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中药粉末显微鉴别技术

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中药粉末显微鉴别技术中药粉末显微鉴别技术 中药粉末显微鉴别技术 第1节​  取样、制片、染色 一、取样 取样的代表性直接影响到结果的判断准确,因此必须重视取样的各个环节。 (1)​ 对照品 对照品粉末是检定供试品的参照物,其制备是显微鉴别的先决条件。有经验者,可自取标本,鉴定后制作,或购买药材经品种基原鉴定。还应注意有些药材的显微特征受生长年限及环境的影响,会产生一定的波动,所以对于供试品的产地、采收期、加工方法等也应当认真记录。 (2)​ 供试品 中药材 原药材应注意基原、产地、规格的完整性、清洁程度以及有无水迹、霉变或其他物质污染等情况,并详...
中药粉末显微鉴别技术
中药粉末显微鉴别技术 中药粉末显微鉴别技术 第1节​  取样、制片、染色 一、取样 取样的代表性直接影响到结果的判断准确,因此必须重视取样的各个环节。 (1)​ 对照品 对照品粉末是检定供试品的参照物,其制备是显微鉴别的先决条件。有经验者,可自取标本,鉴定后制作,或购买药材经品种基原鉴定。还应注意有些药材的显微特征受生长年限及环境的影响,会产生一定的波动,所以对于供试品的产地、采收期、加工方法等也应当认真。 (2)​ 供试品 中药材 原药材应注意基原、产地、规格的完整性、清洁程度以及有无水迹、霉变或其他物质污染等情况,并详细记录。 (1)从同批药材包件中抽取有代表性的检定用样品。 (2)对破碎的、粉末状的或大小在1cm以下的药材,一般药材100g-500g;粉末状药材25g;贵重药材5g-10g;个体大的药材,根据实际情况抽取代表性的样品。 (3)将所取有代表性样品混合均匀,即为总样品量。 (4)前处理:将供试品捡净后,用量较小时,可以用乳体或小型电磨粉碎过《中国药典》6号筛(1.0μm-250μm)备用。 1、​ 中成药 (1)取样:从各批号的箱、包、瓶中随机取样,记录好厂家、批号,从各包装盒中任意取1丸,每批号不得少于3次。各供试品留样保存,保存期限至少1年。 水丸无包衣时,可直接取2丸-3丸,乳钵中研成细粉后,取少量置裁玻片上,滴加规定的试液,搅拌均匀,使粘结的细胞、组织分离,再按粉末特征加水合氯醛试液或其他适当试液处理后观察。 水蜜丸或大蜜丸;可直接用刀片横向切开取一薄片,或用小钢铲取一小块(约15mg)放置在载玻片上制片观察。 (1)​ 去包衣:中药片剂常见包衣为糖衣,隔离层常使用胶浆、糖浆和滑石 粉。水丸和糊丸等(挂)衣的有滑石、蔗糖、朱砂、雄黄、青黛、百草霜、礞石、赫石等。可用刀片将包衣剥去,简单的办法也可将片剂或丸剂断为两半,直接取内心,粉碎进行观察。 (2)​ 添加剂:为便于观察,可对中成药的制造过程中使用的添加剂做适当 的前处理。 除去水溶性干扰物:将检品置于蒸馏水中研匀,离心处理,取沉淀物检查。 除去脂溶性干扰物:将检品滴加适量氯仿,离心处理,取沉淀挥干氯仿后检查。 除去淀粉,糊化淀粉的干扰:将检品滴加蒸馏水研匀,置烧杯中煮沸、冷却,离心处理,取沉淀检查。 以上操作中,为防止某些显微特征的流失,应进行留样观察。 二、制片 (一)制片 1、载玻片与盖玻片 载玻片与盖玻片是影响图像质量的因素之一。因载物台下的聚光器是按使用一定厚度的载玻片的。首先应选择规格统一的载玻片(厚0.9mm-1.2mm)与盖玻片(厚0.12mm-0.17mm)。使用前,将载玻片与盖玻片用无水乙醇浸泡后,用柔软的绸布或无纤维人造纸揩擦,至表面洁净无暇。 2、制片 将供显微观察的粉末药材或样品置于载玻片上,然后加入适宜的试液1滴,用玻璃棒搅匀,用镊子将盖玻片沿一侧轻轻放下,使液体自然展匀即可。可用滤纸吸拭溢出的液体或从盖玻片边缘补充液体不足的空隙。 (二)制片按使用试剂分类 1、​ 稀碘液制片 主要用于观察含淀粉粒。 2、​ 斯氏试液制片 试液由醋酸:甘油:水(1:1:1)组成。用于观察 包括淀粉粒在内的所有显微鉴别特征。 3、​ 水合氯醛制片 水合氯醛试液能渗透组织,使皱缩的细胞膨胀并能溶 解淀粉粒、蛋白质、树脂、挥发油和叶绿素等,使细胞组织变得透明而清晰。 4、​ 乙醇装片 在观察的切片中有菊糖、粘液、树胶等时,使用95%以上 的乙醇。 (3)​ 制片按保存时间分类 1、​ 临时制片 封藏介质一般为流动性液体,不耐久藏。但制作简易、适 用于一般的显微观察及显微化学反应。 2、​ 半永久性制片 在上述临时制片周围,直接使用加拿大树胶,将盖玻 片周围封严,室温放置1天干燥后,置冰箱内,一般可供10年以上观察使用。封藏介质还可以选用半固体的甘油明胶。 3、​ 永久性制片 封藏介质一般呈固态,可长期保存,但制作费时,多用 于教学标本。制作方法一般是先将粉末用无水乙醇浸润,随后沥去乙醇,用二甲苯浸润,再沥去二甲苯,滴加加拿大树胶的二甲苯溶液后,自然挥发干燥固定后即可。 三、染色 为使标本片特征显著,可根据细胞壁及细胞内含物的性质,加入不同染色剂染色。常见的显微化学反应如下(所有试液的配制方法参见《中国药典》)。 (一)细胞壁性质的检定 1、木化细胞壁,加间苯三酚试液1滴-2滴,稍放置,加盐酸1滴,因木化程序不同,显粉色、红色或紫红色。此操作最好在水合氯醛透化后再进行,其效果较好。 2、木栓化或角质化细胞壁,加苏丹III试液,稍放置或微热,呈橘红色至红色。 3、纤维素细胞壁 加氯化锌碘试液,或先加碘试液湿润后,稍放置,再加硫酸溶液(33-50)显蓝色或紫色。 (二)细胞内含物性质的检定 1、​ 淀粉粒 加稀碘试液,呈蓝色或紫色。 2、​ 糊粉粒 (1)加碘试液,呈黄棕色。(2)加硝酸汞试液,呈砖红色(材 料中如含有多量脂肪油,宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行)。 3、​ 脂肪油、挥发油和树脂(1)加苏丹III试液,呈橘红色,红色或紫红色。 (2)加90%乙醇、脂肪油和树脂不溶解(蓖麻油及巴豆油例外),挥发油则溶解。 4、​ 菊糖 加10%α-萘酚乙醇溶液,再加80%硫酸1滴-2滴,显紫红色并很 快溶解。 5、​ 粘液 加钌红试液,呈红色。 6、​ 草酸钙结晶 (1)加稀醋酸不溶解,加稀盐酸即溶解但无气泡发生。(2)加硫酸(1-2)逐渐溶解。片刻后析出针状硫酸钙结晶。 7、​ 碳酸钙(钟乳体),加稀盐酸溶解,同时有气泡发生。 8、​ 硅质 加硫酸不溶解。 第2节​  显微镜及显微摄影 为能如实地记录,客观地反映中药材粉末的显微鉴别特征,掌握显微镜摄 影技术是十分重要的。 一、显微镜 显微镜主要是由机械部分与光学部分组成,虽然新型显微镜不断面市,但 其原理及各部分的构造均大同小异。 (一)机械部分 主要包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换盘、焦距调节装置等。 1、​ 镜座 用于保持显微镜的稳定与平衡。 2、​ 镜臂 用于支持镜筒及取放显微镜时便于握持之用。 3、​ 镜筒 为一中空的金属圆筒,用以固定物镜与目镜用的距离。现以双筒 倾斜式为常见。 4、载物台 用于放置载玻片之用,并有夹压片固定。装置较完善的显微镜,载物台一侧附有旋钮,可控制载玻片前后左右的移动。 4、​ 物镜转换盘 具有3个-6个螺旋品,每个螺旋品配置有不同放大倍率的 物镜。 5、​ 焦距调节装置 通过镜筒与载物台的升降,调节物镜与标本间的距离。 主要包括粗调节器和细调节器2个部分。 (2)​ 光学部分 主要由一系列的放大透镜组合而成。除了主要用于放大的透镜组外,尚有光密度调节装置、滤光片、光源装置等。 1、​ 物镜 物镜是决定显微镜性能的最重要部分,内装有多组复式透镜。 2、目镜 内装有一组放大率较小的透镜组。其作用在于将物镜所成图像作进一步的放大。 3、光密度调节装置 (1)聚光器:由数片透镜组成,位于载物台下方,用于将光线集中到所要观察的标本上。聚光器的一侧,尚装有升降调节轮,供会聚光线密度所用。聚光器的光阑开孔最好为物镜数值孔镜的60%-70%。 (2)场光阑:位于光源的上方,主要功能是靠减少物镜反射光斑来控制图像的光。 二、显微摄影 1、镜头的选择 (1)物镜:显微照像时,必须选用平场消色差镜或平场复消色差物镜,如带有广视野的物镜则更优。 (2)目镜:应选择生产厂家原配置的照像专用目镜。 2、取景与对焦 现常用者多为专用的显微摄影装置。这类装置主要由一 个取景目镜和一个目镜照像机组成。 3、显微照明 现一般的显微镜均附有透射式中心照明光源,即采用了柯勒照明法,以获得强而均匀的照明。 4、滤光片 为减少显微镜观察所造成的疲劳,一般装在光圈上端的滤光片架内,放置一个中等密度的滤光片可以减弱图像的亮度,达到令人舒适的光亮程度。 5、曝光控制 显微摄影的装置中,多具有自动曝光控制功能,以PM-10AD10全自动显微照像装置为例。在曝光操作盘上,装有下列操作钮。 胶片尺寸与选择钮:可选择35mm胶片到大尺寸照片。 胶片感光度设定:ISO设定钮。 胶片倒易失效校正钮:参考微机处理机上所附有的常用牌号胶片倒易率失效特性数据,将旋钮拧到所用胶片的位置,即可自动地调节曝光时间。 标本暗视野补偿钮:根据视场内的标本分布的明暗反差状态,把胶片的有效感光速度在额度值的0.25-4之间转换。 摄影方式选择钮:选择自动或手动方式。 三、其他注意事项 1、显微镜的使用 使用显微镜观察时,应当注意两先两后,即先低倍、后高倍、先粗调、后微调。 2、显微镜的维护 应特别注意防尘、防潮与防腐。避免载玻片上滴加过多的液体试剂,避免试剂流出引起腐蚀。 3、显微测量法 鉴定药材粉末时,一般需要采用显微长度测量的方法。长度的测量时,需要用2种标尺,即台测微尺与目测微尺。 台测微尺为显微长度测量的,用于校正目测微尺的长度。全长1mm,分 10个大格,每个大格再分为10个小格,故每个小格相当于10μm。 目测微尺为一圆形的小玻片,一面印有标尺,长度通常为1cm,分为100个小格,使用时注意将有刻度的一面朝下。 4.胶片的选择 显微标本一般都是静态的,所以胶片的感光度并不重要。彩色胶片分日光型和灯光型,只要在光路中置一正确的滤光片使照明调节到日光光质,不论哪一类都能在显微摄影中成功地使用。 胶片的有效期限,在包装盒上印的有效期限之前使用,过期胶片易发生色平衡的变化。 5.冲扩 冲扩为最后一步,把握不好,将功亏一篑。自己冲洗时,应认真做好观察记录。送到照像馆扩印时,应同时附上样片,照片后一般自动记录有显影条件,可供调试冲扩条件时参考。 6.图像欠佳的原因 图像不清晰时,应检查一下显微镜的微调焦方面是否有“滑轮”现象。是否因按快门时过重或太快造成震动。取景目镜中的双十宇线是否看清。如有油迹出现在物镜前透镜上,或标本的载玻片上,则图像是模糊的。 照片亮度不匀时,应检查一下照明器及其里面的光源与显微镜是否成一直线,如照明不均匀,将对所拍摄照片有明显影响,其背景或检体的图像常一边偏暗。 中药材粉末及中成药的显微鉴别 第1节​  中药材粉末显微鉴别要点 生物的各种组织形态均具有较为稳定的显微特征,中药材被粉碎时,其组织、细胞、内含物等依然可见。了解并掌握这些基本特征,是开展中药粉末鉴别的基础。 一、根及根茎类药材 根及根茎类药材的粉末显微鉴别,以具有特征性的后含物、厚壁组织、分泌组织为观察重点,其次是导管、木栓细胞等。 1.细胞后含物 (1)​ 淀粉粒:其形态随植物种类而异。观察时,应注意淀粉粒的多少,形状、 类型、大小、脐点形状及位置,层纹等特征。 (2)菊糖:为菊科、桔梗科植物药所特有。 (3)结晶:大多为草酸钙结晶,偶有含硅质块的。 2.分泌组织 如有分泌细胞、分泌腔(室)、分泌管(道)及乳汁管等类型。 3、厚壁组织 (])纤维:常分为韧皮纤维和木纤维两大类。其中木纤维又分为韧型纤维和纤维管胞。 (2)石细胞:多成群或单个散在,有的与木栓细胞或薄壁细胞相连接,如苍术等。观察时,应注意石细胞的形状,大小、细胞壁增厚形态和程度,纹孔形状及大小、孔沟密度等特征。 4.导管 导管多为梯纹、网纹或具缘纹孔,少为螺纹和环纹。 5.木栓组织 双子叶植物根和根茎中常见,单子叶植物根茎中少有存在。 6.后生皮层 仅见于为数不多的双子叶植物根和单子叶植物根茎。 7.表皮及下皮 表皮一般在单子叶植物药材中较普遍,双子叶植物药材仅见于较细长的须状根。 8、内皮层细胞 多见于单子叶植物根、根茎类粉末中,如泽泻等。少数双子叶植物的根具有分隔的内皮层细胞,如龙胆等。 9.薄壁细胞 包括皮层、韧皮部、木质部、射线及髓部的薄壁细胞。薄壁细胞中的后含物或特殊物质是重要的鉴别特征,如熟地黄具黑棕色核状物的薄壁组织等。 二,皮类药材 主要指木本植物形成层以外的部分,显微鉴别时,以观察厚壁细胞、木栓组织等为重点。 1.木栓细胞 大多为棕色,极少数浅红色或紫红色,少数无色,常有不同颜色的后含物。木栓细胞表面观大多为多角形,细胞壁栓质化;也有的细胞壁呈不均匀木化增厚,并具纹孔,形似石细胞.如肉桂等。 2.纤维 普遍存在。应注意是单个散在或成束,颜色、形状、直径、长短、壁增厚的程度,纹孔及孔沟形状等特征。同时注意有无晶纤维,如黄柏等。 3.石细胞 较普遍存在。应注意形状、大小、颜色,细胞壁形态、有无分枝、有无内含物等特征。 4.射线细胞 多碎断。应注意观察射线细胞的宽度和高度(有时破碎不易看清)、细胞内含物等特征。 5.筛管 为皮类药材的标志,观察其分子端壁的筛板及筛域的分布状态,如厚朴等。裸子植物皮类药材无筛管,而有筛胞,如土荆皮等。 此外,还应注意分泌组织的有无、类型、形状、大小及分泌物的颜色,细胞后含物(晶体、淀粉粒等)的有无、形态,大小等特征。 三、木类药材 主要指双子叶植物茎的心材,显微鉴别时,导管,纤维、木薄壁细胞等为观察重点。 1、导管 一般较发达,多为具缘纹孔和网纹导管,其分子的宽度、长度、纹孔的排列方式是重要的鉴别特征,如降香的具缘纹孔导管。 2.木纤维 分为韧型纤维及纤维管胞,前者细胞壁无纹孔或单斜纹孔,后者有具缘纹孔,注意纹孔口的状况、有否形成晶纤维,含晶细胞壁的厚度及是否木化等。 3.木薄壁细胞 木薄壁细胞的胞壁大都木化、具纹孔,如苏木的木薄壁细胞。 4.木射线细胞 应注意木射线细胞的形状、宽度和高度、细胞壁的增厚程度等,如降香的木射线细胞。 四、藤茎类药材 药用者多为木质藤茎,皮类和木类药材的组织特点均可察见,少数带有叶的茎类药材可见到叶肉组织、气孔或毛茸,机械组织较发达,草酸钙结晶常见,淀粉粒常较小等。其他鉴别要点参见皮类和木类药材鉴别要点。 五、叶类药材 叶肉组织和气孔是叶类药材的主要标志。观察时应注意以下特征。 1.表皮细胞 表面观。断面观的形状,颜色、垂周壁的弯曲程度、胞壁增厚状况、角质层的形态以及有无纹孔等。 2.气孔 轴式及副卫细胞数目。 3.毛茸 (1)腺毛:重点观察腺头的形状、细胞数目、大小、分泌物的颜色及腺柄的细胞数目、大小等特征,如桑叶;唇形科植物叶的腺毛形成腺鳞,头部由8个 细胞组成,如薄荷叶。 (2)非腺毛:重点观察形状、大小、细胞数目、表面有无纹理、疣点等特征。如艾叶等菊科植物叶的非腺毛T字形,多细胞;石韦非腺毛为星状,多细胞,番泻叶非腺毛为单细胞,壁厚,具疣状突起;荷叶非腺毛则为非腺毛聚合体等。 4.晶体 注意观察其类型、大小及存在方式。有的叶类药材有2种以上晶体形态,如番泻叶兼有草酸钙簇晶和柱晶;桑叶既有钟乳体结晶又有草酸钙簇晶和方晶;穿心莲叶含大形螺状钟乳体。 此外,还要注意栅栏细胞的列数,长度和直径,导管的类型和直径、厚壁组织的有无,如茶叶含有石细胞等特征。 六、花类药材 以花粉粒、花粉囊内壁细胞、毛茸、柱头表皮细胞为主要鉴别点。此外,观察时还应注意草酸钙结晶如丁香,分泌组织如红花、纤维如菊花等特征的存在。 1.花粉粒 是鉴别花类药材的主要特征。主要注意花粉粒的形状、大小、萌发孔形态、外壁构造及纹饰(理)等特征。 (1)形状:指立体状态或极面观、赤道面观的轮廓。 (2)大小:除圆球形只测其直径外,一般需分别测量极轴或赤道轴的长度。 (3)花粉壁:花粉一般具有较厚的外壁和较薄的内壁。 (4)萌发孔:为花粉外壁较薄的区域,当花粉有萌发时,花粉内壁由萌发孔向外伸出形成花粉管。花粉粒的形状、数目及大小,因种而异。 2.花粉囊内壁 注意其纹饰类型。 3.毛茸 注意其类型、形状、大小、细胞数目、排列及表面特征等。 七、果实类药材 果实类药材一般为完整果实或果实的某一部分。显微鉴别时, 以外果皮、中果皮、内果皮为观察重点。 1.外果皮 注意观察细胞形状,垂周壁增厚状况。 2、中果皮 注意观察分泌组织。 3.内果皮 注意观察石细胞。 对含有种子的果实类药材,还应注意种皮、肝乳组织等特征。 八、种子类药材 种子类药材一般为干燥成熟的种子,有的只用种子的某一部分。显微鉴别时,多以观察特化为厚壁细胞的种皮细胞为重点。 1.厚壁细胞 豆科及旋花科植物等大都有种皮栅状细胞,要注意种皮栅状细胞的列数、形状、有无光辉带及所处位置等。 2.种皮细胞 常由石细胞构成,是重要的鉴别依据。 其次应注意种皮支持细胞、油细胞、色素细胞的有无和形态;有无毛茸、草酸钙结晶、淀粉粒、分泌组织碎片等。有时胚乳细胞也是鉴别依据。如砂仁等。 九、全草类药材 大多为草本植物的地上部分、少数为带根的全株。全草类包括了草本植物药的各个部位;除草质茎外,其他前文均已沦述。草质茎与木质茎药材粉末的主要区别在于:机械组织较少,导管直径较小; 一般无木栓组织:绿色薄壁组织较多:毛茸多见。表皮角质层纹理、气孔较明显,如麻黄的哑铃状特异型气孔是该药的重要鉴别特征。 十、菌类药材 大多以子实体或菌核的形式入药。无淀粉粒和高等植物的显微特征。观察时应注意菌丝的形状、有无分枝、颜色,大小;团块、孢子的形态:结晶有无及形态、大小与类型。 十一、动物类药材 因药用部位不同,有动物体、分泌物、病理产物和角甲类之分。 动物全体应注意皮肤碎片细胞的形态与色素颗粒的颜色。分泌物和病理产物应注意团块的颜色及其包埋物的性质特征,表皮脱落组织,毛茸及其他细胞的形状、大小、颜色等特征,如麝香、牛黄等。 角甲类药材应注意碎块的形状、颜色、横断面和纵断面观的形态特征及色素颗粒颜色,如羚羊角等。 十二、矿物类药材 除龙骨等少数化石类药材外,一般无植(动)物性显微特征。主要应注意晶体的大小,直径或长径;晶形的棱角、锐角或钝角;色泽、透明度、表面纹理及方向、光洁度;偏光显微镜下的特征等,如朱砂、石膏、雄黄等。 第二节 中成药显微鉴别要点 一、了解剂型制法,熟悉组方药材 了解剂型和制法,熟悉处方中组成药物的显微特征是中成药鉴别的基础。中成药的显微鉴别与中药材粉末显微鉴别相比要复杂得多,因为中成药一般多由二味以上中药材采用多种方法制备而成。制备方法的不同对显微鉴别会产生一定的影响。而且组成药物及各种辅料的显微特征还会出现相互影响和干扰。在对中成药鉴别前,首先要尽可能地了解该药的剂型和制法,分析可能检出的药物有多少。例如牛黄解毒丸中的8味药都是原粉人药,均可检出。在牛黄解毒片中,黄芩、桔梗,甘草3味药为煎汁投料,这些药便看不到各自的显微特征,不能检出。应视具体情况做具体分析,不可一概而论。 赋形剂常使用淀粉的种类有玉蜀黍、木薯、小麦、米及马铃薯。 对于组成药物的显微特征,可分出熟悉的、基本熟悉的和不熟悉的3类,只有熟悉之后,方可灵活应用。对于不熟悉的特征,必须先对照药材粉末进行研究,将粉末药材的主要特征制作标准彩色图版,以供对照观察之用。 二、排除交叉干扰,明确专属特征 排除交叉干扰,确定专属性特征是中成药鉴别的关键。在对各组成药物粉末分析比较观察时,分析处方,选取各药在中成药中的专属性特征,作为鉴别依据。因此,单一药材粉末的主要特征在成药中有时不一定能作为鉴别依据,而某些较次要特征有时则可起到鉴别作用。选取各组成药物显微特征时要考虑到2点:一是所选特征在该处方中的专属性;二是该特征尽可能在处方外的中药中也要有专属性。一般地说,每味组成药选取1个能代表该药的专属特征即可,如果该特征与其他组成药的类似组织,细胞、内含物或赋形剂有交叉。则应选取其他特征。如果改换其他特征亦较难时,可考虑增加1个—二个辅助性特征;但要本着少而精的原则,避免繁乱。 三、熟练正规操作,确保结果准确 显微鉴别与一般的仪器分析方法相比,受主观因素影响较大,对操作者来说,不仅要有扎实的生药学理论基础,还要有娴熟的显微观察技能和摄影技术。 每个样品应制5枚标准片,先重点观察后,再纵向扫描观察30行,每次观察幅宽约0.5mm(有的显微镜可通过自动移动装置控制)。一般可在100-400倍下照相记录,含细胞后含物较多者,制片静置一周后应复查制片的稳定性。 关于各种显微特征的量度测定,一般应取20个测量其平均值,力求客观。因此,在中成药中的显微特征的量度值与药材原粉中测量的数值不—定完全相同,但大都在原粉末量度值范围内。 还应指出的是,中成药的显微鉴别,分为已知组成样品和未知组成样品2类,以上所及仅为已知处方的样品。至于未知组成样品的鉴别,难度相应增大。但只要掌握大量的单味药粉末显微特征,积累丰富的鉴别经验,同样可以逐步解决。鉴别时,为方便观察,还应考虑多种手段的应用。如某些特殊的组成药材,粉末显微特征不易确定,可用微量升华的方法来解决,如冰片等。 偏光显微镜在中药显微鉴别中的应用 中药材粉末的偏光特征: 偏振光显微镜(p01arizing microscope)简称偏光显微镜。与普通的明视野显微镜相比,偏光显微镜利用了自然光在通过各向异性透明体(如方解石等)时,可产生偏振光的作用原理,在构造上增加了2个尼科尔棱镜(Nicol Prism)或2块人造偏振片。一块置于光源和待检物之间,作为“起偏振器’;另一块置于物镜和目镜之间,作为“检偏振器”。只要旋转二者之一,使彼此互相垂直,便可起到“熄光”作用,形成一个暗背景。当样品为“各向异性”的物质时,可使来自于聚光器的平面偏振光线,发生少量的分离与旋转,在到达检偏振器时不被熄灭,呈现出不同的色彩。如果偏振光光线在通过“各向同性’的样品时,则最终呈现为暗视野。 偏振光显微镜往常用于淀粉和晶体物质的观察。有关矿物类及化学医药晶的偏光显微特征已有比较深入的研究,近来的研究表明,大多数植物、动物、矿物类的药材粉末,也可在不同程度上反映出“各向异性的性质”。因此,利用此种特征,可供中药粉末显微鉴别参考。通过普通显微镜和偏光显微镜的对照观察,可使中药和中成药显微鉴别的速度和准确性大为提高。偏光显微镜的应用,还为计算机图像处理提供了方便。 在偏振光显微镜下,某些药材的鉴别要素在色彩上表现出一定的变化,这主是是由于观察时光源及滤片所造成的,只要观察条件固定,在偏振光显微镜下反映出的中药粉末色彩特征基本是稳定的。本实验观察,均是在不染色、不透化的条件下完成的。 偏光显微镜配件简单,无需重新购置高档显微镜,只要在现有的显微镜上增加一套偏光装置即可。此法易于推广,特别适用于基层药检部门。 一、植物类药材 1、淀粉 根及根茎类药材中常含有淀粉,作为赋形剂,其在中成药制剂中出现的频率最高,也是显微鉴别的重点之一。 2、草酸钙结晶 草酸钙结晶作为后含物存在于植物的不同器官,类型多样,除针晶、砂晶、方晶、棱晶、片晶、柱晶等单晶以外,针晶束、簇晶、砂晶团等亦常见。 3、石细胞 石细胞在植物体内广为分布,单独或成群散在,表面的孔沟、层纹木化程度均有很好的鉴别意义。偏光显微镜下细胞壁多呈亮黄色或亮橙黄色。 4、纤维 纤维在根、根茎、木部、皮部最为常见,是鉴别中药材的重要指标之—。偏光显微镜下,细胞壁及内含物,呈强弱不同的色彩。 5、导管 导管广泛存在于植物的各个器官。其类型和形态在不同种类的植物中存有差异。偏光显微镜下,导管呈强弱不同的色彩。 6.其他 非腺毛,气孔、后含物等也可呈现出不同的偏光特性。 二、动物类药材 动物的骨碎片、肌纤维、结晶状物、毛茸等也可呈现出不同的偏光特性。 三、矿物类药材 多数矿物性物质具有偏光特性,在常用中药的矿物性组份中可属常见。
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