外源性白细胞介素10对梗阻性黄疸大鼠肝再生的作用

仪测 定不同时间点血清TBil、DBil、ALT和AST含量。 4．实时荧光定量PCR法检测肝组织TGF一日1 mRNA表达：按照总RNA抽提试剂盒说明书提取 肝组织总RNA。紫外分光光度计测定纯度并定量。 取RNA2弘g逆转录成eDNA，以口一aetin为内参照 进行PCR扩增。根据GenBank基因序列自行设计 引物。p-aetin引物序列：上游引物5'-GGAGAT— TACTGCCCTGGCTCCTA一3’。下游引物5，_ GACTCATCGTACTCCTGCCTGCTG一3’，产物长 度150bplTGF—Bl引物序列；上游引物5’一 AGGGCTTTCGCTTCAGTGCT一3’，下游引物5’一 CCATGAGGAGCAGGAAGGGT一3’，产物长度 141bp。扩增条件：95℃预变性10s，60℃退火 20s，72℃延伸20s，共45个循环。在退火阶段收 集特异性荧光信号．采用z一△△c‘法计算TGF一81 mRNA相对表达量¨J。 5．免疫组织化学SP两步法检测肝细胞PCNA 标记指数：石蜡切片常规脱蜡至水，3％H。0：溶液 消除内源性过氧化物酶活性，0．1mot／L构橼酸盐 缓冲液微波修复抗原。正常山羊血清封闭非特异性 抗原后，滴加兔抗大鼠PCNA多抗(1；150)，二抗， DAB显色，苏木素复染封片。PBS代替一抗作对 照，检测肝细胞PCNA标记指数表达情况。PCNA 以细胞核呈界限清楚的棕黄色反应为阳性。每张切 片随机计数5个400倍视野，以平均每100个细胞 中含阳性细胞个数作为肝细胞PCNA标记指数。 6．统计学处理：所有实验数据均以彳士s表示。 组间比较采用SPSS17．0统计软件进行单因素方差 分析(One-wayANOVA)。P<0．05为差异有统计 学意义。 结 果 1．术后一般情况及取材肉眼所见：大鼠胆总管 结扎术后1d出现尿色加深。术后2d出现皮肤及 巩膜黄染，大便颜色变浅。取材时可见肝脏呈淤胆 状．颜色由暗红转为棕黄色；结扎处近肝脏侧胆总管 明显增粗，直径由正常的1mm增至3～5mm不 等。SO组大鼠无上述梗阻性黄疸表现(图1)。 z．肝功能指标的检测：胆总管结扎术后3d，与 SO组相比，0J组血清胆红素和转氨酶水平均显著 升高(尸O．05，表1)。 3．肝组织TGF—B1tuRNA的表达：胆总管结扎 术后3d，与SO组相比，oJ组肝组织TGF一81 mRNA表达水平显著升高(P