GB 29687-2013 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定

GICS ICS G 中华人民共和国国家标准 GB 29687—2013 食品安全国家标准 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 高效液相色谱法 Determination of Albendazole and metabolites residues in aquatic products by High Performance Liquid Chromatographic method 2013-09-16 发布 2014-01-01 实施 中华人民共和国农业部 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 I 目 次 目 次 ..................................................................................................................................................... I 前 言 .................................................................................................................................................... II 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 高效液相色谱法 .................................................... １ 1 范围 .................................................................................................................................................. １ 2 规范性引用文件 .............................................................................................................................. １ 3 原理 .................................................................................................................................................. １ 4 试剂和材料 ...................................................................................................................................... １ 5 仪器与设备 ...................................................................................................................................... ２ 6 样品的制备与保存 .......................................................................................................................... ３ 6.1 样品的制备 ................................................................................................................................... ３ 6.2 样品的保存 ................................................................................................................................... ３ 7 测定步骤 .......................................................................................................................................... ３ 7.1 虾、蟹类样品 ................................................................................................................................ ３ 7.2 鱼类样品 ..................................................................................................................................... ４ 7.3 测定 ............................................................................................................................................... ４ 7.4 空白试验 ........................................................................................................................................ ５ 8 结果计算和表述 .............................................................................................................................. ５ 9 灵敏度、准确度和精密度 ...................................................................................................... ６ 9.1 灵敏度 ......................................................................................................................................... ６ 9.2 准确度 ......................................................................................................................................... ６ 9.3 精密度 ......................................................................................................................................... ６ 附录 A .................................................................................................................................................. ７ II 前 言 本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准系国内首次发布的国家标准。 １ 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了水产品中阿苯达唑及代谢物（2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜）残 留量的制样和高效液相色谱测定方法。 本标准适用于水产品中阿苯达唑及代谢物（2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜）残 留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方 研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 1.1-2000 标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写 GB/T 6682 实验室用水规格和试验方法 SC/T 3016 水产品抽样方法 3 原理 试料中残留的阿苯达唑及代谢物，用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反萃取，高效液相色 谱-荧光检测器测定，外标法定量。 4 试剂和材料 以下所用试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T 6682规定的一级水。 4.1 盐酸 2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑对照品：含量≥99%。 4.2 正己烷：色谱纯。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 甲醇：色谱纯。 4.5 乙酸乙酯：色谱纯。 ２ 4.6 二氯甲烷：色谱纯。 4.7 磷酸 4.8 十二水磷酸氢二钠 4.9 庚烷磺酸钠：色谱纯。 4.10 乙酸铵 4.11 20%甲醇溶液：取甲醇 80 mL，用水溶解并稀释至 100 mL。 4.12 0.05 mol/L 乙酸铵溶液：取乙酸铵 3.85 g，用水溶解并稀释至 1 000 mL。 4.13 0.04 mol/L 庚烷磺酸钠-磷酸溶液：取磷酸 2.7 mL，加水混匀，加庚烷磺酸钠 8.08 g，用水溶解 并稀释至 1 000 mL。 4.14 3%磷酸溶液：取磷酸 1.75 mL，用水溶解并稀释至 100 mL。 4.15 0.02 mol/L 磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠 0.716 g，用水溶解并稀释至 100 mL，用 3% 磷酸溶 液调节 pH 至 8.5，现配现用。 4.16 100 μg/mL 阿苯达唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和 2-氨基阿苯达唑砜标准贮备液：精密称取阿 苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜各 10 mg 以及盐酸 2-氨基阿苯达唑砜 11.5 mg，分别于 100 mL 量 瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为 100 μg/mL 的标准贮备液。-18℃以下避光保存，有效 期 3 个月。 4.17 混合标准工作液：分别精密量取 100 μg/mL 2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿 苯达唑标准储备液适量，于同一量瓶中，用 80%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，配制成浓度分别为 2-氨 基阿苯达唑砜 1.0 μg/mL、阿苯达唑亚砜 2.0 μg/mL、阿苯达唑砜 0.2 μg/mL 以及阿苯达唑 5.0 μg/mL 的 混合标准工作液。2～8℃避光保存，有效期 1 个月。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配荧光检测器。 5.2 分析天平：感量 0.000 01 g。 5.3 天平：感量 0.01 g。 5.4 均质机 5.5 离心机 5.6 旋转蒸发器 5.7 氮吹仪 5.8 梨形瓶：100 mL。 ３ 5.9 滤膜：有机相，0.45 μm。 6 试料的制备与保存 6.1 试料的制备 取适量新鲜或冷冻的鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳，取肌肉部分。绞碎，并 使均质。 ——取均质后的供试样品，作为供试试料。 ——取均质后的空白样品，作为空白试料。 ——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。 6.2 试料的保存 -20℃以下保存。 7 测定步骤 7.1 虾、蟹类 7.1.1 提取 称取试料（2±0.02）g， 于50 mL离心管中，加乙酸乙酯15 mL，均质30 s，振荡5 min，4 000 r/min 离心10 min，取上清液于100 mL 梨形瓶中，残渣备用。另取一50 mL离心管，加乙酸乙酯15 mL，清 洗均质机30 s，洗涤液于残渣中，振荡5 min，4 000 r/min 离心10 min，上清液合并至100 mL 梨形瓶 中，于35℃旋转蒸发至干，用20%甲醇溶液1.0 mL溶解残渣。 7.1.2 除脂 将上述溶液移入10 mL离心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗涤，正己烷转入离心管中， 振荡1 min，4 000 r/min 离心5 min，弃正己烷层液，再加入正己烷1 mL，重复操作两次，取下层液备 用。 7.1.3 净化 备用液中加0.04 mol/L磷酸1 mL，混匀，加二氯甲烷1.5 mL，混合1 min，4 000 r/min 离心5 min， 取二氯甲烷液于10 mL 离心管中，再加二氯甲烷1.5 mL，重复提取两次，合并三次二氯甲烷液于10 mL 离心管中，于35℃氮气吹干；用0.02 mol/L 磷酸氢二钠溶液1.0 mL溶解残余物，加乙酸乙酯2 mL，混 合1 min，4 000 r/min 离心5 min，将乙酸乙酯液移入另一10mL离心管中，再向磷酸氢二钠溶液中加乙 ４ 酸乙酯2 mL，重复提取两次，合并三次乙酸乙酯液，于40℃氮气吹干，用20%甲醇-水1.0 mL溶解残留 物，滤膜过滤，供液相色谱测定。 7.1.4 基质匹配标准溶液的制备 称取5份空白试料（2±0.02） g，于50 mL离心管中，分别加入混合标准工作液0、10、25、100和 200 μL，混匀，按提取、除脂、净化步骤操作，基质标准溶液浓度分别为：2-氨基阿苯达唑砜0、0.01、 0.025、0.1和0.2 μg/mL，阿苯达唑亚砜0、0.02、0.05、0.2和0.4 μg/mL，阿苯达唑砜0、0.002、0.005、 0.02、和0.04 μg/mL，阿苯达唑0、0.05、0.125、0.5和1 μg/mL，供高效液相色谱测定。以测得峰面积 为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。 7.2 鱼类 7.2.1 提取 称取试料（2±0.02）g， 于50 mL离心管中，加乙酸乙酯15 mL，均质30s，震荡提取5 min，4 000 r/min 离心10 min，取上清液于100 mL 梨形瓶中，残渣备用。另取一50 mL 离心管加乙酸乙酯15 mL， 清洗均质机30 s，将此液倒入上述残渣中震荡提取5 min，4 000 r/min 离心10 min，上清液合并至100 mL 梨形瓶中，于35℃减压旋转蒸发至干，加入20%甲醇溶液1.0 mL溶解残渣。 7.2.2 除脂 将上述溶液移入10 mL离心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗涤，正己烷转入离心管，震 荡1 min，4 000 r/min 离心5 min，去除正己烷层，再加入正己烷1 mL，依法重复操作两次。下层溶液 过0.45 μm 有机相滤膜，供液相色谱测定。 7.2.3 混合基质标准溶液的制备 称取5份空白试料（2±0.02）g，于50 mL离心管中，分别加混合标准工作液10、25、100和200 μL， 混匀，按提取、除脂步骤操作，基质标准溶液浓度分别为：2-氨基阿苯达唑砜0、0.01、0.025、0.1和 0.2 μg/mL，阿苯达唑亚砜0、0.02、0.05、0.2和0.4 μg/mL，阿苯达唑砜0、0.002、0.005、0.02、和0.04 μg/mL，阿苯达唑0、0.05、0.125、0.5和1 μg/mL，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对 应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。 7.3 测定 7.3.1 色谱条件 色谱柱：C18（150 mm×4.6 mm，粒径 5 μm ），或相当者。 检测波长：激发波长：290 nm，发射波长：320 nm。 柱温：30 ℃。 ５ 流速：1.0 mL/min。 进样量：30 μL。 流动相：梯度程序（表1）。 表1 流动相梯度洗脱程序 时 间 min 乙 腈 % 甲醇 % 0.05 mol/L 乙酸铵 % 0.00 10 8 82 30.0 40 17 43 32.0 50 20 30 40.0 50 20 30 40.1 10 8 82 45.0 10 8 82 7.3.2 测定法 取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样 溶液中阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜和2-氨基阿苯达唑砜响应值应在仪器检测的线性范围之 内。在上述色谱条件下，标准溶液和空白组织添加试样溶液的高效液相色谱图分别见附录A。 7.4 空白试验 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。 8 结果计算和表述 试料中阿苯达唑及代谢物残留量（μg/kg）：按下计算。 mA VAC X s s    1000 式中： X — 供试试料中相应的阿苯达唑及代谢物残留量，μg/kg； Cs— 基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液浓度，μg/mL； A — 试样溶液中相应的阿苯达唑及代谢物峰面积； As— 基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液的峰面积； V — 样品定容体积，mL； m— 供试试料质量，g。 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 ６ 9 方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 本方法检测限：阿苯达唑为10 μg/kg，2-氨基阿苯达唑砜为2.5 μg/kg，阿苯达唑亚砜为5 μg/kg，阿 苯达唑砜为0.5 μg/kg。 本方法定量限：阿苯达唑为25 μg/kg，2-氨基阿苯达唑砜为5 μg/kg，阿苯达唑亚砜为10 μg/kg，阿 苯达唑砜为1 μg/kg。 9.2 准确度 本方法阿苯达唑在25～500 μg/kg、2-氨基阿苯达唑砜在5～100 μg/kg、阿苯达唑亚砜在10～200 μg/kg以及阿苯达唑砜在1～20 μg/kg添加浓度水平上的回收率为70%~110%。 9.3 精密度 本方法批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。 ７ 附 录 A （资料性附录） 图 A.1 阿苯达唑及其代谢物混合标准溶液色谱图 （阿苯达唑 0.05 μg/mL、2-氨基阿苯达唑砜 0.01 μg/mL、阿苯达唑亚砜 0.02 μg/mL 和阿苯达唑砜 0.0024 μg/mL） 图 A.2 鲫肌肉组织空白试样色谱图 图 A.3 鲫肌肉组织空白添加阿苯达唑及其代谢物试样色谱图 （阿苯达唑 62.5μg/kg、2-氨基阿苯达唑 12.5μg/ kg、阿苯达唑亚砜 25μg/kg、阿苯达唑砜 2.5μg/kg） 注：1—2-氨基阿苯达唑砜； 2—阿苯达唑亚砜； 3—阿苯达唑砜； 4—阿苯达唑。；