RNA的提取

组织提取RNA准备：实验前一天需要匀浆器钻头浸入消毒酒精过夜，配置DEPC水（500ml水加入500μlDEPC母液，剧烈摇晃使其混匀），将所用7ml离心管、EP管、纱布、镊子泡起来过夜，再配置500mlDEPC水，实验前三个小时，将上述管子和DEPC水高压。匀浆前用压过的DEPC水匀浆二次洗钻头，高压消毒纱布（擦桌子）、氯仿（CHCL3）、异丙醇（IAA）、无水乙醇、无RNA的H2O（压过的DEPC水）步骤：除特殊说明外，其余均在15-30℃操作。组织称重（50-100mg）加入1mlTrizol匀浆（室温、5min，使核酸蛋白复合物完全分离）取匀浆样品1ml/EP管每管加入200μlCHCL3/mlTrizol剧烈震摇15s室温放置2-3min4℃，10000g，离心15min小心移出水相约600μl至新的EP管加苯酚（phenol）CHCL3、异丙醇（IAA）等体积混合，颠倒混匀4℃，10000g，离心10min移上清约500μl加CHCL3/IAA等体积混合颠倒混匀4℃，10000g，10min移上清，加500μlIAA/mlTrizol,吹吸混匀室温放置10分钟4℃，10000g，离心10min弃上清，加1ml无水乙醇洗（晃起来即可）4℃，7500g，离心5min再用无水乙醇洗一次4℃，7500g，离心5min弃上清，airdry，5-10min（放抽屉里进行，如果进行后续的PCR，需要放置在冰上）50-100μlDEPC水溶解RNA（55℃水溶，5-10min）测定：取5μl，溶于1mlDEPC水中，测纯度及浓度（即稀释200倍测定）比值在1.8-2之间，说明纯度很高。