第二套梅毒旋体抗体诊断试剂国家参考品的研制

【诊断制品 】 第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品的研制 曾明 　王薇 　幺山山 　王斌 　蒋志宾 　计国欣 【摘要 】　目的 　研制第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品。方法 　从国内 11省市几十万名供血员中筛选出 871份样品 ,以多种试剂对其进行复核 ,对备选参比品样品再进行免疫荧光吸收法 ,并对人类免疫缺陷病毒抗体、乙型肝 炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体、类风湿因子及非特异性抗体进行检测。根据样品复检及确证结果 ,选定 30份样品 ,分装并分 发至 11个实验室 ,进行会同标定。结果 　已制备出第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品 ,并建立了相应的质量标准。 结论 　第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品已被国家有关部门批准正式使用。 【关键词 】　梅毒螺旋体 ;抗体 ;诊断试剂 ;国家参考品 　　为控制梅毒螺旋体抗体诊断试剂质量 ,我国于 2001年建立并使用了第一套国家梅毒螺旋体抗体 质控参考品及相应的质量标准。考虑到当时样本收 集的局限及制备参考品的经验不足等因素 ,我们研 制了第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品 , 以进一步提高我国梅毒螺旋体抗体诊断试剂质量。 材料与方法 11样品来源 样品分别从国内 11个省市几十万名供血员中 进行筛选。根据初筛的结果及样品体积 ,确定了 871份血浆大样 ,编号后装入血浆瓶 ,同时分装出中 样和若干套小样 ,将样品放入 - 20℃冰箱。每次检 测用一套小样 ,大样不再融化。 21试剂 上海科华生物工程股份有限公司、北京现代高 达生物技术有限责任公司、北京万泰生物药业有限 公司、北京耀华生物技术有限公司、北京金豪制药有 限公司、北京金伟凯医学生物技术有限公司、吉比爱 生物技术有限公司、华美生物工程公司、丽珠集团丽 珠试剂厂、中山生物工程有限公司、英科新创 (厦 门 )科技有限公司、上海荣盛生物技术有限公司生 产的梅毒螺旋体抗体酶联免疫测定试剂 ;日本 Fu2 jirebio Inc. 生产的 TPPA诊断试剂 ;上海科华生物工 程股份有限公司生产的丙型肝炎病毒抗体诊断试 剂、乙型肝炎病毒面抗原诊断试剂 ;丽珠集团丽珠 试剂厂生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂 ;军 事医学科学院生产的梅毒荧光抗体吸收试剂、类风 作者单位 :中国药品生物制品检定所诊断室 (北京 100050) . 通讯作者 :曾明 , E2mail: ZengM ing@263. net 湿因子检测试剂和台湾荣睿梅毒特异性抗体检测板 等。 31样品的复核和确证 对所选出的 871份大样 ,均用以上试剂 ,严格按 操作进行检测 ,根据 A 值 ,确定了一定比例 的强阳性、中等强度阳性、弱阳性及阴性的 90份血 清。对此 90份血清继续用以上所有国产梅毒螺旋 体抗体试剂盒及国内注册的国外试剂进行复核检 测 ,进而确定了一定比例的强阳性、中等强度阳性和 弱阳性及阴性的 60份血清。对此 60份可能入选样 品再进行免疫荧光吸收法检测 (由军事医学科学院 五所协助完成 ) ,并对梅毒非特异性抗体、人类免疫 缺陷病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗 体和类风湿因子等进行检测。根据复核及确证实验 的结果 ,确定了 35份样品 ,并对此 35份血清再次进 行复核及确证检测。 41会同标定 根据样品再次复检及确证结果 ,将选定的 30份 样品分装 ,并分发给国内外各诊断试剂生产单位及 实验室 ,进行会同标定。要求各单位用批批检定合 格的试剂对样品进行检测 ,并将结果反馈至我实验 室。收到各单位会同标定结果后 ,立即将我室对该 样品的检测结果告知参加会同标定的单位 ,要求各 单位对我实验室的检测结果进行复核 ,并对本单位 的试剂进行改进。根据样品确证、复核及会同标定 的结果 ,考虑了样本来源和阳性参比品样本组成比 例 ,在阴性参比品中选择几份高值阴性样本以控制 试剂的假阳性率 ,并增加了 4份系列稀释的灵敏度 样品以控制最低检出量 ,同时增加 1份中等偏弱阳 性的样品 ,用作精密度样品 ,确定了第二套梅毒螺旋 体抗体诊断试剂国家参比品。 ·793·中国生物制品学杂志 2006年 7月第 19卷第 4期　Chin J B iologicals July 2006, Vo1. 19 No. 4 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 结 　　果 11参考品的复核及确证检测 111　复核 :对 90份血清用所有国产检测梅毒 螺旋体抗体试剂盒及国内注册的国外试剂进行检 测 ,部分结果见表 1。 112　确证 :根据复检结果 ,对可能入选的 35份 样品再进行免疫荧光吸收法检测 ,并对人类免疫缺 陷病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体 进行了检测 ,结果见表 2。 21会同标定 根据样品复检及确证结果 ,将选定的 30份样品 分装 ,并分发给各单位。各单位检测结果见表 3和 表 4。 表 1　第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品的复核 检测 血样 各厂家检测试剂 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 TPPA TP018 + + + - + + + + + + + TP039 + + + + + + + + + + + TP109 + + + + + + + + + + + TP121 + + + + + + + + + + + TP852 + + + + + + + + + + + TP151 + + + + + + + + + + + TP218 + + + + + + + + + + + TP720 + + + + + + + + + + + TP870 + + + + + + + + + + + TP331 + + + + + + + + + + + TP060 - - - - - - - - - - - TP068 - - - - - - - - - - - TP071 - - - - + - - - - - - TP073 - - - - + - - - - - - TP078 - - - - - - - - - - - TP091 - - - - - - - - - - - TP102 - - - - + + - - - + - TP104 - - - - - + - - - - - TP110 - - - - - + - - + - - TP111 - - - - - - - - - - - TP123 - - - - - - - - - - - TP134 - - - - - - - - - - - TP135 - - - - - - - - - - - TP145 - - - - - - - - - - - TP146 - - - - - - - - - - - TP206 - - - - - - - - - - - TP318 - - - - - - - - - - - TP352 - - - - - - - - - - - TP408 - - - - - - - - - - - TP768 - + - - - - - - - - - 　　31参比品的组成及判断标准 第二套参比品由 35份样品组成 : 10份阳性样 品 ,编号为 P1～P10; 20份阴性样品 ,编号为 N1～ N20; 4份灵敏度样品 ,编号为 L1～L4; 1份精密度样 品 ,编号为 CV。其中阴性、阳性样品全部为原液血 浆 ,灵敏度样品 L4为 5份阴性血浆混合液 , L1～L3 为用不同倍数稀释的梅毒阳性血浆 ,精密度样品为 1份中等偏弱阳性血浆。其合格标准见表 5。 表 2　第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品的确证 检测 样品 各种抗体检测试剂 TPPA FTA2 ABS 抗 2 HCV 抗 2 HB sAg 抗 2 H IV RPR TRUST RF TP018 + + - - - + + - TP039 + + - - - + + - TP042 + + - - - + + - TP109 + + - - - + + - TP121 + + - - - + + - TP766 + + - - - + + - TP852 + + - - - + + - TP149 + + - - - + + - TP151 + + - - - + + - TP218 + + - - - + + - TP720 + + - - - + + - TP760 + + - - - + + - TP870 + + - - - + + - TP197 + + - - - + + - TP331 + + - - - + + - TP060 - - - - - - - - TP068 - - - - - - - - TP071 - - - - - - - - TP073 - - - - - - - - TP078 - - - - - - - - TP091 - - - - - - - - TP102 - - - - - - - - TP104 - - - - - - - - TP110 - - - - - - - - TP111 - - - - - - - - TP123 - - - - - - - - TP134 - - - - - - - - TP135 - - - - - - - - TP145 - - - - - - - - TP146 - - - - - - - - TP206 - - - - - - - - TP318 - - - - - - - - TP352 - - - - - - - - TP408 - - - - - - - - TP768 - - - - - - - - ·893· 中国生物制品学杂志 2006年 7月第 19卷第 4期　Chin J B iologicals July 2006, Vo1. 19 No. 4 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 表 3　各单位第一次会同标定结果 检测结果 检测单位 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 TPPA 假阳性 1 3 2 0 4 2 5 4 2 5 假阴性 0 0 2 3 0 1 2 0 0 0 阳性符合率 10 /10 9 /10 10 /10 8 /10 7 /10 10 /10 9 /10 8 /10 10 /10 10 /10 10 /10 10 /10 阴性符合率 20 /20 20 /20 17 /20 18 /20 20 /20 16 /20 18 /20 15 /20 16 /20 18 /20 15 /20 20 /20 灵敏度 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 表 4　各单位第二次会同标定结果 检测结果 检测单位 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 TPPA 假阳性 0 2 1 0 4 1 0 0 2 5 假阴性 0 0 1 3 0 1 0 0 0 0 阳性符合率 10 /10 10 /10 10 /10 9 /10 7 /10 10 /10 9 /10 10 /10 10 /10 10 /10 10 /10 10 /10 阴性符合率 20 /20 20 /20 18 /20 19 /20 20 /20 16 /20 19 /20 20 /20 20 /20 18 /20 15 /20 20 /20 灵敏度 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 4 /4 表 5　第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂参考品的合格标准 参考品 份数 合格标准 阴性 20 阴性 20 /20 阳性 10 阳性 10 /10 灵敏度 4 L1阳性 L2阳性 L3阳性或阴性 L4阴性 精密度 1 CV≤15% ( n = 10) 41有效期及稳定性 有效期暂定 3年。每年进行检测 ,确定作为参 考品的样品反复冻融 3次后 ,结果仍能达到要求。 讨 　　论 本套参考品的研制历经 4年时间 ,具有以下特 点 : ①样品选材广泛 ,具有地域代表性。②阳性参比 品由强、中、弱阳性样本组成 ,以控制诊断试剂的敏 感性。③选择几份高值阴性样本 ,以控制诊断试剂 的特异性。④增加 4份系列稀释的灵敏度样品 ,以控 制诊断试剂的最低检出量。⑤增加 1份中等偏弱阳 性样品 ,用作精密度样品 ,以控制诊断试剂的重复性。 本参考品对抗梅毒螺旋体抗体诊断试剂的质量 提出了基本的合格标准 ,该标准的制订首先考虑到 理论方面的要求 ,即根据目前对梅毒螺旋体病原体 及其感染的了解 ,抗梅毒螺旋体特异性抗体诊断试 剂应达到的标准 [ 1, 2 ] ;同时考虑到目前梅毒螺旋体 抗体诊断试剂存在的问题 ,旨在促进其质量进一步 提高。 研制本参考品的过程 ,也是考察国内及进口诊 断试剂现状的过程。10家国内及 1家国外厂家共 同参与两次会同标定 ,结果显示 ,日本 Fujirebio Inc. 生产的诊断试剂均符合标准。国内各厂家在第一次 标定时 ,均出现阳性符合率或 /和阴性符合率不达标 现象 ,经过调整 ,第二次会同标定达标率有所上升 , 但仍未全部达标。这一结果显示 ,国产诊断试剂的 灵敏度和特异性较国外试剂仍有一定差距。当用国 内外试剂多次重复检测同一份样品时 ,发现当时的 国产诊断试剂重复性及抗干扰能力较国外试剂也存 在差距。为此 ,我们在这套参考品的样品选择及标 准制订中 ,对这些问题都给予了适当重视 ,以期通过 这套参考品 ,引导国产梅毒螺旋体抗体诊断试剂质 量进一步提高。第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国 家参考品已被国家有关部门批准自 2006年 1月 1 日起正式使用。 参 　考 　文 　献 [ 1 ] Larsen SA, Steiner BM, Rudolph AH. Laboratory diagnosis and inter2 p retation of tests for syphilis. Clin M icrobiol Rev, 1995, 8 (1) : 1221. [ 2 ] Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, et al. Manual of clinical m icro2 biology 8 th edition. W ashington: ASM Press, 2003. (收稿日期 : 2005210209) ·993·中国生物制品学杂志 2006年 7月第 19卷第 4期　Chin J B iologicals July 2006, Vo1. 19 No. 4 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net