糖尿病治验2则

原代细胞分离技术 原代细胞分离技术 3取人或动物体内(或胚胎)的组织，将其剪碎至1mm的组织块，再采用的如下方法进行分离培养: 一、悬浮细胞的分离方法 1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。 2、去掉上清，离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。 3、用培养基重悬，调整适当细胞浓度后分瓶培养。 4、如选用悬液中某种细胞，可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 (一)机械分散法 1、纤维成分很少的脑组织，部分胚胎组织，用剪刀剪碎至1mm3的组织块。 2、用PBS清洗两次后 ?用吸管吹打，分散组织细胞。 ?或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内(用九号针)，使细胞通过针头压出。 ?或在不锈钢纱网内用钝物(注射器钝端)压挤使细胞从网孔中压挤出。 3、收集细胞转入离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。 4、去上清，加入含血清的培养基，重悬后移至培养瓶中培养。 (二)消化分离法 1、酶消化分离法(过夜冷消化法) ?细胞间质较少的软组织，如肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等，用Hanks液清洗组织三次，剪成碎块大小为4毫米左右。 ?再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪组织。 ?加入0.25%的胰蛋白酶，摇匀后放4?过夜。 ?次日再用Hanks液洗涤，弃去上清，共洗2-3次。 ?加入少量含血清的培养基吹打分散，细胞计数，按适当的浓度分瓶培养。 www.pricells.com.cn 2、非酶消化法(EDTA消化法) ?把组织块剪碎，呈1mm3大小的组织块。 ?将碎组织块在平皿中用无钙镁PBS洗2-3次。 ?加入消化液(胰蛋白酶或胶原酶或EDTA)于37?水浴中作用适当时间(中间可轻摇1~2次)，若组织块膨松呈絮状可终止，若变化不大可更换一次消化液，继续消化直至膨松絮状为止。 ?弃去上清，加入含有钙、镁离子的培养基中止消化反应，并洗涤2-3次后，加入完全培养基。 ?用吸管吹打，使细胞充分散开后用纱网过滤后分瓶培养。 PriCells 提供: 1. 各种原代细胞特制基础培养基; 2. 各种原代细胞培养特制添加剂; 3. 原代细胞分离试剂盒; 4. 原代细胞鉴定试剂盒; 5. 原代细胞转染试剂盒; 6. 原代细胞总蛋白质抽提物; 7. 原代细胞总RNA; 8. 原代细胞总DNA; www.pricells.com.cn