埃索美拉唑钠分析方法

CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报 57 察指标与初始相比，均没有发现明显的变化趋势，放行与货架期标准一致。 3.2.S.4.2 分析方法 （1）订入质量标准的分析方法 1 性状 目检：本品应为白色或类白色粉末；无臭；遇光易变色；有引湿性。 2 溶解度 2.1. 试药与试剂：甲醇 2.2. 仪器与设备：秒、电子分析天平（万分之一）、容量瓶、量筒、刻度吸管。 2.3. 操作方法： a). 水中溶解度： 精密称取本品 1g，置于 10ml 具塞刻度试管中，加水 1ml，然后于 25℃±2℃ 的水浴条件下每隔 5 分钟强力振摇 30 秒，观察 30 分钟，应完全溶解。 b). 甲醇中的溶解度： 精密称取本品 1g，置于 10ml 具塞刻度试管中，加水 1ml，然后于 25℃±2℃ 的水浴条件下每隔 5 分钟强力振摇 30 秒，观察 30 分钟，应未完全溶解。 精密称取本品 1g，置于 10ml 具塞刻度试管中，加水 9ml，然后于 25℃±2℃ 的条件下每隔 5 分钟强力振摇 30 秒，观察 30 分钟，应完全溶解。 2.4. 结果：本品在水中极易溶，在甲醇中易溶。 3 比旋度 3.1. 仪器与用具：旋光仪、电子分析天平（万分之一）、容量瓶。。 3.2. 操作方法：取供试品约 0.5g，精密称定，置 50ml 量瓶中，加水适量使溶解 并稀释至刻度，摇匀，照《旋光度测定法操作规程》（Q/SOP ZL061）检测，即 得。 3.3. 计算公式： ）乙醇水分（比旋度＝ %%1 100   lC  式中： —测得的旋光度； C—每 100ml 溶液中含有供试品的重量（g）； l—旋光管长度(dm)； 水分%—供试品所含水分的百分数。 乙醇%—供试品所含乙醇的百分数。 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 58 3.4. 限度：按无水、无乙醇物计算，比旋度应为+28°至+32°。 4 鉴别 4.1. 试液与试药：0.1mol/L氢氧化钠溶液、溴化钾 4.2. 仪器与用具：紫外-可见分光光度仪、傅里叶变换红外光谱仪、电子分析天 平（十万分之一）、移液管、刻度吸管、容量瓶、烧杯。 4.3. 操作方法 4.3.1. 取供试品约 15mg，置 100ml 容量瓶中，加 0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶解并 稀释至刻度，摇匀，精密量取 5ml 置 50ml 容量瓶中，加 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 并稀释至刻度，摇匀，照《紫外-可见分光光度法操作规程》（Q/SOP ZL062）测 定，在 276nm 与 305nm 的波长处有最大吸收，在 256nm 与 281nm 的波长处有最 小吸收。 4.3.2. 取供试品 1~1.5mg、溴化钾约 200~300mg（与供试品的比约为 200：1）， 置玛瑙研钵中，研磨均匀，压制成透明的溴化钾片，将溴化钾片放在红外光谱仪 中，照《红外分光光度法操作规程》（Q/SOP ZL065）检测，录制光谱图，即得。 供试品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。 5 碱度 5.1. 仪器与用具：酸度计，电子分析天平、烧杯、量筒。 5.2. 取供试品 0.5g，加水 25ml 溶解后，照《pH 值测定法操作规程》（Q/SOP ZL041） 检测。 5.3. 限度：pH 值应为 10.3～11.3。 6 甲醇溶液的澄清度与颜色 6.1.仪器与设备：电子分析天平、紫外-可见分光光度仪、容量瓶。 6.2. 操作方法：取供试品 0.5g，精密称定，置 25ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释 至刻度，溶液应澄清无色；如显色，立即照《紫外-可见分光光度法操作规程》 （Q/SOP ZL062），在 440nm 和 650nm 的波长处分别测定吸光度，均不得过 0.05。 7 有关物质 7.1. 试药与试剂：乙腈、磷酸氢二钠、磷酸、甲醇、氢氧化钠溶液。 7.2. 仪器与设备：电子分析天平（十万分之一）、十八烷基硅烷键合硅胶柱、高 效液相色谱仪、酸度计、刻度吸管、容量瓶、移液管、烧杯。 7.3. 流动相：以 a 为流动相 A，b 缓冲液（xmol/L B，用 x 调节 pH 至 z）为流动 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 59 相 B。 7.4. 溶剂的配制：xxx。 7.5. 系统适用性溶液：称取杂质 A 对照品、杂质 B 对照品、杂质 C 对照品、杂 质 D 对照品和杂质 E 对照品约 10mg，精密称定，置 100ml 容量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品溶液；称取埃索美拉唑钠对照品约 10mg， 精密称定，置 50ml 容量瓶中，精密吸取杂质对照品溶液 1ml 置同一量瓶，加甲 醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。 7.6. 供试品溶液：取供试品约 10mg，精密称定，置 50ml 量瓶中，加溶剂（0.01mol/l 磷酸氢二钠，用 5mol/L 氢氧化钠调节 pH 至 11.0）溶解并稀释至刻度，摇匀，作 为供试品溶液。 7.7. 对照溶液：精密量取供试品溶液 1ml，置 100ml 量瓶中，用溶剂稀释至刻度， 摇匀，作为对照溶液。 7.8. 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；按下表进 行线性梯度洗脱；检测波长为 280nm。 时间 流动相 A(%) 流动相 B(%) 0 10 90 A 25 75 B 80 20 C 10 90 D 10 90 精密量取系统适用性试验溶液 20µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质 A、 杂质 B、杂质 C、埃索美拉唑钠、杂质 D、杂质 E 依次出峰；埃索美拉唑钠峰的 保留时间应在 15 至 19 分钟之间，埃索美拉唑钠峰与杂质 C 峰的分离度应大于 2.0。 7.9. 测定法：照《高效液相色谱法操作规程》（Q/SOP ZL059）检测。在系统适 用性试验符合上述要求的条件下，取对照溶液 20μl 注入液相色谱仪，调节检测 灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的 10%；再精密量取供试品溶液和对 照溶液各 20μl 分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有 与杂质 A、杂质 B、杂质 D、杂质 E 保留时间一致的色谱峰，其峰面积均不得大 于对照溶液主峰面积的 0.1 倍（a%），如有与杂质 C 保留时间一致的色谱峰，其 峰面积不得大于对照溶液主峰面积的 0.2 倍（b%），其他单个杂质峰面积不得大 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 60 于对照溶液主峰面积的 0.1 倍（0.1%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主 峰面积的 0.5 倍（z%）。 7.10. 计算公式： %0.1%  对照主峰 有关物质有关物质 A A %0.1%  对照主峰 总杂质总杂质 A A 式中：A 有关杂质——供试品溶液中杂质 A、B、C、D、E 或其他单个杂质 峰的峰面积； A 总杂质——供试品溶液中各杂质峰的峰面积的和； A 对照主峰——对照溶液主峰的峰面积 7.11. 限度：杂质 A 应≤a%，杂质 B 应≤b%，杂质 C 应≤c%，杂质 D 应≤d%，杂 质 E 应≤0.1%，其他单个杂质应≤0.1%，总杂质应≤z%。 8 对映异构体 8.1. 试药与试剂：乙醇、正己烷、三乙胺。 8.2. 仪器与设备：电子分析天平（十万分之一）、多糖衍生物共价键合手性柱 （CHIRALPAK ○RIC 适用）、高效液相色谱仪、刻度吸管、容量瓶、移液管。 8.3. 流动相：以 A-B-C（x：y：z）为流动相。 8.4. 供试品溶液：取供试品约 10mg，精密称定，置 10ml 容量瓶中，加乙醇溶解 并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取 1ml，置 100ml 量瓶中，用乙 醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 8.5. 对照溶液：精密量取供试品溶液 1ml，置 100ml 量瓶中，用乙醇稀释至刻度， 摇匀，作为对照溶液。 8.6. 对照品溶液：取奥美拉唑对照品约 10mg，精密称定，置 10ml 容量瓶中，加 乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 8.7. 色谱条件与系统适用性试验：以多糖衍生物共价键合手性柱（CHIRALPAK ○RIC 适用）；A-B-C（x：y：z）为流动相；检测波长为 302 nm；埃索美拉唑与 对映异构体依次出峰；理论板数按埃索美拉唑峰计算不低于 2000，埃索美拉唑 峰与对映异构体峰的分离度应符合要求。 8.8. 测定法：取对照品溶液 10μl 注入液相色谱仪，照《高效液相色谱法操作规 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 61 程》（Q/SOP ZL059）测定，在系统适用性试验符合上述要求的条件下，取对照 溶液 10μl 注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量 程的 15%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各 10μl，分别注入液相色谱仪， 记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有与对映异构体保留时间一致的色谱峰， 其峰面积不得大于对照溶液主峰面积的 0.5 倍（0.5%）。 8.9. 计算公式： %0.1%  对照主峰 对映异构体对映异构体 A A 式中：A 对映异构体——供试品溶液中对映异构体的峰面积； A 对照主峰——对照溶液主峰的峰面积； 8.10. 限度：应≤0.5%。 9 钠离子 9.1. 试药与试剂：甲基磺酸、氯化钠对照品。 9.2. 仪器与设备：电子分析天平（十万分之一）、用阳离子交换色谱柱（色谱柱 为 IonPac CS12A， 250mm×4.0mm 或效能相当）、高效液相色谱仪、容量瓶、称 量瓶、电热鼓风干燥箱。 9.3. 流动相：以 20mM 的甲基磺酸溶液为流动相。 9.4. 供试品溶液：取供试品适量，精密称定，加水制成每 1ml 中约含埃索美拉唑 钠 0.95mg 的溶液作为供试品溶液（配置 2 份）。 9.5. 对照品溶液：取经 105℃干燥至恒重的氯化钠对照品适量，精密称定，加水 溶解并稀制成每 1ml 中约含钠离子 60μg 的溶液（每 1g 氯化钠对照品相当于钠 离子 0.3934g）（配置 2 份）。 9.6. 色谱条件与系统适用性试验：用阳离子交换色谱柱（色谱柱为 IonPac CS12A， 250mm×4.0mm 或效能相当）；以 20mM 的甲基磺酸溶液为流动相，流速为 1.0 ml/min；检测器为电导检测器，检测方式为抑制电导检测；理论塔板数按钠峰计 算不低于 3000。 9.7. 测定法：取对照品溶液 10μl，注入液相色谱仪（一份进 2 针，一份进 3 针）， 调节检测灵敏度，使对照品溶液主峰全量程显示，再取供试品溶液 10μl，注入液 相色谱仪（一份进 2 针，一份进 1 针），记录色谱图，按外标法以峰面积计算即 得。 9.8. 限度：含钠应为 5.90%~6.54%。 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 62 10 甲醇、乙醇、乙酸乙酯、甲苯 10.1. 试药与试剂：甲醇、乙醇、乙酸乙酯、甲苯、二甲亚砜。 10.2. 仪器与设备：电子分析天平、固定相为 6%苯基-94%甲基聚硅氧烷（或极 性相近）的毛细管柱、气相色谱仪、容量瓶、移液管。 10.3. 供试品溶液：取供试品约 250mg，精密称定，置 5ml 容量瓶中，加二甲亚 砜溶解并定量稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 10.4. 对照品溶液：取甲醇约 375mg、乙醇约 1000mg、乙酸乙酯约 625mg、甲苯 约 111mg，精密称定，同置 50ml 量瓶，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀， 精密量取 1ml 置 50ml 量瓶，加二甲亚砜稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液。 10.5. 色谱条件：采用固定相为 6%苯基-94%甲基聚硅氧烷（或极性相近）的毛 细管柱为色谱柱；起始温度为 50℃，维持 4 分钟，以每分钟 20℃的升温速率升 至 200℃，维持 10 分钟；进样口温度 180℃；检测器（FID）温度 250℃。 10.6.测定法：照《气相色谱法操作规程》（Q/SOP ZL060）、《残留溶剂测定法 操作规程》（Q/SOP ZL067）第三法操作。取对照品溶液 1μl，注入气相色谱仪， 各成分之间的分离度均应符合要求。精密量取对照品溶液与供试品溶液各 1μl， 分别注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。 10.7. 计算公式： %100  样品对照 对照样品溶剂残留 CA CA 式中：C 对照——对照品溶液的浓度（mg /ml）； A 对照——对照品溶液中被测残留溶剂峰的峰面积； C 样品——供试品溶液的浓度（mg /ml）； A 样品——供试品溶液中被测残留溶剂峰的峰面积。 10.8. 限度：含甲醇应≤0.3%，乙醇应≤0.8%，乙酸乙酯应≤0.5%，甲苯应≤ 0.089%。 11 枯烯醇 11.1. 试药与试剂：N,N-二甲基甲酰胺、枯烯醇。 11.2. 仪器与设备：电子分析天平、固定相为 5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷共 聚物（或极性相近）的毛细管柱、气相色谱仪、容量瓶、移液管。 11.3. 供试品溶液：取供试品约 250mg，精密称定，置 5ml 量瓶中，加 N,N-二甲 基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 63 11.4. 对照品溶液：取枯烯醇约 100mg，置 100ml 量瓶，加 N,N-二甲基甲酰胺溶 解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1ml 置 200ml 量瓶，加 N,N-二甲基甲酰胺稀 释至刻度，摇匀作为对照品溶液。 11.5. 色谱条件：采用固定相为 5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷共聚物（或极性 相近）的毛细管柱为色谱柱；起始温度为 80℃，以每分钟 20℃的升温速率升至 200℃，维持 10 分钟；进样口温度 180℃；检测器（FID）温度 250℃。 11.6. 测定法：照《气相色谱法操作规程》（Q/SOP ZL060）、《残留溶剂测定 法操作规程》（Q/SOP ZL067）第三法操作。取对照品溶液和供试品溶液各 1μl， 分别注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。 11.7. 计算公式： %100  样品对照 对照样品溶剂残留 CA CA 式中：C 对照——对照品溶液的浓度（mg /ml）； A 对照——对照品溶液中被测残留溶剂峰的峰面积； C 样品——供试品溶液的浓度（mg /ml）； A 样品——供试品溶液中被测残留溶剂峰的峰面积。 11.8. 限度：含枯烯醇应≤0.01%。 12 水分 12.1. 仪器与用具：电子分析天平、卡氏水分测定仪。 12.2. 试剂与试液：卡尔费休试液、无水甲醇。 12.3. 操作方法：取供试品适量，照《水分测定法操作规程》（Q/SOP ZL073） 第一法 A 测定，平行测定 2 份，计算其平均值。 15.4. 限度：应≤1.0%。 13 重金属 13.1. 仪器与设备：电炉、水浴锅、纳氏比色管、刻度吸管。 13.2. 试剂与试液：氢氧化钠试液、硫化钠。 13.3. 操作方法：取供试品 1g，加水 20ml 溶解后，加氢氧化钠试液 5ml，照《重 金属检查法操作规程》（Q/SOP ZL056）第三法操作。 13.4. 限度：含重金属不得过百万分之二十。 14 含量测定 14.1. 仪器与用具：电子分析天平（万分之一）、电位滴定仪。 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 64 14.2. 试剂与试药：盐酸滴定液（0.1mol/L）。 14.3. 操作方法：取供试品约 0.3g，精密称定，加新沸冷水 50ml 使溶解（配制 2 份），照《电位滴定法与永停滴定操作规程》（Q/SOP ZL043）操作，用盐酸滴定 液（0.1mol/L）滴定。每 1ml 盐酸滴定液相当于 36.74mg 的 C17H18N3O3SNa。 14.4. 计算公式： %100 1000)%-%1(W 74.361.0/   乙醇水分含量 样品 CV 式中：V——供试品溶液消耗盐酸滴定液（0.1mol/L）的体积，ml； C——盐酸滴定液（0.1mol/L）的浓度，mol/L； W 样品——供试品的取样量，g； 水分%—供试品所含水分的百分数。 乙醇%—供试品所含乙醇的百分数。 36.74——每 1ml 盐酸滴定液（0.1mol/L）相当于 36.74mg 的 C17H18N3O3SNa。 14.5. 限度：按无水、无乙醇物计算，含 C17H18N3O3SNa 不得少于 98.0%。 15 微生物限度 15.1. 仪器与用具：培养箱、刻度吸管、电子天平、三角烧瓶、水浴锅、平皿 15.2. 稀释液与培养基：pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液、营养琼脂培养基、玫瑰红 钠琼脂培养基。 15.3. 供试品溶液制备 15.3.1. 取埃索美拉唑钠供试品 10g，，加 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml， 45℃水浴加热 5min，振摇使溶解，作为 1：10 供试品溶液。 15.3.2. 吸取 1：10 供试品溶液 1ml，注入到含 9 ml pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液 中，混匀做成 1：100 供试品溶液。 15.3.3. 吸取 1：100 供试品溶液 1ml，注入到含 9 ml pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液 中，混匀，做成 1：1000 供试品溶液。 15.4.细菌总数测定 15.4.1. 取 1：10 的供试液 1ml 平均注入 5 个无菌平皿（0.2ml/皿），平行制备 10 个平皿。 15.4.2. 取 1：100 的供试品溶液各 1ml，分别注入无菌平皿，平行制备 2 个平皿。 15.4.3. 取 1：1000 的供试品溶液各 1ml，分别注入无菌平皿，平行制备 2 个平皿。 15.4.4.上述平皿分别迅速注入 15~20ml 温度在 45℃左右的溶化的营养琼脂培养 基，盖上皿盖，混匀，室温冷却凝固，倒置培养。培养温度 30~35℃，培养时间： CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 65 3~5 天。 15.5. 霉菌和酵母菌总数测定： 15.5.1. 取 1：10 的供试液 1ml 平均注入 5 个平皿（0.2ml/皿），平行制备 10 个 平皿。 15.5.2. 取 1：100 的供试品溶液各 1ml，分别注入无菌平皿，平行制备 2 个平皿。 15.5.3. 取 1：1000 的供试品溶液各 1ml，分别注入无菌平皿，平行制备 2 个平皿。 15.5.4. 上述平皿分别迅速注入 15~20ml 温度在 45℃左右的溶化的玫瑰红钠琼脂 培养基，盖上皿盖，混匀，室温冷却凝固，倒置培养。培养温度 23~28℃，培养 时间：5~7 天。 15.6. 稀释液（阴性）对照试验：取试验用的稀释液 1ml，置无菌平皿中，注入 相对应培养基室温冷却凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备 2 个平板， 培养温度，时间同相应的培养基，阴性对照不得有菌生长。 15.7. 培养与计数：将上述平板倒置于相应培养箱中培养。细菌培养温度为 30~35℃，培养时间为 3 天,逐日点计菌落数一般以 3 天的菌数报告。霉菌、酵母 菌培养温度为 23~28℃，培养时间为 5天,逐日点计菌落数一般以 5天的菌数报告。 必要时可适当延长培养时间 7 天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板 不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则 报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于 15，则两个平板的菌落数 不能相差 1 倍或以上。 一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌 计数。在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培 养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培 养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培 养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数高的 培养基中的菌数为计数结果。 15.8.菌数报告规则：宜选取细菌、酵母菌平均菌落数小于 300cfu、霉菌平均菌落 数小于 100 的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。以最高的平均 菌落数乘以稀释倍数的值报告 1g 供试品中所含的菌数。如各稀释级的平板均无 菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于 1 时，以＜1 乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 66 15.9. 控制菌大肠埃希菌检查方法： 15.9.1. 取胆盐乳糖培养基 3 份，每份 500ml，2 份分别加入供试液 10ml（相当于 供试品 1g），其中有 1 份加入对照菌 10~100cfu 作阳性对照；第 3 份加入与供试 液等量的稀释液作阴性对照，于 30~35℃培养 18~24 小时（必要可延至 48 小时）。 阴性对照应无菌生长。 15.9.2. 取上述仅加供试液的培养物 0.2ml，接种至 5mlMUG 培养基的试管内培 养，分别于 5 小时、24 小时时在 366nm 紫外光下观察，同时用未接种的 MUG 培养基作本底对照。若管内培养物呈现荧光，为 MUG 阳性；不呈现荧光，为 MUG 阴性。观察后，沿培养基的管壁加入数滴靛基质试液试液，液面呈玫瑰红 色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照因为 MUG 阴性和靛 基质阴性。 15.9.3. 如 MUG 阳性、靛基质阴性，或 MUG 阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳 糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基平板上，培养 18~24 小时。 15.9.4.结果判断 a. 当阴性对照呈阴性，阳性对照正常生长，如供试液 MUG 阳性，靛基质 阳性，判供试品检出大肠埃希菌；MUG 阴性，靛基质阴性，判供试品未检出大 肠埃希菌。 b. 如 MUG 阳性、靛基质阴性，或 MUG 阴性、靛基质阳性，则应取胆盐 乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基平板上，培养 18~24 小 时。若曙红亚甲蓝琼脂培养基平板上生长的菌落呈紫黑色、浅紫色、篮紫色或粉 红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光 滑，湿润，常有金属光泽。或与其形态特征疑似，应进行分离、纯化、染色镜检 和适宜的生化试验，确认是否为大肠埃希菌。若平板上无菌落生长，或生长的菌 落与上述典型菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。 15.9.5.限度：细菌总数：每 1g 埃索美拉唑钠供试品不得过 1000cfu；霉菌和酵母 菌总数：每 1g 埃索美拉唑钠供试品不得过 100cfu；控制菌大肠埃希菌：每 1g 埃索美拉唑钠不得检出控制菌大肠埃希菌。 16 细菌内毒素 16.1. 试剂与溶液：细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检验用水(BET 水)、鲎 试剂、75%乙醇、铬酸洗液。 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 67 16.2. 仪器与用具：烘箱、冰箱、可调式移液器、无热原枪头、混旋器、恒温仪、 试管架、脱脂棉、封口膜、剪刀、试管、砂轮。 16.3.操作方法 16.3.1. 凝胶限量试验：按下列制备溶液 A、B、C 和 D，使用稀释倍数为 MVD 并已排除干扰的供试品溶液来制备溶液 A 和 B。 供试品的稀释倍数 MVD=   V lm 式中：m 为供试品取样量，mg； V 为稀释体积数，ml； λ为鲎试剂灵敏度，EU/ml； l为埃索美拉唑钠细菌内毒素的限值，2.0 EU/mg。 供试品溶液 A 的制备：取供试品 0.1g 加 BET 水溶解到 10ml，再按 MVD 的 稀释倍数稀释得供试品溶液 A。 取内毒素标准品 1 支，与 1.0ml BET 水用旋涡混合器混合 15min。并用此浓 缩物制备适当系列浓度的稀释液。浓缩物用以配制稀释溶液，平时保存在冰箱里， 保存期限不超过 14 天。配制溶液在使用前，用旋涡混合器混合不少于三分钟。 每稀释一个步骤，均应在旋涡混合器上混匀 30 秒以上。按下列分两步进行稀释： 阳性对照液 C：取上述内毒素溶液适量加 BET 水分步稀释至 2λEU/ml。 供试品阳性对照液 B：取上述内毒素溶液适量加供试品溶液 A 分步稀释至 2λEU/ml。 阴性对照液 D：BET 水。 放置温度：37℃，反应时间：60 分钟。 所加试剂 A 管 A 管 B 管 B 管 C 管 C 管 D 管 D 管 鲎试剂（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 供试品溶液 A（ml） 0.1 0.1 供试品阳性对照液 B(ml) 0.1 0.1 阳性对照液 C(ml) 0.1 0.1 阴性对照液 D（ml） 0.1 0.1 结果 16.3.2. 结果判断 CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 68 37℃保温 60 分钟观察，将试管从恒温加热仪中轻轻取出，缓缓倒转 180°， 若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管璧滑脱者为阳性;记为“+”、未形成凝 胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性，记为“－”。保温和拿取试 管过程应避免受到振动造成假阴性结果。 若阴性对照液 D 的平行管均为阴性(－)，供试品阳性对照液 B 的平行管均为 阳性(+)，阳性对照液 C 的平行管均为阳性(+)，试验有效。若供试品溶液 A 的两 个平行管均为阴性(－)，判供试品符合规定；若供试品溶液 A 的两个平行管均为 阳性(+)，判断供试品不符合规定；若供试品溶液 A 的两个平行管中的一管为阳 性(+)，另一管为阴性(－)，需要复试。复试时，供试品溶液 A 需做 4 支平行管， 若所有平行管均为阴性(－)，判供试品符合规定，否则判不符合规定。 16.4. 限度：每 1mg 埃索美拉唑钠供试品中检出内毒素的量﹤2.0EU。 （2）未订入质量标准的分析方法 1 熔点 1.1. 仪器与用具：熔点仪、毛细玻璃管。 1.2. 操作方法：取本品适量，照Q/SOP ZL050《熔点测定法操作规程》测定，升 温速率为每分钟1℃，记录初熔时与全熔时的温度，重复测定三次，取其平均值， 即得。 1.3．中试三批样品熔点为 ：246.5～247.5℃、247.0～248.0℃和246.5～247.5℃。 2 鉴别 2.1. 试药与试剂：硅钨酸、稀盐酸。 2.2. 仪器与用具：电子分析天平、容量瓶、刻度吸管。 2.3. 操作方法：取本品约30mg，加水3ml溶解后，加硅钨酸1ml，摇匀，滴加稀 盐酸数滴，即产生白色絮状沉淀。 2.4．中试三批样品均呈正反应。 3 炽灼残渣 3.1. 试药与试剂：硫酸。 3.2. 仪器与用具：高温马弗炉、电炉、电子分析天平、坩埚。 3.3. 操作方法：精密称取本品1.0g，置已于800℃炽灼至恒重的坩埚中，照Q/SOP ZL040《炽灼残渣检查法操作规程》检测。 3.4. 计算公式： CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 69 %100 m-m m-m % 12 13 残渣 式中：m1—恒重后空坩埚重，g； m2—空坩埚+供试品重，g； m3—炽灼达恒重后空坩埚+残渣重，g 3.5. 中试三批样品残渣为 ：15.9%、15.8%、15.9%。 4 含量 4.1. 乙腈、埃索美拉唑钠对照品、杂质 C、磷酸、磷酸氢二钠、氢氧化钠。 4.2. 仪器与用具：电子分析天平、量筒、高效液相色谱仪、色谱柱：Waters XBridge-C18（4.6×150mm，5μm）；保护柱：Waters XBridge-C18（4.6×20mm，5μm）、 酸度计、烧杯、容量瓶、移液管、水份测定仪。 4.3. 流动相：以 0.01mol/L 磷酸氢二钠（用磷酸调节 pH 值至 7.6）-乙腈（75:25） 为流动相。 4.4. 溶剂的配制：0.01mol/L 磷酸氢二钠溶液用 5mol/L 氢氧化钠调节 pH 至 11.0。 4.5. 系统适用性试验溶液：取杂质 C2mg，埃索美拉唑钠对照品 20mg，精密称 定，同置 100ml 量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液 （1）；精密量取系统适用性溶液（1）10ml，置 100ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻 度，摇匀，作为系统适用性试验溶液（配制 1 份）。 4.6. 供试品溶液：取供试品约 10mg，置 50ml 量瓶中加溶剂溶解，再加溶剂稀释 至刻度，摇匀，精密量取 1ml，置 10ml 量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作 为供试品溶液（配制 2 份）。 4.7. 对照品溶液：取经水分测定的埃索美拉唑钠对照品约 10mg，精密称定，置 50ml 量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1ml，置 10ml 量瓶中， 用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（配制 2 份）。 4.8. 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长 为 302nm。杂质 C 与埃索美拉唑钠峰的分离度应符合规定，理论板数按埃索美 拉唑峰计算不低于 2000。以对照品溶液校正因子计算的 RSD 应不得过 2.0%。 4.9. 操作方法：照 Q/SOP 08000063《液相色谱法操作规程》检测，取系统适用 性溶液 20μl，注入液相色谱仪（进样 1 针），再取对照品溶液 20μl，注入液相色 谱仪（一份进 2 针，一份进 3 针），在系统适用性试验符合上述要求的条件下， CD E 埃索美拉唑钠 CTD 申报资料 70 调节检测灵敏度，使对照品溶液主峰全量程显示，再取供试品溶液 20μl，注入液 相色谱仪（一份进 2 针，一份进 1 针），记录色谱图，按外标法以峰面积计算（埃 索美拉唑钠折算成埃索美拉唑的系数为 0.9401），即得。 4.10. 计算公式：（1） 对照 对照 对照品含量 A %C f  式中： f —校正因子； C 对照—对照品溶液的浓度（mg/ml）； A 对照—对照品溶液主峰的峰面积； 对照品含量%—对照品含量的百分数。 （2）含量%= %100 %-%-11/101/50W Af   ）乙醇水分（称样量 供试品平均 式中： f 平均—校正因子的平均； A 供试品—供试品溶液主峰的峰面积。 水分%—供试品所含水分的百分数。 乙醇%—供试品所含乙醇的百分数。 4.11. 限度：按无水、无乙醇计算含埃索美拉唑钠（C17H19N2O3SNa）应不小于 98.0%。 5 (2R,3R)-1,1,4,4-四苯基丁四醇 5.1. 试药与试剂：乙腈、水。 5.2. 仪器与设备：电子分析天平（十万分之一）、十八烷基硅烷键合硅胶柱、高 效液相色谱仪、刻度吸管、容量瓶、移液管、烧杯。 5.3. 流动相：以乙腈：水（70：30）为流动相。 5.4. 供试品溶液：取供试品约 20mg，精密称定，置 10ml 容量瓶中，加水溶解并 稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。（配制 2 份） 5.5. 对照品溶液：取(2R,3R)-1,1,4,4-四苯基丁四醇对照品 10mg，精密称定，置 50ml 容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（配制 2 份）。 5.6. 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长 为 205nm。理论板数按(2R,3R)-1,1,4,4-四苯基丁四醇峰计算不低于 2000。以对照 品溶液校正因子计算的 RSD 应不得过 2.0%。