比色法测定酚磺乙胺注射液中抗氧剂的含量_兰文

　 表３　多糖含量测定结果 （ｘ±ｓ，ｎ＝３） Ｔａｂ　３　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ （ｘ±ｓ，ｎ＝３） 次数 （ｔｉｍｅｓ） 多糖的百分含量 （ｃｏｎｔｅｎｔ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）／％ Ａ法 Ｂ法 １　 ９．３１　 ７．４８ ２　 ８．９２　 ８．０２ ３　 ９．０８　 ７．８８ ｘ±ｓ　 ９．１０±０．２０　 ７．７９±０．２８ ３　讨论 ３．１　干燥优势的原理性 玉竹干燥过程中当揉糖操作启动后 Ａ法较Ｂ法的干燥 速率明显提高，使药材较早达到收干值 （约鲜重的３０％）。 从操作原理推测，晒软的玉竹经充分的搓揉和挤压将黏液腔 中的糖类成分分散开来，这些因前期干燥已失去一定水分的 黏稠糖液进入细胞的间隙间形成了较高的渗透压，使细胞内 的水分因高浓度的外部环境而脱水，致使水分的流失加速。 ３．２　揉糖操作后玉竹性状半透明化的原理性 传统揉糖法和机器法加工的玉竹药材在性状上明显的区 别是前者呈半透明状，符合药典［４］规定，而后者没有。采用 后法加工的玉竹，机器在转动时也产生一定程度的碰撞和挤 压，但相对于传统操作其作用程度并没有使玉竹的性状发生 半透明化的改变。 玉竹半透明化的前提是积聚于黏液腔内的糖液被揉散至 细胞组织，形成一个内部自产的高渗环境，这样的过程类似 于食品加工中蜜饯的制作，制作蜜饯所用的水果并不透明， 但经过高浓度糖液的煮制，糖液渗入到果肉组织中后，水果 半透明化。所以可以假设玉竹的揉糖过程实际上就是一个不 加辅料的蜜饯制作过程。蜜饯加工过程中渗入水果组织的蔗 糖会有一部分形成转化糖，由二糖变为单糖，这样的转变更 有利于人体的吸收，由此我们也可以假设玉竹的揉糖过程在 产生渗透压的同时也会产生多糖的分解，分解为更易被人体 吸收的糖类。以上设想还需要进一步的实验证明。 ３．３　２种方法操作差异的分析及其各项指标测定结果差异 机器法和揉糖法在操作上无质的区别，前者为大量药材 在转动的带动下集体的相互挤压，后者为人工手动单支的进 行搓揉。以单支药材比较，后者加工的药材得到更充分全面 的揉挤，致使内部糖分的分散程度明显大于前者，所以会有 实验结果得到的干燥优势和性状区别；人工搓揉的充分性使 表面附着的泥土更易脱落，所以总灰分的测定结果为前者大 于后者。浸出物和多糖含量的测定结果为后者优于前者，此 结果可能与干燥过程中药材的呼吸作用产生的自身消耗有 关。经揉糖的药材能较快的失水，产生较少的消耗，此观点 有待进一步研究。 ３．４　传统揉糖加工法保护和改进 本研究结果表明，传统加工法优于机器加工法，但费时 费力，提高了玉竹加工的生产成本，所以建议若能改进当地 普遍使用的旋转式脱毛机，使其加工效果能达到人工揉糖的 程度，不失为一即能保质又能保量的好方法，对中药的传统 加工法也起了继承和发扬的保护作用。 ４　结论 经揉糖方法加工的玉竹药材，在干燥速率、水溶性浸出 物、醇溶性浸出物、总灰分及多糖的含量各项测定结果都优 于机器加工法加工的药材，且差异具有统计学意义。玉竹传 统加工法中揉糖工序有其明显的效用性。   参考文献 ［１］ 刘塔斯，肖冰梅，余惠文 ．玉竹黄精［Ｍ］．１版 ．北京：中国 中医药出版社，２００１：３－４． ［２］ 龚洵胜，陈卫军，刘卫平 ．玉竹 ＧＡＰ生产及加工技术研究 ［Ｊ］．湖南农业科学，２００８，（５）：５１－５２． ［３］ 李一平 ．玉竹规范化生产技术 ［Ｊ］．湖南农业科学，２００４， （３）：５９－６２． ［４］ 中国药典２０１０年版 ．一部［Ｓ］．２０１０：７８－７９． （收稿日期：２０１２－０３－０２；修回日期：２０１２－０４－０１） 比色法测定酚磺乙胺注射液中抗氧剂的含量 　　基金项目：国家药品抽验质量评价分析项目 （编号：２０１１１８５）。 作者简介：兰文，女，主管药师，主要从事药品检验工作，Ｔｅｌ：（０７３１）８２２７５８６１，１３０７７３９０９９８，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌａｎｗ＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ 兰文，朱迎军，王伟姣 （湖南省食品药品检验研究院，长沙　４１０００１） 摘要：目的　建立分光光度法测定酚磺乙胺注射液中抗氧剂的含量。方法　在ＥＤＴＡ２－存在的酸性条件下，利用亚 硫酸氢根与甲醛和碱性品红作用生成的紫红色复合物，在５５３ｎｍ处测定吸光度，以此测定亚硫酸氢钠含量。结果 　亚硫酸氢钠在８．６４５～５１．８７３μｇ·ｍＬ －１吸光度与浓度呈良好的线性关系 （ｒ２＝０．９９９　７），平均回收率为９７．５％ （ｎ＝６），ＲＳＤ为１．４％。结论　本法简便、快速、准确，专属性好，可用于测定酚磺乙胺注射液中抗氧剂的含量。 关键词：酚磺乙胺注射液；抗氧剂；比色法；含量测定 中图分类号：Ｒ９１７　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－２９８１ （２０１２）０５－０３２８－０４ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－２９８１．２０１２．０５．００３ ８２３ Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｍａｙ　２０１２，Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．５　中南药学２０１２年５月第１０卷第５期 Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｉｎ　ｅｔａｍｓｙｌａｔｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｂｙ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ ＬＡＮ　Ｗｅｎ，ＺＨＵ　Ｙｉｎｇ－ｊｕｎ，ＷＡＮＧ　Ｗｅｉ－ｊｉａｏ（Ｈｕｎａｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００１） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｅｔａｍｓｙｌａｔｅ　ｉｎｊｅｃ－ ｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ａ　ｂｕｒｇｕｎｄｙ　ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ａｔ　５５３ｎｍ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｒｅａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｓｏｄｉｕｍ　ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ，ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ　ａｎｄ　ｆｕｃｈｓｉｎ　ｂａｓｉｃ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｃｉｄｉｃ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ＥＤＴＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ　ｗａｓ　８．６４５－５１．８７３μｇ·ｍＬ －１ （ｒ２＝０．９９９　７）． Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９７．５％ （ｎ＝６），ＲＳＤ＝１．４％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄ ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｅｔａｍｓｙｌａｔｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｅｔａｍｓｙｌａｔｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ；ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 　　酚磺乙胺 （ｅｔａｍｓｙｌａｔｅ）为止血药，临床用于血小板功 能不全引起的出血和胃肠道出血、脑出血及泌尿道出血等多 种出血，并用于预防和治疗术中和术后出血［１－３］。其结构中 含有对苯二酚结构，容易被氧化，生产厂家普遍采用亚硫酸 盐如亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或无水亚硫酸钠作为抗氧剂， 起到保持制剂稳定的作用。但亚硫酸盐可能会对人体造成损 害，美国食品药品管理局 （ＦＤＡ）统计，约有５％的哮喘患 者对亚硫酸盐敏感，产生类似哮喘的过敏症状如喘息、呼吸 困难等；静脉给药的亚硫酸盐过敏反应发病快、病情严重。 因此应对此类抗氧剂的加入量进行控制，以提高产品的安全 性指标；目前酚磺乙胺注射液的现行质量［４］中未对其进 行质量控制。 本文参照中国药典２０１０年版三部［５］ “附录Ⅵ Ｌ游离甲 醛测定法”的原理，并参考相关文献［６－１１］，建立了比色法测 定酚磺乙胺注射液中抗氧剂含量的方法，该方法简便、快 速、准确，能更好的控制产品质量。 １　仪器与试药 ＵＶ－２５５０紫外分光光度计 （ＳＨＩＭＡＤＺＵ　ＣＯＲＰＯＲＡ－ ＴＩＯＮ）；ＡＥ２４０电子分析天平 （ＭＥＴＴＬＥＲ　ＴＯＬＥＤＯ，精 密度：十万分之一）。 酚磺乙胺注射液 （国内１８家药品生产企业生产的１７３ 批次样品）；亚硫酸氢钠 （分析纯，国药集团化学试剂有限 公 司，批 号：Ｆ２００８０５２８，以 亚 硫 酸 氢 钠 计，含 量 为 １０２．８％）；水为重蒸馏水；碱性品红、乙二胺四乙酸二钠、 甲醛、盐酸等均为分析纯。 ２　方法与结果 ２．１　溶液的制备 ２．１．１　对照品溶液　取亚硫酸氢钠约８０ｍｇ，精密称定， 置１００ｍＬ量瓶中，加０．０１％乙二胺四乙酸二钠溶液溶解并 稀释至刻度，摇匀，精密量取２ｍＬ，置５０ｍＬ量瓶中，加 ０．０１％乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至刻度，摇匀，即得。 ２．１．２　供试品溶液 　精密量取酚磺乙胺注射液１ｍＬ，置 ５０ｍＬ量瓶中，加０．０１％乙二胺四乙酸二钠溶液稀释置刻 度，摇匀，即得。 ２．１．３　碱性品红溶液　取碱性品红５０ｍｇ，置１００ｍＬ量瓶 中，加水适量使溶解，加盐酸５ｍＬ，加水稀释至刻度，摇 匀，即得。 ２．２　盐酸加入量的选择 取碱性品红５０ｍｇ　３份，置１００ｍＬ量瓶中，加水适量 使溶解，分别加盐酸２、５、１０ｍＬ，加水稀释至刻度，摇 匀，分别与对照品溶液及供试品溶液进行显色反应。结果表 明，盐酸加入量大，颜色偏浅；盐酸加入量小，颜色偏深， 最大吸收波长在５５０～５６０ｎｍ变化；当盐酸加入量为５ｍＬ 时，最大吸收波长在５５３ｎｍ，且较为稳定，故盐酸加入量 选择为５ｍＬ。 ２．３　显色剂加入量的选择及线性关系考察 取亚硫酸氢钠８４．１０ｍｇ，置１００ｍＬ量瓶中，加０．０１％ 乙二胺四乙酸二钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 ０．５、１．０、１．５、２．０、２．５与３．０ｍＬ，分别置５０ｍＬ量瓶 中，加０．０１％乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至刻度，摇匀， 制成系列对照品溶液。分别取碱性品红溶液０．５及１．０ｍＬ， 在甲醛溶液浓度为０．２％的条件下，分别与系列对照品溶液 进行显色反应，将所测得吸光度与系列亚硫酸氢钠对照液浓 度作线性考察，结果表明，碱性品红溶液加入量为１．０ｍＬ 时，在８．６４５～５１．８７３μｇ·ｍＬ －１线性关系良好，得回归方 程为：Ａ＝０．０１８　９Ｃ＋０．００６　１，ｒ２＝０．９９９　７。而且本条件下 供试品显色液吸光度在０．６左右，比较适于定量，故碱性品 红溶液加入量选择为１．０ｍＬ。 ２．４　显色温度及时间选择 ２．４．１　显色温度　取对照品溶液分别在１５、２０、２５、３０、 ４０℃下进行显色反应，结果表明温度对反应溶液的最大吸 收波长没有影响；温度高，反应速度快，但吸光度不稳定； 温度低，反应时间与灵敏度相应延长与降低；在２０～２５℃ 反应最合适。 ２．４．２　显色时间　取供试品溶液１ｍＬ，置２５ｍＬ量瓶中， 加碱性品红溶液与０．２％甲醛溶液各１．０ｍＬ，加０．０１％乙 二胺四乙酸二钠溶液稀释至刻度，摇匀，２０℃放置１２０ｍｉｎ， 以每４ｓ采集１个点的速率，在５５３ｎｍ波长处测得吸光度－ 时间曲线 （见图１）。 ９２３ 中南药学２０１２年５月第１０卷第５期　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｍａｙ　２０１２，Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．５ 　 图１　吸光度－时间曲线 Ｆｉｇ　１　Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ－ｔｉｍｅ　ｃｕｒｖｅ 结果表明，在２０℃条件下，反应５０ｍｉｎ后趋于完全， 在６０ｍｉｎ时显色液吸光度最大，溶液在２ｈ内稳定，故将反 应时间定为６０ｍｉｎ。 为保证结果的可靠性，对照品溶液与供试品溶液控制在 相同条件下显色反应。 ２．５　显色方法的确定 精密量取供试品溶液及对照品溶液各１ｍＬ，分别置 ２５ｍＬ量瓶中，加碱性品红溶液与０．２％甲醛溶液各１．０ｍＬ， 加０．０１％乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至刻度，摇匀，室温放 置６０ｍｉｎ，同法做空白试验。照紫外－可见分光光度法在 ５５３ｎｍ波长处测定吸光度，计算供试品中亚硫酸氢钠的含量。 ２．６　阴性样品干扰试验 取不含抗氧剂的阴性样品溶液与空白试剂，按“２．５”项下 方法显色测定，阴性样品溶液与空白试剂的吸光度值及图谱均 一致，故以空白试剂为本底作相应扣除，不干扰测定结果。 ２．７　精密度试验 取 “２．３”项下的线性第４份溶液，连续测量５次，测 定其吸光度的ＲＳＤ为０．９９％，结果表明方法精密度良好。 ２．８　加样回收试验 取亚硫酸氢钠０．１０２　６ｇ，精密称定，置１００ｍＬ量瓶 中，加０．０１％乙二胺四乙酸二钠溶液溶解并稀释至刻度， 摇匀，作为对照品储备液；取已知含量的样品 （Ａ公司，批 号：１０１２０８５，规格２ｍＬ／０．５ｇ酚磺乙胺，亚硫酸氢钠含量 为０．１８０　３％）０．５０ｍＬ （共６份），分别至５０ｍＬ量瓶中， 各加对照品储备液１．００ｍＬ，加０．０１％乙二胺四乙酸二钠 溶液稀释至刻度，摇匀，按 “２．５”项下方法显色并测定， 计算回收率，结果见表１。 ２．９　重复性试验 取同一批样品 （Ａ公司，批号：１０１２０８５）６份，依法 测定，结果平均含量为０．１８０　３％，ＲＳＤ为０．７５％，表明方 法重复性较好。 ２．１０　样品测定 取１８家生产企业的１７３批次样品，依法测定，以外标 法按吸光度计算抗氧剂含量，结果见表２。 表１　加样回收试验结果 （ｎ＝６） Ｔａｂ　１　Ｒｅｃｏｖｅｒｙ 样品中含量 （ｓａｍｐｌｅ　ａｍｏｕｎｔ）／ｍｇ 加入对照品量 （ａｄｄｅｄ　ａｍｏｕｎｔ）／ｍｇ 测得量 （ｍｅａｓｕｒｅｄ　ａｍｏｕｎｔ）／ｍｇ 回收率 （ｒｅｃｏｖｅｒｙ）／％ 平均回收率 （ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ）／％ ＲＳＤ／％ ０．９０１　５　 １．０５４　７　 １．９１９　７　 ９６．５ ０．９０１　５　 １．０５４　７　 １．９４８　４　 ９９．３ ０．９０１　５　 １．０５４　７　 １．９４２　９　 ９８．７ ０．９０１　５　 １．０５４　７　 １．９２７　６　 ９７．３ ０．９０１　５　 １．０５４　７　 １．９２４　８　 ９７．０ ０．９０１　５　 １．０５４　７　 １．９１３　６　 ９６．０ ９７．５　 １．４ 表２　酚磺乙胺注射液中抗氧剂含量测定结果 Ｔａｂ　２　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｉｎ　ｅｔａｍｓｙｌａｔｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ 生产企业 （ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ） 批数 （ｎ） 处方中加入量 （ａｄｄｅｄ　ａｍｏｕｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）／％ 焦亚硫 酸钠 （ｓｏｄｉｕｍ ｐｙｒｏｓｕｌｆｉｔｅ） 无水亚硫 酸钠 （ａｎｈｙｄｒｏｕｓ ｓｏｄｉｕｍ　ｓｕｌｆｉｔｅ） 亚硫酸 氢钠 （ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ） 折算为亚硫 酸氢钠量 （ｃｏｎｖｅｒｔｅｄ ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ） 平均测得量 （ａｖｅｒａｇｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ａｍｏｕｎｔ）／％ 相当处方量 （ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ａｍｏｕｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）／％ Ａ公司 ５３　 ０．２ ／ ／ ０．２１９　 ０．１５３　 ６９．９ Ｂ公司 ４ ／ ／ ０．２　 ０．２００　 ０．１５３　 ７６．５ Ｃ公司 １８　 ０．２ ／ ／ ０．２１９　 ０．１６９　 ７７．２ Ｄ公司 ２ ／ ／ ０．１５　 ０．１５０　 ０．１２１　 ８０．７ Ｅ公司 ５ ／ ／ ０．１　 ０．１００　 ０．１８０　 １８０．０　 Ｆ公司 ５ ／ ／ ０．２　 ０．２００　 ０．１６８　 ８４．０ Ｇ公司 ２ ／ ／ ０．１　 ０．１００　 ０．０７０　 ７０．０ Ｈ公司 ２ ／ ／ ０．１５　 ０．１５０　 ０．０９９　 ６６．０ Ｉ公司 １５　 ／ ／ ０．１００　 ０．１００　 ０．０７５　 ７５．０ Ｊ公司 ４ ／ ／ ０．１　 ０．１００　 ０．０８０　 ８０．０ Ｋ公司 ５　 ０．１ ／ ／ ０．１０９　 ０．０８１　 ７４．３ Ｌ公司 ９ ／ ０．１ ／ ０．０８３　 ０．０５２　 ６２．６ Ｍ公司 ５　 ０．１５　 ０．０３２　５ ／ ０．１９１　 ０．１４６　 ７６．４ Ｎ公司 １５　 ０．４ ／ ／ ０．４３８　 ０．３７９　 ８６．５ Ｏ公司 ５　 ０．２ ／ ／ ０．２１９　 ０．１２６　 ５７．５ Ｐ公司 ４ ／ ／ ０．１　 ０．１００　 ０．０８３　 ８３．０ Ｑ公司 １２　 ／ ／ ０．２　 ０．２００　 ０．１８１　 ９０．５ Ｒ公司 ８　 ０．１ ／ ／ ０．１０９　 ０．０７６　 ６９．７ ０３３ Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｍａｙ　２０１２，Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．５　中南药学２０１２年５月第１０卷第５期 　　因不同生产厂家加入的抗氧剂不同，分别有亚硫酸氢 钠 （ＮａＨＳＯ３）、焦亚硫酸钠 （Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）和无水亚硫酸钠 （Ｎａ２ＳＯ３），为了便于统一计算和比较分析，表２中结果为 将焦亚硫酸钠和无水亚硫酸钠折算为亚硫酸氢钠计算的 结果。 无水亚硫酸钠折算为亚硫酸氢钠按下式计算： Ｃ１＝ Ｍ１ Ｍ２×Ｃ２ 焦亚硫酸钠折算为亚硫酸氢钠按下式计算： Ｃ１＝ ２×Ｍ１ Ｍ３ ×Ｃ３ 式中Ｃ１ 为亚硫酸氢钠的浓度 （％）；Ｃ２ 为无水亚硫酸 钠的浓度 （％）；Ｃ３ 为焦亚硫酸钠的浓度 （％）；Ｍ１ 为亚 硫酸氢钠分子量；Ｍ２ 为无水亚硫酸钠分子量；Ｍ３ 为焦亚 硫酸钠分子量。 ３　讨论 ３．１　检测波长的选择 亚硫酸氢根在ＥＤＴＡ２－存在的酸性条件下，与甲醛和 碱性品红作用，经分子重排，生成具有醌型结构的紫红色 络合物，在５５０～５６０ｎｍ具有较大的吸收，最大吸收波长 与溶液的酸度等因素有关。为确定检测波长，取对照品溶 液和供试品溶液分别显色后在４００～６００ｎｍ扫描，结果显 示在５５３ｎｍ波长处有最大吸收，在此波长下阴性样品及空 白试剂均无干扰，故选择５５３ｎｍ为测定波长。 ３．２　对照品的确定 本文采用分析纯亚硫酸氢钠作为对照品，本品为亚硫 酸氢钠与焦亚硫酸钠的混合物，且性质不稳定，所以临用 前按照中国药典２０１０年版二部［１２］的方法测定含量，并折算 为亚硫酸氢钠 （ＮａＨＳＯ３）计算。 ３．３　小结 总体而言，１７３批次样品抗氧剂的浓度在０．０５０％～ ０．３７９％，大部分企业抗氧剂的测得量在处方量的５７．５％～ ９０．５％，仅Ｅ公司的样品中抗氧剂的测得量为处方量的 １８０．０％，推测该企业在实际生产中抗氧剂投入量为处方量 的２倍；Ｎ公司的处方中，抗氧剂的加入量为０．４３８％，实 际测得量为０．３７９％，已经超过中国药典［１２］２０１０年版二部 附录中关于注射剂中抗氧剂浓度 （０．１％～０．２％）的要求， 建议该企业对处方进行调整，降低抗氧剂的用量。   参考文献 ［１］ 黄峻 ．新编临床药物手册［Ｍ］．４版 ．上海：上海科学技术出 版社，２００６：７８４． ［２］ 陈新谦，金有豫，汤光 ．新编药物学［Ｍ］．１６版 ．北京：人民 卫生出版社，２００６：５６９． ［３］ 贾公孚，李涛，许莉 ．化学制剂药物的毒副反应及其防治 ［Ｍ］．北京：中国协和医科大学出版社，２００４：５６１． ［４］ 中国药典１９９５版 ．二部［Ｓ］．１９９５：７８８－７９０． ［５］ 中国药典２０１０版 ．三部［Ｓ］．２０１０：附录３８－３９． ［６］ 隋玉荣，王培，黄哲甦 ．复方氨基酸注射液中抗氧剂的含量 测定［Ｊ］．天津药学，２００９，２１ （１）：６． ［７］ 吴小曼，纪宇 ．比色法测定复方氨基酸注射液 （１８ＡＡ－Ｉ）中 焦亚硫酸钠的含量［Ｊ］．中国药品标准，２００７，８ （５）：３８－４０． ［８］ 姚克荣，徐连连 ．影响复方氯基酸注射液中焦亚硫酸钠含量测 定的因素［Ｊ］．中国生化药物杂击，１９９７，１８ （３）：１３２－１３４． ［９］ 谭仕轩 ．比色法测定复方氨基酸液中亚硫酸盐含量［Ｊ］．氨基 酸和生物资源，２００５，２７ （３）：６３－６５． ［１０］ 方海顺，徐志利 ．比色法测定复方氨基酸注射液中亚硫酸氢 钠含量［Ｊ］．中国药品标准，２００７，８ （４）：４０－４２． ［１１］ 梁艳利，张慧丽，吴拥军 ．光度法测定依达拉奉注射液中抗 氧剂焦亚硫酸钠的含量［Ｊ］．河南科学，２０１０，２８ （１１）： １４０３－１４０４． ［１２］ 中国药典２０１０版 ．二部［Ｓ］．２０１０：１１９３，附录６． （收稿日期：２０１２－０２－０８；修回日期：２０１２－０３－０８） 　　基金项目：中国人民解放军南京军区医药卫生科研创新基金资助 （Ｎｏ．１１ＭＡ０２９）。 作者简介：舒薇，女，硕士，副主任药师，主要从事临床药学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｕｗｅｉ＠ｍｅｄｍａｉｌ．ｃｏｍ．ｃｎ　　＊通讯作者：杨积顺，男， 硕士，主要从事临床药学研究，Ｔｅｌ：１３９６２５２７４６７，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊａｓｕｎｙａｎｇ＠ｆｏｘｍａｉｌ．ｃｏｍ 黄芪注射液诱导皮肤真皮成纤维细胞凋亡研究 舒薇１，杨积顺２＊ （１．上海市闸北区中心医院药剂科，上海　２０００７０；２．解放军１００医院药剂科，江苏　苏州　２１５００７） 摘要：目的　研究黄芪注射液诱导真皮成纤维细胞凋亡的作用，探讨其治疗银屑病的作用机制。方法　采用四甲基 偶氮唑盐微量酶反应比色法 （ＭＴＴ法）检测不同浓度黄芪注射液对真皮成纤维细胞增殖的抑制作用，采用Ａｎｎｅｘ－ ｉｎ　Ｖ－ＦＩＴＣ细胞凋亡检测法检测黄芪注射液对真皮成纤维细胞凋亡指数的影响，以免疫组织化学法考察黄芪注射液 对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体ＴＲＡＩＬ表达的影响。结果　不同浓度的黄芪注射液对真皮成纤维细胞的增殖均 有抑制作用 （Ｐ＜０．０１），并呈明显的剂量依赖性。真皮成纤维细胞的凋亡指数随着黄芪注射液浓度的增加而增加。 免疫组织化学结果表明，在黄芪注射液的作用下，ＴＲＡＩＬ在人真皮成纤维细胞的胞膜和胞浆成强阳性表达。结论 　黄芪注射液可抑制真皮成纤维细胞的增殖，诱导其凋亡，该效应可能与黄芪注射液促进ＴＲＡＩＬ的表达有关，从 而可用于银屑病的治疗。 １３３ 中南药学２０１２年５月第１０卷第５期　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｍａｙ　２０１２，Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．５