 塑 JOURNAL OF CHENGDE MEDICAL COLLEGE 内有抗HBV作用，且抗病毒效果与药物剂量大小有一定 关系㈣ 。 4．1．4 人工虫草：冬虫夏草(Cordyceps Sinensis)是我 国的传统中药 ，由于产地局限，产量稀少，人工培养的冬 虫夏草称为虫草菌丝体 ，即人工虫草。研究表明，人工虫 草对慢性乙型肝炎具有较好的疗效，可调节免疫功能 ， 抑制HBV复制，且无明显的毒副作用，价格明显低于天 然虫草，可满足患者长期治疗的需要『1引。 4．1．5 苦参素(kusenin)：是从苦参、苦豆子、广豆根等 植物中提取得到的，主要成分为苦参碱、氧化苦参碱、槐 角碱等 。苦参素静 脉滴注 治疗慢性 乙型肝炎 患者 ， HBeAg和HBV DNA阴转率分别为41．67％和5O％。研究 发现，苦参素能明显诱导脾细胞产生干扰素，并能对抗 氧化可的松对干扰素产生的抑制 ，提示苦参素可能通过 诱导干扰素的产生而发挥其抗病毒作用【1 。 4．2 中草药中具有抗HBVf-~性的单体化合物 4．2．1 汉黄芩素(wogonin)：化学名称为5，7一二羟基一 8一甲氧基黄酮，从中药黄芩(Scutellaria radix)根中分离 得到。汉黄芩素体外对HepG2 2．2．15细胞分泌HBeAg 和HBsAg有明显的剂量及时间依赖性的抑制作用，IC 均为4 g／ml，亦可有效降低HBV DNA水平。体内实验 表明汉黄芩素灌胃给药每日1次连续l0K后可有效降低 感染鸭血清中DHBV DNA水平，ED50为5mg／kg[。 。 4．2．2 Pongamone A，B，C，D，E：从中药水黄皮 (Pongamia pinnata)中分离得到的5个黄酮类化合物，具 有体外抑制DHBV RCs DNAP的作用 1。 4．2．3 Robustaflavone：从中药野漆树(RhusSuccedanea) 中分离得到的双黄酮类化合物，可抑制HepG2 2．2．1 5 细胞中HBV的复制，选择指数为153，与潘西洛韦或拉米 夫定联合应用活性增强[221。 4．2．4 鞣花酸(ellagic acid)：黄酮类化合物，自中药叶 下珠(Phorbiceace urinaria L．)中分离得到，体外具有抑 制HepG2 2．2．1 5细胞分泌HBeAg的作用，但对HBsAg 及HBV DNA无抑制活性【 。 4．2．5 原儿茶醛(protocatechuic aldehyde)：化学名称 为3，4一二羟基苯甲醛，从中药丹参(Salvia miltiorrhiza) 中分离得到。原儿茶醛体外对HepG2 2．2．1 5细胞分泌 HBeAg、HBsAg及HBV DNA均有明显的剂量及时间依 赖性的抑制作用，IC50分别为3．94 g／ml、2．16 g／ml、 2．16 g／ml，也可抑制鸭体内DHBV的复制[241。 4．2．6 Collinin和氧化两面针碱(oxynitidine)：分别自 香椒(Zanthoxylum Schinifolium)的树皮中分离得到的香 豆素类及生物碱类化合物 ，二者均可抑制HBV DNA的 复制，ID 。分别为l7．1 g／ml、30．8 ug／ml，选择指数分 别为3．99、6．491251。 4．2．7 腐败菌素B(destruxin B)：自白菜黑斑病菌 V01．26 No．3 2009 (Alternaria brassicae)中分离得到的大环酰胺类化合物， 体外对人肝癌Hep3B细胞HBsAg的表达有抑制作用，并 且无细胞毒性效应【2 1。 5 小结 乙型肝炎是威胁人类健康的主要疾病，由于HBV进 入肝细胞后产生的cccDNA对各种药物的耐受性以及长 期用药导致的HBV突变株的产生，使得到 目前为止，人 类还没有找到一种确实有效的抗HBV药物。从具有较强 的抗HBV活性的天然植物中分离提取抗HBV活性单体 成分，研究其构效关系，并进行人工合成，是目前抗HBV 药物研发的热点之一。 【参考文献】 【l】彭文伟 ，姚集鲁，肖杰生．病毒性肝炎研究【M]．广 州：广东科技出版社，l998．14一l7． 【21王季午，刘克洲，陈智．人类病毒性疾病【M】．北京： 人民卫生出版社 ，2002．489-490． I 3 l Rajasubramaniam S，Saradhi PP．Rapid multiplication of PhyllanthUS fratevnus：a plant with anti．hepatitis viral activity[J]．Industrial Crops and Products，1997，6(1)：35-40 I 4 l Zeuzem S，Feinman SV．Peginterferon alfa．2a in Patients weth chronic hepatitis B【J】．N Engl J Med，2000，343(10)： l666-l672． I 5 I Hoofnale JH，Bisceglie AM．The treatment of chromic vi— ral hepatitis[J]．N Engl J Med，l997，336(3)：347—356． 【6】Jarvis B，Faulds D．A review of its therapeutic potential in chromichepatitisB[J1．Drugs，1999，58(1)：101-141． [7】Kweon YO，Goodman ZD，Dienstag几，et a1．Decreasing fibrogenesis：an immunohistochemical study of paired liver biopsies following lamivudine therapy for chronic hepatitisB[J]．JHepatol，2001，35(6)：749—755． [8】ZoulimF,DannaouiE．2’，3’-dideoxy—D—L一5一fluorocytidine inhibits duck hepatitis B virus reverse 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独立于细胞核染色体外的基因组 mtDNA，具有自我复制、转录和编码的功能，以母系遗传 方式进行遗传 1¨，但这些过程并不是完全由线粒体独立 完成，而需要核基因组(nuclear DNA，nDNA)的指导与 调控 ，因此线粒体是一种半 自主性细胞器。人类mtDNA ·320· 是一长度为l6569 bp的双链闭环分子，含重链(H)和轻 链(L)，均有编码功能，两链碱基组成明显不同，H链含较 多鸟嘌呤(G)，而L链则含较多的胞嘧啶(C)。每个mt DNA分子编码13／i"多肽编码基因，22个tRNA基因和2个 rRNA基因，这些基因排列紧密，其间没有非编码区【2】。 mtDNA每条链各有自己的启动子 ，D环(D—loOP)是 mtDNA的主要非编码区，位于tRNApro和tRNAphe之 间，含有L和H的复制起始点和启动子，对mtDNA的转录 和复制起调控作用f31，因其调控整个mtDNA的复制和转 录，又称为控制区，长度介于880-1400bp之间。Shisa等【4 对26种哺乳动物的mtDNA结构对比研究发现 ，mtDNA 控制区的结构组成是相似的 ，都可分为 中央保守区、 ETAS(extended termination associated sequences)区和CSB (conserved sequence blok)区。中央保守区呈现高度保 守性，ETAS和CSB区序列则进化迅速 ，长度和碱基组成 在物种间有很大异质性 ，ETAS位于靠近tRNApro基因， 是重链合成的终止区。CSB区靠近tRNAphe基因，含有H 链启动子和L链启动子 ，以及H链的复制起点。 2 线粒体与肿瘤 2．1 线粒体膜与肿瘤 线粒体调节细胞调亡的主要途 径是通过线粒体膜通透性改变 ，介导调亡分子的释放。 线粒体内膜含有电子传递所需的蛋白复合物、ATP合成